用于治療幽門螺桿菌感染的嗜熱鏈球菌菌株的制作方法
【專利說明】用于治療幽門螺桿菌感染的嗜熱鏈球菌菌株
[0001]本發(fā)明涉及益生菌領域。具體地，本發(fā)明涉及嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)菌株用于治療或預防幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)感染的用途。
[0002]根據(jù)美國國家酸奶協(xié)會(NYA)或國際生命科學學會(ILSI)最近批準的定義，益生菌是在足量攝入時發(fā)揮超出基本營養(yǎng)之外的健康益處的活微生物。在屬于乳品工業(yè)常用菌屬的乳桿菌(Lactobacillus)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)、鏈球菌(Streptococcus)和乳球菌(Lactococcus)的菌種中已描述了益生菌。益生菌被認為通過阻止病原微生物的發(fā)展和/或通過更直接地作用于免疫系統(tǒng)而在腸道菌群的水平進行干預。
[0003]幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)是革蘭氏陰性的螺旋狀細菌，寄居在超過世界人口 50%的人的胃粘液層中。雖然他們的胃上皮組織出現(xiàn)炎癥癥狀，但是大多數(shù)感染幽門螺桿菌的個體無癥狀，15%至20%的感染幽門螺桿菌的個體發(fā)展成疾病。實際上，幽門螺桿菌是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、萎縮、化生、發(fā)育異常、胃癌以及胃黏膜相關淋巴組織(MALT)淋巴瘤的主要的致病物質(參見綜述Fox and Wang, 2007和Polk and Peek, 2010) ο
[0004]在感染期間，幽門螺桿菌通過該細菌產生的多個粘附分子(粘附素)，例如BabA和SabA蛋白，特異地結合到胃上皮組織內襯的胃上皮細胞。粘附到胃上皮細胞使細菌免受液體流動、蠕動和粘液層的脫落。幽門螺桿菌粘附到胃粘膜誘導胃上皮細胞內的信號傳導途徑，通過氧化應激、細胞凋亡和/或自體吞噬機制造成胃上皮細胞受損以及萎縮。因此，幽門螺桿菌粘附到胃上皮細胞是建立胃粘膜感染的關鍵步驟。
[0005]對幽門螺桿菌感染患者的標準治療是兩種抗生素聯(lián)合質子泵抑制劑(PPI)，所謂的三聯(lián)療法。然而，因為抗生素耐藥性或較差的順應性，三聯(lián)療法后幽門螺桿菌的根除率正在下降。此外，盡管有數(shù)個臨床試驗，目前尚無有效的疫苗上市。
[0006]由上述內容可見，需要三聯(lián)療法的替代療法或補充療法來用于治療或預防幽門螺桿菌感染。
[0007]已經(jīng)提出使用益生菌作為三聯(lián)療法的替代或補充用于治療或預防幽門螺桿菌感染。例如，羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)被認為是用于抑制幽門螺桿菌生長的候選益生菌，原因是它產生有效的抗菌物質羅伊氏素(3-羥基丙醛)(國際申請WO2004/031368)。Boyanova等(2009)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)幾種抑制幽門螺桿菌菌株體外生長的德氏乳桿菌保加利亞亞種的菌株。Simova等(2009)發(fā)現(xiàn)了產生抑制肽(細菌素)并且強烈抑制幽門螺桿菌的德氏乳桿菌菌株(BB18)。Linsalata等(2004)發(fā)現(xiàn)短乳桿菌菌株CD2能夠減小胃內的幽門螺桿菌載量，并提出這可能是由于該菌株提高的精氨酸脫氨基酶活性使幽門螺桿菌失去精氨酸并抑制它們的生長和增殖。
[0008]本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了菌種嗜熱鏈球菌能夠減小幽門螺桿菌菌株的體內載量。
[0009]因此，本發(fā)明涉及嗜熱鏈球菌菌株，用于治療或預防幽門螺桿菌感染。
[0010]所述嗜熱鏈球菌可用作藥物，包括藥物組合物以及功能食品。
[0011]所述嗜熱鏈球菌菌株能夠降低感染幽門螺桿菌的個體的胃中幽門螺桿菌菌株的載量。
[0012]在優(yōu)選的實施方式中，所述嗜熱鏈球菌菌株為菌株CNCM 1-1520。該菌株由申請人根據(jù)布達佩斯協(xié)定于1994年12月30日在CNCM(國家培養(yǎng)物和微生物保藏中心(Collect1n Nat1nale de Cultures de Microorganismes), 25rue du Docteur Roux，巴黎)保藏。該菌株在國際申請WO 96/20607中公開。該菌株還稱為DN-001147。
[0013]本發(fā)明還涵蓋了親本菌株CNCM 1-1520衍生的突變菌株或遺傳轉化的菌株，前體條件是它們能夠減小感染幽門螺桿菌的個體的胃中幽門螺桿菌菌株的載量。在下面的實施例中描述了評估嗜熱鏈球菌菌株減小感染幽門螺桿菌的個體胃中幽門螺桿菌菌株的載量的能力的方法。這些突變或遺傳轉化的菌株可為其中親本菌株CNCM 1-1520的一個或多個內源基因已經(jīng)被突變的菌株，例如改變了它們的一些代謝性質(例如，它們發(fā)酵糖的能力，它們的耐酸性、它們在胃腸道轉運中的存活、它們的后酸化性質或它們的代謝產物)。它們還可以為通過一個或多個目標的基因遺傳轉化由親本菌株CNCM 1-1520產生的菌株，例如為了賦予所述遺傳轉化的菌株額外的生理特征，或者為了讓它們表達希望通過所述菌株給予的具有治療或疫苗益處的蛋白。可通過用于鏈球菌屬的隨機誘變或定點誘變的常規(guī)技術，例如Biswas等在1993年描述的技術和Maguin等在1996年描述的技術，或通過稱為“基因組重排”的技術，例如Yu等在2008描述的技術，由親本菌株CNCM 1-1520獲得這些突變或遺傳轉化的菌株。
[0014]本發(fā)明還涉及細胞組分(cell fract1n)，其可以由能夠減小感染幽門螺桿菌的受試者胃中的幽門螺桿菌菌株載量的嗜熱鏈球菌菌株獲得，優(yōu)選由菌株CNCM 1-1520獲得，用于治療或預防幽門螺桿菌感染，前提是所述細胞組分能夠降低感染幽門螺桿菌的受試者胃中的幽門螺桿菌菌株載量。所述細胞組分特別是由所述菌株的培養(yǎng)物獲得的DNA制劑制備物或細菌細胞壁制備物。它們還可以是這些菌株的培養(yǎng)物上清或部分。例如，可通過檢測它們對感染幽門螺桿菌的患者的胃中幽門螺桿菌菌株的載量的性能，選擇適合該用途的所述細胞組分。
[0015]本發(fā)明還涉及組合物，所述組合物包含本發(fā)明的嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選菌株CNCM1-1520，或本發(fā)明的細胞組分，用于治療或預防幽門螺桿菌感染。
[0016]在本發(fā)明的組合物中，所述菌株可以以全菌形式使用，所述全菌可以是活的或死的?？蛇x地，所述菌株可以以細菌裂解物的形式使用。優(yōu)選細菌細胞以活的、有生命力的細胞存在。
[0017]本發(fā)明的組合物可以是任何適合施用特別是經(jīng)口施用的形式。這包括例如固體、半固體、液體和粉末。液體組合物由于更易施用，例如作為飲料，而是通常優(yōu)選的。
[0018]所述組合物可以包含每克如上所述的至少一種細菌菌株干重至少15Cfu、優(yōu)選至少 16Cfu0
[0019]所述組合物還可以包含其它嗜熱鏈球菌菌株和/或除本發(fā)明菌株以外的其它細菌菌株，特別是益生菌菌株，如乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和乳球菌屬菌株。
[0020]在優(yōu)選的實施方式中，所述組合物包含嗜熱鏈球菌菌株CNCM 1-1520，嗜熱鏈球菌菌株CNCM 1-1521(也稱為DN-001339)和保加利亞乳桿菌菌株CNCM 1-1519(也稱為DN-100182)，以及任選的副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)菌株，優(yōu)選副干酷乳桿菌干酷亞種(Lactobacillus paracasei subsp.Paracasei)CMCM 1-1518(也稱為DN-114001) ο在國際申請WO 96/20607中描述了全部這些菌株。
[0021]當細菌是活細菌形式時，所述組合物通?？砂靠私M合物干重15至10 13個菌落形成單位(Cfu)，優(yōu)選至少16Cfu,更優(yōu)選至少17Cfu,更優(yōu)選至少18Cfu,以及最優(yōu)選至少109cfu。在液體組合物的情況下，這通常對應于14至10 12個菌落形成單位(cfu)，優(yōu)選至少105cfu，更優(yōu)選至少106cfu，更優(yōu)選至少107cfu，以及最優(yōu)選至少109cfu/ml。
[0022]所述組合物可為藥物組合物或營養(yǎng)組合物，包括食品、食品補充劑和功能性食品。更具體地，所述組合物可為藥物，包括藥物組合物和功能性食品。
[0023]“食品補充劑”是指由一般在食品中使用的化合物制成的產品，但其是以片劑、粉劑、膠囊劑、飲劑(pot1n)的形式或一般與滋養(yǎng)物不相關的任何其它形式，且其對人們的健康是有益處的?！肮δ苄允称贰币彩菍θ藗兊慕】狄灿幸嫣幍淖甜B(yǎng)物(aliment)。具體地說，食品補充劑和功能性食品能夠對疾病例如慢性疾病具有保護性或治療性的生理效應。
[0024]本發(fā)明的營養(yǎng)組合物也包括嬰兒食品、嬰兒配方奶或嬰兒后續(xù)配方(infantfollow-on formula)。優(yōu)選地，本發(fā)明組合物是營養(yǎng)品或藥物產品、營養(yǎng)補充劑或藥用食品(medical food)。
[0025]所述組合物可以是乳產品，優(yōu)選發(fā)酵乳產品。發(fā)酵產品可以以液體形式存在或者以通過干燥發(fā)酵的液體獲得的干粉形式存在。乳產品(dairy product)的實例包括凝固、攪拌或可飲用形式的發(fā)酵奶(fermented milk)和/或發(fā)酵乳清、乳酪和酸乳酪。
[0026]所述發(fā)酵產品也可以是發(fā)酵的植物，如凝固、攪拌或可飲用形式的發(fā)酵的大豆、谷物和/或水果。
[0027]在優(yōu)選的實施方案中，發(fā)酵的產品是新鮮產品。未經(jīng)過劇烈的熱處理步驟的新鮮產品具有的優(yōu)點是細菌菌株以活體形式存在。
[0028]本發(fā)明還涉及以上限定的嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選菌株CNCM 1-1520，或上面限定的組合物，在制造用于治療或預防幽門螺桿菌感染的藥物中的用途。
[0029]本發(fā)明還涉及用于治療或預防有需要的受試者中幽門螺桿菌感染的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的如上文所定義的嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選菌株CNCM1-1520，或如上面所定義的組合物。
[0030]治療有效量的確定對于本領域技術人員是公知的，尤其是考慮到本文所提供的詳細公開內容后。
[0031]本發(fā)明還涉及制造用于治療或預防幽門螺桿菌感染的藥物的方法，所述方法包括將上文所定義的嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選菌株CNCM 1-1520，或者上文所定義的細胞組分加入到至少一種藥學上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑中。
[0032]如本文所用，治療或預防除其他物質外還包括預防感染和/或降低幽門螺桿菌的載量。治療或預防還涵蓋解決下文所述的與幽門螺桿菌相關的至少一種癥狀。
[0033]用于診斷幽門螺桿菌感染的方法是本領域中已知的。舉例來說，可以通過血液抗體試驗、糞便抗原試驗或碳尿素呼氣試驗的檢驗來進行幽門螺桿菌感染的診斷。也可以通過內窺鏡下活組織檢查以及隨后的尿素酶試驗、組織學檢查、微生物培養(yǎng)或定量實時PCR來進行幽門螺桿菌感染的診斷。
[0034]與幽門螺桿菌感染相關的癥狀或疾病是胃痛、腹痛、反胃、嘔吐、噯氣、胃氣脹、惡心、慢性活動性胃炎、消化性潰瘍疾病、萎縮、化生、發(fā)育異常、胃癌和胃粘膜相關淋巴樣組織(MALT)淋巴瘤。
[0035]根據(jù)下面的進一步描述，即示例嗜熱鏈球菌菌株CNCM 1-1520減小幽門螺桿菌菌株體內載量的性能的實施例以及隨附的附圖，可以更清楚地理解本發(fā)明。
[0036]圖1顯示了未感染的小鼠、接受對照產品的被幽門螺桿菌SSl感染的小鼠、或感染幽門螺桿菌SSl并用嗜熱鏈球菌菌株CNCM 1-1520治療的小鼠在治療前(第一柱)、治療后3周(第二柱)及處死前(第三柱)測量的體重變化(以克計)，由2個獨立的實驗獲得。
[0037]圖2顯示了在(i)未感染幽門螺桿菌的小鼠、(ii)接受對照產品(未發(fā)酵的奶)的被幽門螺桿菌SSl感染的小鼠和(iii)感染幽門螺桿菌SSl并用嗜熱鏈球菌菌株CNCM1-1520治療的小鼠中，使用抗幽門螺桿菌抗體通過免疫組織化學獲得的感染的得分。得分的定義:無感染腺；1:極少感染腺，2:25%感染腺，3:25?50%感染腺，4:>50%感染腺。
[0038]圖3顯示了在(i)未感染幽門螺桿菌的小鼠