一種高壓聯(lián)合超聲輔助提取蘑菇中活性物質(zhì)的工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種對蘑菇中活性物質(zhì)的提取方法，具體為一種高壓聯(lián)合超聲輔助提取蘑菇中活性物質(zhì)的工藝，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，從天然產(chǎn)物中分離抗氧化劑和延緩衰老藥物的研宄引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，在這一領(lǐng)域已經(jīng)取得了較多的研宄成果，綜合國內(nèi)外的研宄報(bào)道，天然抗氧化活性成分主要來源于植物、真菌(菇類)、海洋生物等方面。其中研宄較廣泛的是植物來源的抗氧化活性成分，有研宄證明蘑菇的甲醇和水的粗提物具有自由基清除和抑制大鼠紅細(xì)胞溶血的作用，其含有的多糖可清除自由基，抑制超氧陰離子對紅細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化作用，以及對自由基引起的亞油酸、菜油氧化以及離體肝臟組織的脂質(zhì)過氧化均也有一定的抑制作用，因此，開發(fā)菇類子實(shí)體提取物及其多糖資源，從中篩選無毒或低毒的具有抗氧化活性的物質(zhì)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值，已成為研宄的熱點(diǎn)。
[0003]但目前的蘑菇活性物質(zhì)提取的方法提取時(shí)間較長，一般一個(gè)周期需要很久，且提取率不高，造成原料浪費(fèi)，不能快速高效的從蘑菇產(chǎn)品中提取活性物質(zhì)，因而需要進(jìn)一步改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對上述情況，為解決現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種高壓聯(lián)合超聲輔助提取蘑菇中活性物質(zhì)的工藝，其特征在于，其包括以下步驟:
[0005](I)原材料預(yù)處理:對原材料依次進(jìn)行清洗、切片和負(fù)壓脫水干燥；
[0006](2)粉碎:用組織搗碎機(jī)將負(fù)壓脫水干燥后的蘑菇片絞碎，并再次用負(fù)壓脫水干燥，得到實(shí)體粉末；
[0007](3)低溫脂提:按照一定比例加入石油醚，采用攪拌機(jī)攪拌一定時(shí)間，靜置8小時(shí)以上，采用濾紙過濾收集上清液，并重復(fù)操作4-5次，合并上清液；
[0008](4)濾渣加壓:將步驟(3)中濾紙濾下的濾渣加入一定濃度的氯化鈉溶液，混合均勻后加入高壓袋內(nèi)，密封，并向所述高壓袋內(nèi)快速加壓到200-300MPa，然后保壓一定時(shí)間，然后快速卸壓，卸壓完畢后再重復(fù)加壓、保壓和卸壓，并操作3-5次；
[0009](5)超聲波提取:將步驟(4)中經(jīng)過處理后的溶液倒入燒杯中，置入超聲波萃取儀，對溶液進(jìn)行超聲波提取，然后采用濾紙過濾，取上清液；
[0010](6)乙醇提取:將步驟(3)中制備的上清液和步驟(5)中制得的上清液混合，邊攪拌邊向混合液中加入質(zhì)量濃度為95 %的乙醇，靜置2h，然后在離心機(jī)上離心一段時(shí)間，過濾后得到沉淀；
[0011](7)干燥得到活性物質(zhì):將沉淀負(fù)壓凍干，得到所需提取的活性物質(zhì)。
[0012]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，步驟(I)中具體的步驟為:對原材料采用氣體擦除或者用干凈干抹布擦拭的方式進(jìn)行清洗，切片時(shí)切片的厚度保證小于3_，負(fù)壓脫水干燥的溫度保持低于18攝氏度，且干燥后使切片的含水量低于5.5%。
[0013]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，步驟(2)粉碎中，采用15目的過濾篩對組織搗碎機(jī)絞碎的蘑菇過濾得到蘑菇粉末，并再次用負(fù)壓脫水干燥，得到含水量低于4%的實(shí)體粉末。
[0014]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，步驟(3)的低溫脂提步驟中，加入石油醚的用量為實(shí)體粉末的3-4倍，在16攝氏度下先浸漬半個(gè)小時(shí)，然后采用攪拌機(jī)攪拌半個(gè)小時(shí)，所用的濾紙為定性濾紙，過濾后合并的上清液放置在18攝氏度以下的環(huán)境中放置待用。
[0015]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，步驟(4)濾澄加壓中，加入的氯化鈉溶液的濃度為0.4mol/LNaCl，且向所述高壓袋內(nèi)快速卸壓的速率至少為所述快速加壓的速率的1.4倍。
[0016]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，所述加壓的速率至少為65MPa/s，所述卸壓速率不得高于300MPa/so
[0017]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，所述步驟(5)的超聲波提取步驟中，超聲波的功率為120-140W，超聲波震蕩時(shí)間為20min，且每隔5min超聲震蕩一次，至少震蕩3次；采用濾紙過濾的次數(shù)為3-4次。
[0018]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，在步驟￠)乙醇提取步驟中:混合液與95%的乙醇的體積比為1: 3至1: 4之間，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為5000r/min，離心時(shí)間為5min，且離心后過濾的步驟重復(fù)至少3遍；
[0019]進(jìn)一步，作為優(yōu)選，在步驟(7)干燥得到活性物質(zhì)步驟中，所述負(fù)壓凍干的溫度為低于5攝氏度，且將得到所需提取的活性物質(zhì)放于低于-10攝氏度的溫度下保存儲藏。
[0020]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明首先采用脂提取，首先將溶于脂的活性物質(zhì)提取出來，然后脂提后的渣采用高壓聯(lián)合超聲提取技術(shù)，可以使原料內(nèi)外壓差發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，再結(jié)合超聲輔助提取，利用超聲空化作用，可以使目標(biāo)組分更易從被提取物中游離出來，可以快速、高效的從生物體內(nèi)提取活性物質(zhì)，得率大大提高，然后將脂提和乙醇提取的活性物質(zhì)混合，干燥，制得活性物質(zhì)，并低溫存儲，提取活性物質(zhì)的提取率大大提高。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0022]本發(fā)明提供了一種高壓聯(lián)合超聲輔助提取蘑菇中活性物質(zhì)的工藝，其包括以下步驟:
[0023](I)原材料預(yù)處理:對原材料采用氣體擦除或者用干凈干抹布擦拭的方式進(jìn)行清洗，然后切片，切片時(shí)切片的厚度保證小于3_，負(fù)壓脫水干燥的溫度保持低于18攝氏度，最后負(fù)壓脫水干燥，且干燥后使切片的含水量低于5.5%
[0024](2)粉碎:用組織搗碎機(jī)將負(fù)壓脫水干燥后的蘑菇片絞碎，之后采用15目的過濾篩對組織搗碎機(jī)絞碎的蘑菇過濾得到蘑菇粉末，并再次用負(fù)壓脫水干燥，得到含水量低于4%的實(shí)體粉末。
[0025](3)低溫脂提:按照一定比例加入石油醚，加入石油醚的用量為實(shí)體粉末的3-4倍，在16攝氏度下先浸漬半個(gè)小時(shí)，然后采用攪拌機(jī)攪拌半個(gè)小時(shí)，靜置8小時(shí)以上，采用濾紙過濾收集上清液，并重復(fù)操作4-5次，合并上清液；所用的濾紙為定性濾紙，過濾后合并的上清液放置在18攝氏度以下的環(huán)境中放置待用。
[0026](4)濾渣加壓:將步驟(3)中濾紙濾下的濾渣加入一定濃度的氯化鈉溶液，加入的氯化鈉溶液的濃度為0.4mol/L NaCl，混合均勻后加入高壓袋內(nèi)，密封，并向