人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型構(gòu)建用瘤細胞制備裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型構(gòu)建用瘤細胞制備裝置，屬于醫(yī)學影像學技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]胰腺癌是一種極為兇險、高度惡性的消化道腫瘤，近年來其發(fā)病年齡呈現(xiàn)明顯年輕化趨勢。據(jù)美國國立衛(wèi)生研宄院報道其發(fā)病率與死亡率接近1:1。受胰腺解剖學及生物學特征等因素的影響，確診時多數(shù)已是晚期，手術(shù)切除的機會只有15%?20%甚至更低，而且術(shù)后易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。早期診斷是改善胰腺癌預(yù)后的關(guān)鍵因素，目前尚缺少一種無創(chuàng)性早期診斷和監(jiān)測療效的有效方法。目前臨床上常用化療藥物聯(lián)合中藥進行治療，治療藥物、治療方案很多，但是尚不能夠在分子影像水平上有效評價藥物療效。近年來，分子影像學已經(jīng)成為胰腺癌診治的新方向，其應(yīng)用日趨廣泛，其中以超微超順磁性納米氧化鐵顆粒(USP1)為基礎(chǔ)的磁共振分子影像是一個極具潛力的研宄方向，USP1是一種高效的實體瘤磁共振成像對比劑，它有區(qū)分腫瘤組織和正常組織的能力，這使得他們在某一種組織(腫瘤或者正常組織)中聚集更多，從而導(dǎo)致該處T2磁共振信號強度減低，產(chǎn)生強化對比的效果。以超微超順磁性納米氧化鐵顆粒(USP1)為基礎(chǔ)的磁共振分子影像最重要的一個步驟就是構(gòu)建人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型。具體為:1.人胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1、BxPC-3的培養(yǎng):PANC-1細胞采用含10%進口胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基；BxPC_3細胞采用含10%進口胎牛血清的RPM1-1640培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件均為37°C、飽和濕度、5%二氧化碳。細胞呈貼壁生長。兩種細胞每3-4天按1: 2傳代I次。2.收集細胞懸液:對數(shù)生長期的上述細胞，在超凈工作臺內(nèi)倒去培養(yǎng)基，用無菌PBS清洗2次，每個培養(yǎng)瓶加入3ml 0.25%胰酶消化液，待細胞變圓后倒去消化液，加入3ml培養(yǎng)基終止消化，用滴管伸入培養(yǎng)瓶反復(fù)吹打瓶壁后，將細胞懸液移入50ml離心管內(nèi)。以100rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，棄去上清培養(yǎng)基。用無血清培養(yǎng)基將細胞懸起，調(diào)整活細胞濃度至108/ml。3.大白兔皮下接種瘤細胞:用Iml注射器吸取細胞懸液，于大白兔右下腹部皮下注射細胞懸液10uL(即1X107個細胞/只)。使用PANC-1細胞懸液接種大白兔5只，使用BxPC細胞懸液接種大白兔5只。3_4周后腫瘤體表直徑長至約Icm時用于下一步實驗。4.利用磁共振T2map和T2*map技術(shù)測定腫瘤組織的橫向弛豫時間(T2和T2*)，通過彌散加權(quán)成像(DWI)測定其表觀彌散系數(shù)(ADC)，以及氫磁共振波譜分析(IHMRS)測定腫瘤組織內(nèi)主要代謝物波譜。將腫瘤組織的橫向弛豫時間、表觀彌散系數(shù)、代謝物峰值比和峰下面積比與其病理HE染色和免疫組化指標(Cyclin Dl增殖染色、以及Hoechst和Tunel凋亡染色)進行對照分析，研宄胰腺癌的微觀病理改變，包括細胞外間隙，凋亡和增殖等與MRI之間的關(guān)系。以上步驟中，人胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1、BxPC-3的培養(yǎng)最為關(guān)鍵和基礎(chǔ)，目前所有人胰腺癌細胞株的培養(yǎng)均需要在超凈工作臺上進行，需要的藥品多，花費大，操作繁瑣，而且經(jīng)常造成較大的浪費，用不完的細胞就會被丟棄掉。因此如何研宄出一種可以在外界進行操作、費用低廉的瘤細胞培養(yǎng)制備裝置成為急需解決的一大難題，所以在培養(yǎng)瘤細胞時，將培養(yǎng)的細胞置于適宜的生長條件中，在裝置外操作內(nèi)部的部件，發(fā)明一種人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型構(gòu)建用瘤細胞制備裝置是必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服現(xiàn)實細胞培養(yǎng)過程中所有人胰腺癌細胞株的培養(yǎng)均需要在超凈工作臺上進行，需要的藥品多，花費大，操作繁瑣，而且經(jīng)常造成較大的浪費的難題，本發(fā)明提供了人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型構(gòu)建用瘤細胞制備裝置，該種人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型構(gòu)建用瘤細胞制備裝置，首先能夠?qū)⒓毎苽淦骶咧糜趦?nèi)部，避免了與外界接觸的可能。其次，蒸汽發(fā)生器產(chǎn)生的蒸汽溫度較高，能夠在使用前對裝置內(nèi)部進行消毒，而且可以通入皿底蒸汽加熱層，加熱培養(yǎng)板內(nèi)的水，為培養(yǎng)的細胞提供適宜的生長溫度。再次，凹面培養(yǎng)皿可以借助重力，將攪拌吸取器刮取下來的瘤細胞自動聚集在凹面培養(yǎng)皿底壁中央，能夠自動進行傳代，省卻了用離心機聚集細胞的操作，讓制備的細胞不受水解酶和高速離心帶來的傷害。攪拌吸取器在攪拌的同時，與注射器結(jié)合，能夠快速高效地將制備好的瘤細胞用于人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型的構(gòu)建，從而達到減少藥品使用量、降低花費，簡化操作的目的。
[0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:
[0005]本發(fā)明人胰腺癌大白兔胰頭移植瘤模型構(gòu)建用瘤細胞制備裝置由口 1、斜嘴2、口頸3、體4、攪拌吸取器5、控液流閥6、體腔7、培養(yǎng)板8、側(cè)液管9、凹面培養(yǎng)皿10、終液管11、皿底蒸汽加熱層12、皿底蒸汽散熱孔13、輻液管14、皿底孔15、液流閥16、主液管17、進皿底蒸汽管18、下板導(dǎo)汽管19、上板導(dǎo)汽管20、蒸汽發(fā)生器21、加熱產(chǎn)汽艙22、控制板23、電源線24、電源線插頭25、水箱26、水管27、間隔板28、水箱注水口 29、培養(yǎng)皿腔30、培養(yǎng)板槽腔31、培養(yǎng)板槽壁32、培養(yǎng)皿凹底33、培養(yǎng)皿壁34、體頂壁35、控液流閥頭旋槽36、槽頂隔離膜37、控液流閥頭38、控液流閥桿39、控液流閥固爪40、吸取管頂封41、可動旋管42、轉(zhuǎn)板把手43、圓形轉(zhuǎn)板44、管板固定凸45、旋管軸承46、吸取管腔47、吸取管壁48、傳力齒輪49、攪動片支架50、攪動片51、吸取管口 52、針頭53、針管腔54、針管壁55、針管壁刻度56、針管壁擋57、推液管58、推液管頭59、針管凸60、細胞入管61、細胞吸取管62、注射器63構(gòu)成，其特征在于:所述的培養(yǎng)板8長度為6-18厘米，寬度為6-18厘米，高度為0.5-2厘米，包括凹面培養(yǎng)皿10、培養(yǎng)板槽腔31、培養(yǎng)板槽壁32、皿底蒸汽加熱層12、主液管17、液流閥16、輻液管14、側(cè)液管9、終液管11。凹面培養(yǎng)皿10玻璃質(zhì)，上半部分圓筒形，由厚度為1-3毫米的培養(yǎng)皿壁34圍成，直徑為1-4厘米，高度為1-3厘米，所圍成的空間為培養(yǎng)皿腔30 ;下半部分為表面皿形的培養(yǎng)皿凹底33，培養(yǎng)皿凹底33底部中央到底面的最大高度為0.5-0.75厘米，底部中央的孔為皿底孔15，孔的直徑為3-10毫米，位于間隔板28上的皿底孔15與主液管17相通；位于體4底壁上的皿底孔15則被封住。培養(yǎng)板8上部為培養(yǎng)板槽壁32圍成的培養(yǎng)板槽腔31，槽壁玻璃質(zhì)，厚度為1-3毫米，高度為0.3-1.5厘米；培養(yǎng)板槽腔31，內(nèi)盛有水。培養(yǎng)板8下部為皿底蒸汽加熱層12，兩部分之間被設(shè)有皿底蒸汽散熱孔13的培養(yǎng)板槽腔31底隔開。皿底蒸汽散熱孔13多個，分布于凹面培養(yǎng)皿10之間。主液管17、液流閥16、輻液管14、側(cè)液管9和終液管11均是玻璃質(zhì)管道結(jié)構(gòu)，管徑均為2-3毫米。
[0006]所述的口 I在人胰腺癌組織塊放入后，用市售的無菌濾膜封住，圓形，直徑為2-5厘米。所述的斜嘴2兩端開口大小形狀相同，外端的開口為口 1，內(nèi)端的開口也是口頸3的外口，內(nèi)外口底緣中央的連線與水平面呈10-30°的夾角，壁厚1-3毫米。所述的口頸3后端從體4前端發(fā)出，上緣與體4上表面平齊，中央到斜嘴2的長度為1.5-3厘米；下緣與間隔板28平齊，中央到斜嘴2的長度為2-4厘米；玻璃質(zhì)，壁厚1-3毫米。所述的體4長方體形，長度為15-50厘米，寬度為8-24厘米，高度為6-18厘米，玻璃質(zhì)，壁厚1_3毫米。所述的體頂壁35是體4的頂面，上面分布著2個攪拌吸取器5和I個控液流閥6。體4內(nèi)的空間為體腔7，所述的體腔7前半部分被間隔板28分成上下兩部分，間隔板28玻璃質(zhì)，厚度為
1-3毫米，其上對應(yīng)每個皿底孔15處各有I個孔，孔的直徑為3-10毫米；所述的間隔板28前緣和I側(cè)緣均連接在體4側(cè)壁上，上面設(shè)置有I個培養(yǎng)板8，下方設(shè)置有I個水箱26和I個蒸汽發(fā)生器21。所述的水箱26的長度為4-12厘米，寬度為3-9厘米，高度為2_7厘米，與間隔板28之間的空間供主液管17穿行；水箱26 —側(cè)有一個直徑為2-5毫米的圓形的水箱注水口 29 ;水箱26另一側(cè)有I個直徑為2-5毫米的水管27，水管27在水箱26內(nèi)的開口位于水箱26底部。
[0007]所述的蒸汽發(fā)生器21圓筒狀，直徑為2-3厘米，高度為2-6厘米，包括進皿底蒸汽管18、下板導(dǎo)汽管19、上板導(dǎo)汽管20、蒸汽發(fā)生器21、加熱產(chǎn)汽艙22、控制板23、電源線24、電源線插頭25和水管27。電源線24和電源線插頭25是公知的可以將外界電源引入蒸汽發(fā)生器21的部件，電源線24為雙股包皮銅絲線，電源線插頭25為兩相或三相插頭。電源線24連接著控制板23