Vegfr3抑制劑的制作方法
【專利說明】VEGFR3抑制劑
[0001] 本發(fā)明涉及抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3 (VEGFR3)(又稱為Fms相關(guān)酪氨酸激酶 4 (FLT4))的2,4, 5-取代嘧啶、其制備方法以及含有所述化合物的藥劑或組合物。本發(fā)明還 涉及一種使用所述化合物來治療增殖性疾?。ㄈ绨┌Y）以及治療通過控制和/或抑制淋巴 管發(fā)生來改善的疾病的方法。
[0002] 背景
[0003] 在21世紀(jì)，癌癥仍然是死亡的主要原因。因此，目前將相當(dāng)大的藥物研究和開發(fā) 努力放在發(fā)現(xiàn)可為癌癥患者提供壽命延長(zhǎng)或治愈選擇的治療劑上。
[0004] 雖然存在許多不同種類的癌癥，每種癌癥表現(xiàn)出不同組的遺傳和生長(zhǎng)特性，但許 多實(shí)體癌類型的共同點(diǎn)是能夠轉(zhuǎn)移。腫瘤局限于身體的一個(gè)區(qū)域并且可通過手術(shù)介入和/ 或放射療法來控制，直到發(fā)生轉(zhuǎn)移。然而，轉(zhuǎn)移導(dǎo)致癌細(xì)胞擴(kuò)散至身體的不同部分并且雖然 手術(shù)介入可去除原發(fā)性腫瘤病變，但所有轉(zhuǎn)移性病變的去除極難控制。
[0005] 腫瘤轉(zhuǎn)移為多階段過程，其涉及分解細(xì)胞外基質(zhì)、浸潤(rùn)局部組織實(shí)質(zhì)、內(nèi)滲到局部 血管（regional blood vessel)和淋巴管中、在循環(huán)中存活并且最后在次生組織部位中外 滲、存活和生長(zhǎng)（Front. Biosci. (Elite 編著）· 2012 ;4 :1888-1897)。
[0006] 可通過血管或淋巴管發(fā)生轉(zhuǎn)移。在若干方面，淋巴管不同于血管。大集合淋巴管 在其壁中含有血管平滑肌細(xì)胞以及瓣膜，所述瓣膜防止淋巴液回流。然而，不像典型的毛 細(xì)血管，毛細(xì)淋巴管缺乏周皮細(xì)胞和連續(xù)基膜并且含有大的內(nèi)皮間瓣膜樣開口（J. Theor. Med. 2003 ;5 :59-66)。由于其更大的滲透性，毛細(xì)淋巴管比毛細(xì)血管在允許腫瘤細(xì)胞穿 過上更有效。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明正在生長(zhǎng)的腫瘤病變內(nèi)的淋巴管發(fā)生（新淋巴管的形成）促 進(jìn)通過淋巴管的轉(zhuǎn)移。淋巴管發(fā)生的控制為預(yù)防淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)具有吸引力的治療策略 (J. Clin. One. 2007 ;25 :4298-4307)。
[0007] 淋巴系統(tǒng)由毛細(xì)管和由內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)排列的較大的集合管構(gòu)成，其使外滲的流體 和大分子從胞間隙返回至血液循環(huán)。通過淋巴管轉(zhuǎn)移至區(qū)域淋巴結(jié)是許多癌癥類型共同的 腫瘤進(jìn)展過程。淋巴結(jié)累及程度為許多類型癌癥分期的主要決定因素并且為用作受影響的 淋巴結(jié)的手術(shù)介入和放射治療介入的基礎(chǔ)的重要預(yù)后因素。
[0008] 通過生長(zhǎng)因子VEGFC或VEGFD結(jié)合至其膜受體VEGFR3的分子信號(hào)傳導(dǎo)已顯示在 淋巴管發(fā)生過程中起到核心作用（Brit. J. Cancer 2006;94:1355-1360)。VEGFR3受體的 刺激通過磷酸化其細(xì)胞內(nèi)區(qū)域發(fā)生并且觸發(fā)驅(qū)動(dòng)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和分化從而導(dǎo)致 淋巴管形成的下游信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)（Exp. Cell Res. 2006 ;312 :575-583)。VEGFC或VEGFD的 表達(dá)增加已顯示促進(jìn)腫瘤相關(guān)的淋巴管發(fā)生，從而使淋巴介導(dǎo)的向區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移成為 可能。已針對(duì)若干不同腫瘤類型報(bào)道了這些觀察，包括結(jié)腸直腸癌（Oncol. R印.2009 ;22 : 1093-1100)、肺癌（Ann. Oncol. 2010;21:223-231)、胃癌（Surgery 2009;146:896-905)、 腎癌（Oncol. R印· 2008 ;20 :721-725)、前列腺癌（Clin. Cancer Res. 2004 ; 10 :5137-5144) 以及卵巢癌（Cancer 2004;101:1364-1374)。在嚙齒動(dòng)物中的若干腫瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，阻?VEGFC、VEGFD/VEGFR3介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)已顯示抑制淋巴管發(fā)生并且遏制淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（Ann. N. Y.Acad. Sci. 2008 ；113 ： ,225-234 ；Int. J. Cancer 2009 ；125 :2747-2756)〇
[0009] VEGFR3為在胚胎發(fā)生過程中廣泛表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞中的跨膜酪氨酸激酶受體 (Biochem. J. 2011 ;437 :169-183)。在發(fā)育后期，VEGFR3表達(dá)變得局限于發(fā)育淋巴管。在 成人中，VEGFR3表達(dá)主要局限于淋巴內(nèi)皮和⑶34+造血細(xì)胞的子集。另外，某些內(nèi)分泌器 官中的有孔毛細(xì)血管和靜脈以及單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和一些樹突細(xì)胞（DC)在成人中繼續(xù) 表達(dá)VEGFR3。小鼠胚胎中VEGFR3基因的破壞導(dǎo)致血管網(wǎng)絡(luò)形成失敗并且在胚胎第9. 5天 之后死亡（Biochem. J. 2011 ;437 :169-183)。這項(xiàng)觀察表明VEGFR3在胚胎脈管系統(tǒng)的發(fā)育 中起到關(guān)鍵作用。在癌癥中，VEGFR3在轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)和淋巴管瘤中的淋巴竇中過表達(dá)。此 外，在許多情況下，癌細(xì)胞自身表達(dá)VEGFR3。表達(dá)VEGFR3的癌細(xì)胞已顯示出其增殖依賴于 VEGFR3/VEGFC 信號(hào)傳導(dǎo)（Eur. J. Canc. 2011 ;47 :2353-2363)。
[0010] 基于上文，顯而易見，VEGFR3信號(hào)傳導(dǎo)的抑制具有作為用于哺乳動(dòng)物受試者的治 療策略的強(qiáng)烈可能，所述哺乳動(dòng)物受試者已被診斷患有特征在于表達(dá)這個(gè)受體的內(nèi)皮細(xì)胞 的增殖的疾病。在癌癥的情況下，靶向VEGFR3可能通過遏制淋巴轉(zhuǎn)移和遏制表達(dá)VEGFR3 的癌細(xì)胞的生長(zhǎng)而產(chǎn)生治療益處。
[0011] 有趣的是，并且從VEGFR3軸線內(nèi)的靶選擇觀點(diǎn)來看可能重要的是，在其中VEGFC 和VEGFD基因純合缺失的小鼠中，血液脈管系統(tǒng)正常發(fā)育，不像VEGFR3純合敲除小鼠的 胚胎心血管表型：即，這兩個(gè)配體的缺失與受體的缺失不相同（Mol. Cell. Biol. 2008 ;28 : 4843-4850)。這些數(shù)據(jù)提高了以下可能性：存在VEGFR3的另一個(gè)配體或VEGFR3可能夠通 過不依賴于其配體VEGFC和VEGFD的尚且未知的方式起作用。上文表明與單獨(dú)靶向VEGFC 或VEGFD相比，靶向VEGFR3對(duì)阻斷VEGFC/D-VEGFR3信號(hào)傳導(dǎo)更有利。
[0012] 雖然存在許多涉及具有各種水平的VEGFR3活性和選擇性的酪氨酸激酶抑制劑 的已報(bào)道的研究（Nat. Rev. Drug Discov. 2006 ;5 :835-844 ;Mol. Cancer Ther. 2007 ;6 : 2012-2021 ;Cancer Res. 2009 ;69 :8009-8016 ;Mol.Cancer Ther. 2012 ;11 :1637-1649)，但 這些研究在其它酪氨酸激酶上具有一些至少部分由抑制導(dǎo)致的限制。
[0013] 盡管如此，總體來說這些研究加強(qiáng)了以下結(jié)論：VEGFR3的抑制可遏制或減少淋巴 管發(fā)生和/或淋巴引起的轉(zhuǎn)移。
[0014] 因此，選擇性抑制VEGFR3的化合物將有用于治療增殖性疾病，如癌癥。
[0015] 如上所述，VEGFR3在淋巴管發(fā)生的控制上起到重要作用。因此，VEGFR3的抑制劑 可用于治療其中淋巴管發(fā)生的控制/抑制具有治療益處的除癌癥以外的疾病。淋巴系統(tǒng)在 慢性炎癥性疾病和移植排斥中起主要作用。通過遏制VEGFR3功能來抑制淋巴管發(fā)生可在 這些病狀中提供可行的治療策略。
[0016] 例如，臨床前研究已表明，VEGFR3在角膜和眼部表面中的表達(dá)在角膜新血管形成 過程中調(diào)節(jié)并且VEGFR3介導(dǎo)角膜樹突細(xì)胞至淋巴結(jié)的遷移和對(duì)角膜移植的免疫性的誘 導(dǎo)。其中在發(fā)炎和高度血管化的宿主床上進(jìn)行移植的高危角膜移植具有非常低的成功率， 其中排斥率高達(dá)90% (J. Leukoc Biol. 2003;74:172-178)。在臨床前模型中，用VEGFR3抗 體治療導(dǎo)致角膜移植排斥的顯著遏制（Nat. Med. 2004 ; 10 :813-815)。
[0017] 在眼睛的脈絡(luò)膜層中產(chǎn)生新血管的脈絡(luò)膜新血管形成（CNV)導(dǎo)致慢性炎癥， 所述慢性炎癥涉及年齡相關(guān)黃斑變性（AMD)的發(fā)病機(jī)理并且由包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因 子（VEGF)家族成員VEGFA和VEGFC的非控制表達(dá)的因素驅(qū)動(dòng)（J. Cell. Physiol. 2012; 227(1) :116-26)。已開發(fā)了靶向VEGFA的用于AMD的治療劑，例如抗VEGFA抗體蘭尼單抗 (ranibizumab)和貝伐單抗（bevacizumab)以及抗VEGF適體哌加他尼，但迄今為止還沒有 治療劑被臨床評(píng)價(jià)為通過調(diào)節(jié)VEGFC及其同源受體VEGFR3來介導(dǎo)作用。