一種從植物天然皂素無患子中提取分離無患子皂甙b的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物天然皂素的提取分離的方法，具體是指從無患子中提取分離無患子皂甙B的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]無患子(拉丁學名:Sapindus mukorossi Gaertn.)，無患子科無患子屬，多年生落葉喬木，原產(chǎn)于我國長江流域以南各地以、中南半島各地及印度和日本。相傳以無患樹的木材制成的木棒可以驅(qū)魔殺鬼，因此名為無患。而拉丁學名Sapindus是soap indicus的縮寫，意思是“印度的肥皂”，因為它那厚肉質(zhì)狀的果皮含有皂素，只要用水搓揉便會產(chǎn)生泡沫，可用于清洗，是古代的主要清潔劑之一。此外，除了清洗效用外，無患子還可以入藥，近期有研宄表明其具有消炎，殺菌，抗胃癌，胃潰瘍，生育抑制以及促進微量元素吸收藥用效果O
[0003]有文獻報道，從無患子科植物無患子中提取出的無患子皂甙類化合物，無患子皂甙B可有降壓、殺菌、以及溶血的作用。家兔0.04mg/kg皮下注射，可使血壓下降25%。對飼喂膽留醇的實驗性動脈粥樣硬化的兔，可降低膽留醇含量，降血壓，增加卵磷脂含量。目前，無患子皂甙B標準品在市場上的飽含量并不多，大部分研宄側(cè)重于無患子總皂甙的提取分離，且對于無患子皂甙B市場上并沒有統(tǒng)一的標準，從而對于無患子質(zhì)量的評價存在很大的分歧。
[0004]中國專利申請CN 1097764公開了一種從油患子外殼提取含有皂甙物質(zhì)溶液的方法，它包括油患子的干燥、脫殼、殼體粉碎、萃取(浸泡)、沉降、過濾、精餾等過程，最后可得到主要含有皂甙，還含有氨基酸、維生素，總有效物質(zhì)量為15-28% (wt%的水溶液產(chǎn)品，但該方法提取的無患子中為混合物，不能用于無患子皂甙B的單獨提取。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種從無患子中提取分離無患子皂甙B的方法。
[0006]本發(fā)明的上述目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
一種從無患子果皮中提取分離無患子總皂甙及無患子皂甙B的方法，包括以下步驟:
1)干燥、粉碎無患子果皮，用溶劑提取過濾，濃縮得浸膏；
2)浸膏合并后，加水溶解，經(jīng)大孔樹脂，以溶液洗脫，分得無患子總皂甙組分；
3)再經(jīng)由TLC及HPLC跟蹤確定，取步驟2含無患子皂甙B的洗脫部分進行硅膠柱層析，再進行凝膠柱層析，最終得到無患子皂甙B。
[0007]在本發(fā)明中，所述步驟I)中所述提取溶劑為醇類溶劑和水，優(yōu)選為C1-3的醇、更優(yōu)選為甲醇或乙醇；采用甲醇或乙醇浸提時，優(yōu)選三次提取，采用體積比為￠:5:4)的比例微沸提取，提取時間控制分別為微沸(3:2:1)小時；再所述過濾優(yōu)選為趁熱過濾，濃縮優(yōu)選在減壓條件下處理。
[0008]在本發(fā)明中，所述步驟2)中溶解浸膏的水優(yōu)選為體積為5-10倍的水，更優(yōu)選為5倍。使用HP-20大孔樹脂，洗脫劑為乙醇和水的混合溶劑，分別以乙醇體積比為0%，10%，20 %，30 %，40 %，50 %，60 %，70 %，80 %，90 %，100 %的乙醇-水混合溶劑進行梯度洗脫，，以TLC為指導分離，每梯度用洗脫液用量相同，一般而言約200ml。溶劑回收，循環(huán)使用。收集乙醇濃度為 O %，10 %，40 %，60 %，100 % 的組分，分別記為 FrO，F(xiàn)r I，F(xiàn)r2，F(xiàn)r 3，F(xiàn)r4。
[0009]在本發(fā)明中，所述步驟3)中，用以進行再次分離的步驟2的洗脫組分為Fr3組分。硅膠柱層析時使用的硅膠為100?300目，洗脫劑為氯仿:甲醇(體積比)為95:5?0:100，優(yōu)選采用如下濃度的洗脫劑洗脫:甲醇體積比為0，5 %，10 %，15 %，20 %，30 %，40 %，100% 的 MEOH-CH3Cl 混合溶劑;洗脫劑用量分別為 100ml ；200ml ； 200ml ； 200ml ； 200ml ；200ml ；200ml ； 100ml并分別以TLC及HPLC跟蹤指導下，不等體積地收集17個流分，分別標記為(Fr3.0，F(xiàn)r3.l，F(xiàn)r3.2，F(xiàn)r3.3，......，F(xiàn)r3.16)。合并 Fr3.11 和 Fr3.12 組分，采用凝膠柱層析為S印hadexLH-20，用甲醇/氯仿(I:1)等度洗脫。并分別以TLC及HPLC跟蹤指導下收集流分，分別標記為 Fr3.11-12-1，F(xiàn)r3.11-12-2，......Fr3.11-12-5。Fr3.11-12-3 即為無患子皂式Bo
[0010]無患子皂甙B屬于齊墩果烷型三萜皂甙，其極性小，在水中溶解性差，故本法采用先醇提再綜合配以大孔樹脂、硅膠、凝膠等分離手法，采用低極性洗脫液洗脫，后經(jīng)NMR檢測，得到高純度無患子皂甙B。
[0011]本發(fā)明的有益效果在于:該方法利用大孔樹脂分離、硅膠柱層析、凝膠柱層析以及配備以HPLC及TLC跟蹤指導分離等技術(shù)，從無患子中分離出純度達90%以上的無患子皂甙B產(chǎn)品。該方法操作簡便可控，獲得的產(chǎn)品雜質(zhì)少，純度高，制備的無患子皂甙B可作為無患子皂甙質(zhì)量標準的標準品，為無患子的質(zhì)量控制和進一步更合理的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0012]圖1為無患子皂甙B的結(jié)構(gòu)圖。
[0013]圖2為無患子皂甙B的1HNMR圖譜。
[0014]圖3為無患子皂甙B的13CNMR圖譜。
【具體實施方式】
[0015]實施例1
I)將無患子果皮干燥、粉碎，用80%乙醇一水溶液以1:6 ；1:5 ；1:4的料液比分別微沸浸提3h ;2h ;lh ;將浸提液過濾，旋干；溶劑回收，循環(huán)使用；三次浸提所得浸膏合并得總浸膏。
[0016]2)使用HP-20大孔樹脂分離，以5倍體積的水溶解浸膏，以水沖柱至流分無色，后分別以(10%?100% )乙醇-水梯度洗脫，以HPLC跟蹤，共先后收集乙醇濃度為(0%，10%，40%，60%，100% )，即(FrO?Fr4)共五組流分。分別減壓蒸餾溶劑回收循環(huán)使用。
[0017]3)對組分Fr3進行硅膠柱層析，使用的硅膠為200?300目，洗脫劑為氯仿/甲醇(100% 0，V/V)，梯度洗脫 ΜΕ0Η% (O ；5 ；10 ；15 ；20 ；30 ；40 ；100) % —CH3C1 體系(100 ；200 ；200 ；200 ；200 ；200 ；200 ； 100)ml 洗脫，分別不等體積收集(Fr3.0 ；Fr3.1 ；Fr3.2 ；Fr3.3 ；……；Fr3.16)16組流分。別以通過TLC配以碘及H2SO4 (20 %，火烤)顯色。合并Fr3.11?Fr3.12點，旋干，再用氯仿:甲醇