一種從蒙藥達(dá)烏里芯芭根部提取分離化學(xué)成分的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從蒙藥達(dá)烏里芯芭根部提取分 離化學(xué)成分---棕櫚酸、膽留-8 CI -甲氧基-22-雙鍵-3 0，6 0 -二醇、木犀草素、木犀草 素-7-0-3 -D-葡萄糖苷和直鏈烷烴類化合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 達(dá)烏里芯芭，又名大黃花、白蒿草、興安芯芭，隸屬于玄參科，芯芭屬，多年生草本 植物。芯芭為蒙醫(yī)專用藥，分為達(dá)烏里芯芭和蒙古芯芭兩種?！秲?nèi)蒙古中草藥》將芯芭歸于 理血藥的止血藥類中，載："芯芭，味微苦，性涼。祛風(fēng)濕，利尿，止血。主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，月 經(jīng)過多，吐血，衄血，便血，外傷出血，腎炎水腫，黃水瘡"。文獻(xiàn)記載蒙藥芯芭已有幾百年的 應(yīng)用歷史，在四味芯芭散、八味芯芭散等經(jīng)典蒙藥處方中做主藥或配方使用，在民間也有單 獨(dú)煎湯或炒碳外用治療黃水瘡、皮膚瘙癢等，還可與黃柏合用水煎服治療鼻衄等等。
[0003] 蒙藥達(dá)烏里芯芭中具有生物活性的化學(xué)成分為黃酮、環(huán)烯醚萜類、留醇類化合物、 有機(jī)酸類等。例如，黃酮的一種一木犀草素，屬弱酸性四羥基黃酮類化合物，廣泛存在于 玄參科植物中，其有較強(qiáng)的抗氧化活性，具有殺菌抗炎、清熱解暑、鎮(zhèn)痛消腫的功效，在降血 壓、降血脂、降低膽固醇、抗腫瘤、抗癌癥等方面也有治療作用。環(huán)烯醚萜類作為達(dá)烏里芯芭 有效化學(xué)成分之一，也有著廣泛的藥理作用，如抗癌、利尿和止血、神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、降血 糖等，并且有望成為新的治療藥物。留醇類化合物對人體有較強(qiáng)的抗炎作用，具有能夠抑制 人體對膽固醇的吸收、促進(jìn)膽固醇的降解代謝、抑制膽固醇的生化合成等作用，并可預(yù)防粥 脈動樣硬化類似的心臟病，對治療潰瘍、宮頸癌、皮膚鱗癌也有良好療效。
[0004] 隨著民族醫(yī)藥在國內(nèi)外日益受到重視，國家不斷加大對蒙醫(yī)藥文化的保護(hù)力度， 近年來蒙藥芯芭引起了諸多學(xué)者的重視，相關(guān)研究報道日益增多。但是，目前對于蒙藥達(dá)烏 里芯芭有效化學(xué)成分的提取和分離的方法，只有匈牙利語的一篇文獻(xiàn)報道過，并未見有其 它文獻(xiàn)報道。因此提取分離蒙藥達(dá)烏里芯芭中的有效化學(xué)成分對于蒙藥達(dá)烏里芯芭的開發(fā) 利用具有重大意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是為了進(jìn)一步明確蒙藥達(dá)烏里芯芭根部的化學(xué)成分及其基本性質(zhì)， 提供一種從蒙藥達(dá)烏里芯芭根部的化學(xué)成分的提取分離方法，從而能夠最大限度地弄清蒙 藥達(dá)烏里芯芭根部所含成分。
[0006] 除非特別指明，本文中蒙藥達(dá)烏里芯芭根部的化學(xué)成分是指：棕櫚酸、膽 甾-8a-甲氧基-22-雙鍵-3 0，6 0 -二醇、木犀草素、木犀草素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷和直 鏈烷烴類化合物。
[0007] 針對上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0008] (1)醇提：取粉碎好的蒙藥達(dá)烏里芯芭根部，用乙醇-水溶液加熱回流提取，提取 液經(jīng)減壓回收至無醇后得到粗提物；
[0009] (2)萃?。簩⑦_(dá)烏里芯芭根部粗提物分散于乙醇-水溶液中，再分別用石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇萃取，減壓濃縮后分別得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取 物；
[0010] (3)石油醚提取物的分離與純化：將步驟（2)制得的石油醚提取物通過硅膠柱色 譜和聚酰胺柱色譜分離，多次重結(jié)晶，得到混合物1、化合物1和化合物2 ;
[0011] (4)乙酸乙酯提取物的分離與純化：將步驟（2)制得的乙酸乙酯提取物通過硅膠 柱色譜分離，多次重結(jié)晶，得到化合物3和化合物4;
[0012] (5)利用紅外、核磁共振氫譜和碳譜鑒定1-4號化合物分別為棕櫚酸、膽 甾-8a-甲氧基-22-雙鍵-3 0，6 0_二醇、木犀草素、木犀草素-7-0-0-D-葡萄糖苷，混 合物1為直鏈烷烴類化合物。
[0013] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)加熱回流提取時提取時間為5-7小時。
[0014] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取次數(shù)為2-4次。
[0015] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)加熱回流提取時所用乙醇的質(zhì)量濃度 為 95%。
[0016] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（2)分散粗提物所用的乙醇-水溶液是指 50%乙醇溶液。
[0017] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（3)硅膠柱粗分使用的是100-200目的硅 膠，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯=1 : 0-0 : 1，梯度洗脫，流速2-4ml/min。
[0018] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（3)硅膠柱再分離使用的是200-300目的硅 膠，洗脫劑為石油醚：丙酮=20 : 1-10 : 1，梯度洗脫，流速2-4ml/min。
[0019] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（3)聚酰胺柱再分離選用的聚酰胺為60-90 目，洗脫劑為水-無水乙醇，梯度洗脫條件如下：依次用水、10 %乙醇、30 %乙醇、50 %乙醇、 80%乙醇和無水乙醇進(jìn)行洗脫，流速2_5ml/min。
[0020] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（4)硅膠柱粗分使用的是100-200目的硅 膠，洗脫劑為石油醚：氯仿：甲醇=100 : 1 : 1-0 : 1 : 1，梯度洗脫，流速2-4ml/min。
[0021] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（4)硅膠柱再分離使用的是200-300目的硅 膠，洗脫劑為氯仿：甲醇=40 : 1-20 : 1和氯仿：甲醇=10 : 1-5 : 1，梯度洗脫，流速 2-4ml/min〇
[0022] 本發(fā)明首次從達(dá)烏里芯芭根部分離出5種化學(xué)成分，分別是：棕櫚酸、膽 甾-8a-甲氧基-22-雙鍵-3 0，6 0 -二醇、木犀草素、木犀草素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷和直 鏈烷烴類化合物。且本發(fā)明方法工藝簡單，綜合成本低，以價格低廉且有藥用價值的蒙藥達(dá) 烏里芯芭為原料，可大幅降低原料成本，為上述5種化合物提供了新的提取來源，也為研究 蒙藥達(dá)烏里芯芭奠定了一定的基礎(chǔ)。
【附圖說明】：
[0023] 附圖為本發(fā)明的提取分離工藝流程圖
【具體實施方式】
[0024] 下面結(jié)合實施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技案，但保護(hù)范圍不被此限制。實施例 中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用溶劑均為分析純，所用水為去離子水。
[0025] 實施實例一、本發(fā)明的蒙藥達(dá)烏里芯芭根部化學(xué)成分的提取和分離
[0026] (1)醇提
[0027] 將1.lKg陰干的達(dá)烏里芯芭根磨成干粉末（含水率低于0. 5%，重量比），用5倍量 的95%乙醇在75°C下回流提取三次，每次回流六小時。合并提取液減壓濃縮后得到約180g 棕黃色浸膏。
[0028] (2)萃取
[0029] 將此棕黃色浸膏用50%的乙醇分散后，再分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取， 減壓濃縮后分別得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物，質(zhì)量分別為40g、27g、 80g，提取率分別為 3. 6 %，2. 5 %，7. 3 %。
[0030] (3)石油醚提取物的分離與純化
[0031] 將40g石油醚浸膏用乙酸乙酯溶解，加入40g硅膠（100-200目）1 : 1拌樣，在 通風(fēng)櫥中揮干溶劑。800g硅膠（100-200目）和2500ml石油醚濕法裝柱，干法上樣。石油 醚-乙酸乙酯梯度洗脫，流速3ml/min，每個流分200ml，共得到870個流分。利用硅膠板 G(TLC)以石油醚-乙酸乙酯和石油醚-氯仿為展開體系檢測收集，碘缸顯色或JY02S型紫 外分析儀觀察熒光，合并相同組分。
[0032] 當(dāng)洗脫劑為石油醚時，合并流分1-31，得到一凝膠狀固體組分，確定其為混合組分 1，約5. 0g，提取率約0.45%。
[0033] 當(dāng)洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯=20 : 1時，合并流分279-293,濃縮后得到一黃色 固體1.8g。200-300目硅膠濕法裝柱，1 : 1硅膠拌樣，干法上樣，石油醚-丙酮（10 : 1) 洗脫，所得組分26-31含大量白色固體，再用氯仿反復(fù)重結(jié)晶，得到化合物1，約1.lg，提取 率約0. 10%。
[0034] 當(dāng)洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯=10 : 1時，合并流分321-348,濃縮后得到一黃色 固體3. 6g。TLC拖尾嚴(yán)重，聚酰胺薄膜分離效果較好，聚酰胺（60-90目）預(yù)處理至中性后加 入適量蒸餾水混勻，濕法裝柱，干法上樣，聚酰胺柱依次用水_無水乙醇進(jìn)行洗脫。50%乙 醇流分再利用硅膠（200-300目）柱層析，當(dāng)洗脫劑為氯仿-甲醇=10 : 1時，合并組分， 得到黃白色固體。該組分再利用硅膠（200-300目）柱層析，以乙酸乙酯-95%乙醇體系進(jìn) 行梯度洗脫，得到白色固體。用氯仿重結(jié)晶，得到白色粉末狀固體，記為化合物2,約1.3g， 提取率約0. 12%。
[0035] (4)乙酸乙酯提取物的分離與純化
[0036] 乙酸乙酯浸膏（27g)，以氯仿溶解，25g硅膠（100-200目）1 : 1反復(fù)吸附拌樣，于 通風(fēng)櫥內(nèi)揮干溶劑。以石油醚拌600g硅膠（100-200目），趕盡氣泡，裝柱，干法上樣。由石 油醚-氯仿-甲醇體系梯度洗脫，流速3ml/min，共得到540個流分。TLC監(jiān)測，碘缸顯色或 JY02S型紫外分析儀觀察熒光，合并相同組分。
[0037] 當(dāng)洗脫劑為石油醚-氯仿-甲醇=10 : 5 : 1時，合并流分338-362,濃縮后得 到一黃色固體2.5g。200-300目硅膠濕法裝柱，1 : 1硅膠拌樣，干法上樣，氯仿-甲醇 (40 : 1-20 : 1)洗脫，所得組分16-25含大量黃色固體，以甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得黃色固體， 記為化合物3,約0. 5g，提取率約4. 5%〇。
[0038] 當(dāng)洗脫劑為石油醚-氯仿-甲醇=1 : 5 : 1時，合并流分406-432,濃縮后得到 一深黃色固體〇.9g。兩次200-300目硅膠柱分離，以甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得黃色針狀固體，記 為化合物4,約0