scFv抗體、其編碼基因及其在制備治療或預防乙肝制劑中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程領域，涉及一種scFv抗體、其編碼基因及其在制備治療或預 防乙肝制劑中的應用。
【背景技術】
[0002] 乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV)引起的世界性疾病，據統計全球攜帶乙肝表面 抗原（HbsAg)的人數超過2. 8億。我國是乙肝高流行地區(qū)，有40-60%的人群受過HBV感 染，約有1. 2億人攜帶乙肝病毒表面抗原。攜帶乙肝病毒的孕產婦可將病毒傳給新生兒。而 且生命越早期感染乙肝病毒越容易形成持續(xù)攜帶者，不僅可導致慢性肝病，其中一部分還 可以發(fā)展成肝硬化和肝癌。
[0003] 預防乙型肝炎有兩種生物制品：一種是乙肝疫苗，可提供主動免疫，用于接觸前后 的預防。另一種是乙肝高效價免疫球蛋白（HBIG)，提供暫時的被動保護作用，用于某些接觸 后人群的預防。單用乙肝疫苗對母嬰傳播的阻斷效率達到50-75%，而用HBIG和乙肝疫苗 聯合免疫，可使母嬰傳播阻斷率達到97%以上。另外，HBIG還可以用于輸血后乙肝的預防 和意外事故的緊急預防，臨床上用HBIG治療乙肝也取得較好的效果?？傊?，HBIG是一種預 防乙肝的重要制品。它在乙肝預防和被動免疫治療方面的作用是肯定的。
[0004] 長期以來國內外所用的HBIG絕大多數是來自于經乙肝疫苗免疫健康人后采集高 價血漿或血清分離提取免疫球蛋白制成的，屬于血液制品。近年來由于血傳疾病不斷發(fā)現， 大面積使用HBIG存在著一定的潛在危險。自從1996年中國衛(wèi)生部門禁止使用HBIG的血 液制品后，目前對于輸血后乙肝的預防以及意外事故的緊急預防缺少有效的預防措施。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的一個目的是提供一種單鏈抗體。
[0006] 本發(fā)明所提供的單鏈抗體，是特異于乙肝表面抗原前S1蛋白的單鏈抗體，命名為 anti-preSlscFv，由重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)以及用于連接所述重鏈可變區(qū)和所述輕鏈可 變區(qū)的連接區(qū)組成；
[0007] 所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列具體可為如下（a)或（b):
[0008] (a)序列表中序列1自N末端第1-127位；
[0009] (b)將（a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同 活性的由其衍生的氨基酸序列；
[0010] 所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列具體可為如下（C)或（d):
[0011] (C)序列表中序列1自N末端第143-255位；
[0012] (d)將（c)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同 活性的由其衍生的氨基酸序列。
[0013] 所述連接區(qū)為人源抗體的重鏈恒定區(qū)CH1的前15個氨基酸；具體的，所述人源抗 體的重鏈恒定區(qū)CH1的前15個氨基酸的序列為如下（e)或（f):
[0014] (e)序列表中序列1自N末端第128-142位；
[0015] (f)將（e)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同 活性的由其衍生的氨基酸序列。
[0016] 進一步，所述單鏈抗體具體可為如下（g)或（h):
[0017] (g)由序列表中序列1所不的蛋白質；
[0018] (h)將（g)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同 活性的由其衍生的蛋白質。
[0019] 為了便于anti-preSlscFv抗體的純化，可在由序列表中序列1的氨基酸殘基序列 組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如下表所示的標簽。
[0020] 表：標簽的序列
[0021]
【主權項】
1. 一種單鏈抗體，由重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)以及用于連接所述重鏈可變區(qū)和所述輕 鏈可變區(qū)的連接區(qū)組成； 所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為如下（a)或（b): (a) 序列表中序列1自N末端第1-127位； (b) 將（a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性 的由其衍生的氨基酸序列； 所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為如下（c)或（d): (c) 序列表中序列1自N末端第143-255位； (d) 將（c)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性 的由其衍生的氨基酸序列。
2. 根據權利要求1所述的單鏈抗體，其特征在于：所述連接區(qū)為人源抗體的重鏈恒定 區(qū)CHl的前15個氨基酸； 具體的，所述人源抗體的重鏈恒定區(qū)CHl的前15個氨基酸的序列為如下（e)或（f): (e) 序列表中序列1自N末端第128-142位； (f) 將（e)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性 的由其衍生的氨基酸序列。
3. 根據權利要求1或2所述的單鏈抗體，其特征在于：所述單鏈抗體為如下（g)或 (h)： (g) 由序列表中序列1所不的蛋白質； (h) 將（g)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同活性 的由其衍生的蛋白質。
4. 編碼權利要求1-3中任一所述單鏈抗體的核酸分子。
5. 根據權利要求4所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子為編碼權利要求1或 2所述單鏈抗體的基因；所述基因中，編碼所述重鏈可變區(qū)的DNA分子為如下（1)或（2)或 (3)： (1) 序列表的序列2自5'末端第1-381位核苷酸所示的DNA分子； (2) 在嚴格條件下與（1)限定的DNA序列雜交且編碼具有相同活性的蛋白的DNA分子； (3) 與（1)或（2)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有相同活性的蛋 白的DNA分子； 所述基因中，編碼所述輕鏈可變區(qū)的DNA分子為如下（4)或（5)或（6): (4) 序列表的序列2自5'末端第427-768位核苷酸所不的DNA分子； (5) 在嚴格條件下與（4)限定的DNA序列雜交且編碼具有相同活性的蛋白的DNA分子； (6) 與（4)或（5)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有相同活性的蛋 白的DNA分子。
6. 根據權利要求4或5所述的核酸分子，其特征在于：所述基因中，編碼所述鏈接區(qū)的 DNA分子為如下（7)或⑶或（9): (7) 序列表的序列2自5'末端第382-426位核苷酸所示的DNA分子； (8) 在嚴格條件下與（7)限定的DNA序列雜交且編碼具有相同活性的蛋白的DNA分子； (9) 與（7)或（8)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有相同活性的蛋 白的DNA分子。
7. 根據權利要求4-6中任一所述的核酸分子，其特征在于：所述基因為如下（10)或 (11)或（12): (10) 序列表的序列2所不的DNA分子； (11) 在嚴格條件下與（10)限定的DNA序列雜交且編碼具有相同活性的蛋白的DNA分 子； (12) 與（10)或（11)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有相同活性 的蛋白的DNA分子。
8. 含有權利要求4-7中任一所述核酸分子的表達盒、重組載體、轉基因細胞系或重組 菌。
9. 基于權利要求1-3中任一所述單鏈抗體的其它形式的抗體。
10. 權利要求1-3中任一所述的單鏈抗體、或權利要求9所述的其它形式的抗體在制備 產品中的應用； 所述產品的功能為如下（I)、（II)或（III)或（IV): (I)檢測乙型肝炎病毒； (II)輔助鑒定乙型肝炎病毒； (III)預防和/或治療乙型肝炎； (IV)預防和/或治療由乙型肝炎病毒感染引起的疾?。换? 含有權利要求1-3中任一所述的單鏈抗體或權利要求9所述的其它形式的抗體的產 品； 所述產品的功能為如下（I)、（II)或（III)或（IV): (I)檢測乙型肝炎病毒； (II)輔助鑒定乙型肝炎病毒； (III)預防和/或治療乙型肝炎； (IV)預防和/或治療由乙型肝炎病毒感染引起的疾病。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種scFv抗體、其編碼基因及其在制備治療或預防乙肝制劑中的應用。該單鏈抗體由重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)以及它們之間的連接區(qū)組成；所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列1自N末端第1-127位；所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列1自N末端第143-255位。本發(fā)明的單鏈抗體與血液制品相比，具有如下優(yōu)點：不需要免疫血清，解決了由于免疫血清來源短缺而受到限制的問題；避免了血液制品HBIG經血液傳播疾病的危險；本發(fā)明的本質屬人源蛋白質，可以直接應用于人體而不引起機體的免疫排斥反應；適應于大規(guī)模工業(yè)化生產，能夠提高產量，降低成本。
【IPC分類】A61K39-42, C12N15-51, C12N15-70, A61P31-20, C07K16-08, C12R1-19, C12N1-21, G01N33-576
【公開號】CN104761639
【申請?zhí)枴緾N201510181163
【發(fā)明人】李德山, 白銀, 王文飛
【申請人】哈爾濱博翱生物醫(yī)藥技術開發(fā)有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月16日