Grk4變異體和收縮壓變化與尿鈉排泄率比值的聯(lián)合應(yīng)用及方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于診斷領(lǐng)域，具體設(shè)及檢測GRK4變異體和收縮壓變化與尿鋼排泄率比 值的試劑聯(lián)合制備診斷鹽敏感性試劑中的應(yīng)用及方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽是最重要的環(huán)境因素之一，但個體對鹽負(fù)荷或限鹽有著不同的血壓反應(yīng)，根據(jù) 個體對高鹽攝入的血壓反應(yīng)及滯鋼程度將其分為鹽敏感性、鹽不敏感性兩大類。敏感者在 正常人群中的檢出率從15%~42%不等；鹽敏感性個體日后發(fā)生高血壓的比例明顯高于 非鹽敏感性個體，其發(fā)生冠屯、病、腦卒中的幾率也大大增加。另外，在高血壓病人中，鹽敏感 與否直接影響治療方案的選擇，如利尿劑和巧括抗藥是治療鹽敏感性高血壓的首選藥物； 鹽不敏感性高血壓屬于鋼-容量非依賴性高血壓，血漿腎素活性正常或升高，利尿劑對該 類高血壓患者往往無效。因此，鹽敏感性人群的檢出不僅對于個體的一級預(yù)防，對于發(fā)生高 血壓、冠屯、病和腦卒中的個體治療也有一定的指導(dǎo)意義。
[0003] 既往檢測鹽敏感性的方法很多，急性、慢性鹽負(fù)荷法，但該些研究過于復(fù)雜，費時 臨床開展困難，實用性不高。另外，既往提出的鹽敏感性標(biāo)志物也較多，包括：血漿腎素、醒 固酬、血清結(jié)合珠蛋白、內(nèi)源性洋地黃物質(zhì)、紅細(xì)胞膜鋼-裡反轉(zhuǎn)運速率、尿血管舒緩素、尿 多己/多己胺排泄比率、膜島素抵抗等，但該些方法在鹽敏感性、鹽不敏感性患者中存在較 大的重疊，難于成為理想的鹽敏感性標(biāo)志物。因此，急需尋找新的鹽敏感性標(biāo)志物。
[0004] 腎臟是人體負(fù)責(zé)鋼排泄的重要器官，腎臟的利尿、利鋼作用受到腎臟自分泌多己 胺的控制。既往的研究發(fā)現(xiàn)鹽敏感性高血壓病人和動物腎臟尿鋼排泄功能障礙，多己胺受 體介導(dǎo)的利尿作用下降。由于多己胺受體功能受到GRK4的調(diào)節(jié)，GRK4在人體存在A142V、 A486V、R6化等變異體，該些變異體存在提高了G服4的活性，導(dǎo)致多己胺受體功能下降。而 GRK4是否可作為鹽敏感鑒定指標(biāo)未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供檢測G服4變異體和收縮壓變化與尿鋼排 泄率比值的試劑聯(lián)合制備診斷鹽敏感性試劑中的應(yīng)用；本發(fā)明的目的之二在于提供W收縮 壓變化與尿鋼排泄率比值聯(lián)合GRK4變異體為標(biāo)志物診斷鹽敏感性的方法。
[0006] 為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0007] 1、檢測G服4變異體和收縮壓變化與尿鋼排泄率比值的試劑聯(lián)合制備診斷鹽敏感 性試劑中的應(yīng)用。
[000引 2、G服4變異體和收縮壓變化與尿鋼排泄率比值聯(lián)合診斷鹽敏感性的方法，包括如 下步驟：
[0009]a.測定收縮壓變化與尿鋼排泄率比值A(chǔ)SBP/UNa+;讓受試者30分鐘內(nèi)口服生理 鹽水1500mU然后測定口服生理鹽水前后收縮壓變化，記為ASBP;同時測定受試者的尿鋼 排泄率，記為UNa+，然后用ASBP除WUNa+計算收縮壓變化與尿鋼排泄率比值A(chǔ)SBP/UNa+;
[0010] b.G服4的變異體檢測：提取受試者基因組DM,然后wSEQIDNO. 1和SEQID NO. 2所示序列為引物進(jìn)行PCR擴增，PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳判斷G服4是否為變異體；
[0011] C.根據(jù)步驟a計算的收縮壓變化與尿鋼排泄率比值A(chǔ)SBP/UNa+和步驟b檢測的 GRK4是否為變異體判斷受試者為的鹽敏感性。
[001引優(yōu)選的，步驟b中，所述PCR擴增的條件如下，95°C預(yù)變性5min;95°C變性45s， 65°C退火40s，72°C延伸45s，35個循環(huán)，最后72°C延伸5min。
[0013] 優(yōu)選的，步驟c中，判斷鹽敏感性的判定標(biāo)準(zhǔn)為：
[0014]ASBP/UNa+> 9.38mmHg?min/ y mol,G服4 為變異體判斷為鹽敏感性；
[0015]ASBP/UNa+在 4. 41-9.38mmHg?min/ y mol,G服4 為變異體判斷為鹽敏感性；
[0016]ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ y mol,G服4為野生型判斷為非鹽敏感性；
[0017]ASBP/UNa+在4. 41-9. 38mmHg?min/ymol,G服4為野生型判斷為非鹽敏感性； [001引ASBP/UNa> 9. 38mmHg?min/ymol,G服4為野生型判斷為中間型；
[0019]ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ymol，G服4為變異體判斷為中間型。
[0020] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明公開了聯(lián)合尿鋼排泄和G服4變異體做為診斷 鹽敏感性的新指標(biāo)，通過實驗證明，利用急性口服鹽水負(fù)荷前后收縮壓變化（ASB巧 與尿鋼排泄率扣rinarysodiumexcretion(UNa+))之比可W初步用于鑒定鹽敏感 性及非鹽敏感性，ASBP/UNa+ > 9. 38mmHg?min/ymo考慮可能為鹽敏感性患者， ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ymol考慮可能為非鹽敏感性患者，ASBP/UNa+在 4. 41-9. 38mmHg'min/ymol為中間型。進(jìn)一步結(jié)合G服4的變異體存在與否作為指標(biāo)，其診 斷價值達(dá)94%，敏感性到83%，特異性100%，該發(fā)明不僅僅拓寬了診斷鹽敏感性的思路及 方法，同時也為更好地預(yù)防和進(jìn)一步有效治療鹽敏感性相關(guān)性疾病提供了新的依據(jù)。并且 利用該方法診斷鹽敏感性快速、有效，患者依從性更好，較靜脈鹽水負(fù)荷法診斷鹽敏感性更 佳，具有重要的臨床意義。
【附圖說明】
[0021] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖：
[0022] 圖1為G服4基因A142V變異體電泳結(jié)果。
[0023] 圖2為G服4基因A142V變異體測序結(jié)果。
[0024]圖3為判斷鹽敏感性的標(biāo)準(zhǔn)。
【具體實施方式】
[0025] 下面將結(jié)合附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實施例中未注明具體 條件的實驗方法或按照制造廠商所建議的條件。
[0026] 實驗對象；選擇口診確診的原發(fā)性高血壓患者，排除繼發(fā)性高血壓、合并嚴(yán)重糖尿 病、合并肝腎功能不全、不能耐受檢查者，剩余患者作為研究對象，共856名；然后對入選的 研究對象測量屯、率、血壓、身高、體重，并計算體重指數(shù)炬MI)=體重kg/身高m2;再抽取清 晨空腹血，檢測血脂（甘油=醋，膽固醇）、空腹血糖，肌酢指標(biāo)；詢問飲酒史、吸煙史，高血 壓病史及服用降壓藥物情況。
[0027]傳統(tǒng)判定鹽敏感方法采用Weinberger法（參考文獻(xiàn)見WeinbergerMH， MillerJZ，LuftFC，GrimCE，F(xiàn)inebergNS.Definitionsandcharacteristicsof sodiumsensitivityandbloodpressureresistance.Hypertension. 1986 ;8(suppl