用于減少cd36表達(dá)的方法
【專利說明】
[0001] 本申請是申請日為2006年9月18日、分案提交日為2012年2月9日、申請?zhí)枮?201210028972. 2、發(fā)明名稱為"用于減少⑶36表達(dá)的方法"的分案申請的再次分案申請，其 中，申請?zhí)枮?01210028972. 2的分案申請是申請?zhí)枮?00680040019. 2、申請日為2006年9 月18日、發(fā)明名稱為"用于減少CD36表達(dá)的方法"的發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002] 本申請要求對2005年9月16日提交的美國臨時申請序列號為60/718, 170的優(yōu) 先權(quán)。美國臨時申請序列號為60/718, 170的說明書（專利申請）以引用方式結(jié)合于本文。
[0003] 在本申請中描述的發(fā)明得到以下單位的資助：美國國家藥物濫用研宄所（the NationalInstituteofDrugAbuse)，資助號P01DA08924;美國神經(jīng)疾病與中風(fēng)研宄所 (theNationalInstituteofNeurologicalDiseasesandStroke)，資助號R21NS48295; 以及美國心肺血液研宄所（theNationalHeart,LungandBloodInstitute)，資助號 R01HL082511。美國政府具有本發(fā)明的某些權(quán)利。
技術(shù)領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明涉及用于減少⑶36表達(dá)的方法。
【背景技術(shù)】
[0005] ⑶36是B類清道夫受體家族的一種跨膜蛋白。該蛋白被廣泛表達(dá)在許多細(xì)胞上， 如微血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血小板、脂肪細(xì)胞、上皮細(xì)胞（例如，腸上皮細(xì)胞和腎小管細(xì) 胞等）、胰島細(xì)胞以及心肌細(xì)胞。該受體可以與多種細(xì)胞外配體相互作用，如血小板凝血酶 敏感蛋白-1、長鏈脂肪酸、以及氧化型低密度脂蛋白。
[0006] ⑶36的異常表達(dá)與多種疾病和病癥有關(guān)。例如，與野生型小鼠相比，當(dāng)進(jìn)食西方飲 食（Westerndiet)時，缺少CD36的小鼠具有較少的動脈粥樣硬化病變。另外據(jù)報道，CD36 基因剔除小鼠可避免患有急性腦缺血。
[0007] 因此，用于減少CD36表達(dá)的方法可有助于治療特征為CD36異常表達(dá)的疾病或病 癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 在一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種用于減少細(xì)胞中的⑶36表達(dá)的方法。該方 法包括使細(xì)胞與有效量的芳族陽離子肽（aromatic-cationicpeptide)接觸。
[0009] 在另一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種在有需要的哺乳動物中減少CD36表達(dá) 的方法。該方法包括給予哺乳動物有效量的芳族陽離子肽。
[0010] 在又一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種在有需要的哺乳動物中治療特征為CD36 表達(dá)增加的疾病或病癥的方法。該方法包括給予哺乳動物有效量的芳族陽離子肽。
[0011] 在一種進(jìn)一步的實施方式中，本發(fā)明提供了一種在有需要的哺乳動物中治療輸尿 管梗阻的方法。該方法包括給予哺乳動物有效量的芳族陽離子肽。
[0012] 在一種更進(jìn)一步的實施方式中，本發(fā)明提供了一種在有需要的哺乳動物中治療糖 尿病腎病的方法。該方法包括給予哺乳動物有效量的芳族陽離子肽。
[0013] 在另一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種用于減少取出的器官或組織中的⑶36 表達(dá)的方法。該方法包括給予哺乳動物有效量的芳族陽離子肽。
[0014] 本發(fā)明的方法中所用的芳族陽離子肽具有：至少一個凈正電荷；最少4個氨基酸； 最多大約20個氨基酸；凈正電荷的最小數(shù)目（Pm)與氨基酸殘基的總數(shù)（r)之間的關(guān)系，其 中3Pm是小于或等于r+1的最大數(shù)；以及芳族基團的最小數(shù)目（a)與凈正電荷的總數(shù)（Pt) 之間的關(guān)系，其中2a是小于或等于Pt+1的最大數(shù)，除非當(dāng)a為1時之外，Pt也可以是1。
【附圖說明】
[0015] 圖1，SS-31減少了小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中的oxLDL(氧化修飾低密度脂蛋白）誘導(dǎo) 的⑶36mRNA表達(dá)、⑶36蛋白表達(dá)、以及泡沫細(xì)胞的形成。
[0016] 圖2,在患有急性腦缺血的野生型小鼠中，SS-31療法（或治療）減小了梗死體積 和腦半球腫脹（hemisphericswelling)。
[0017] 圖3，SS_31療法減少了野生型小鼠局部缺血后的腦中的還原型谷胱甘肽（GSH)的 降低。
[0018] 圖4,在患有急性腦缺血的⑶36基因剔除（敲除）小鼠中，SS-31在減少梗死體積 或腦半球腫脹方面沒有作用（療效）。
[0019] 圖5,SS-31沒有減少來自⑶36基因剔除小鼠缺血后的腦中的GSH的消耗（排除， depletion)〇
[0020] 圖6,SS-31減少了野生型小鼠缺血后的腦中的⑶36mRNA的表達(dá)。
[0021] 圖7，SS-31降低了在單側(cè)輸尿管梗阻（UUO)后腎小管細(xì)胞中的⑶36表達(dá)。對側(cè)未 梗阻腎（A);用鹽水處理的動物的梗阻腎⑶；以及用SS-31處理的獲自大鼠的梗阻腎（C)。
[0022] 圖8,SS-31減少了UUO后的腎中的脂質(zhì)過氧化作用。在梗阻腎中的腎小管細(xì)胞 (B);對側(cè)未梗阻對照（A);以及來自用SS-31處理的大鼠的梗阻腎（C)。
[0023] 圖9，SS_31減少了UUO后的梗阻腎中的腎小管細(xì)胞凋亡。來自鹽水處理的動物的 梗阻腎（B);對側(cè)未梗阻對照（A);來自SS-31處理的動物的梗阻腎（C)。
[0024] 圖10，SS_31減少了由UUO誘導(dǎo)的梗阻腎中的巨噬細(xì)胞浸潤。梗阻腎⑶；對側(cè)未 梗阻對照（A);用SS-31處理的大鼠的梗阻腎（C)。
[0025] 圖11，SS_31減少了UUO后的梗阻腎中的間質(zhì)纖維化。梗阻的腎（B);對側(cè)未梗阻 對照（A);用SS-31處理的大鼠的梗阻腎（C)。
[0026] 圖12,用SS-31或SS-20阻止⑶36表達(dá)上調(diào)的離體（分離的）心臟的冷儲存（冷 藏）。"背景"對照（A和B)表示來自正常非缺血心臟的兩個切片，其沒有用第一抗CD36抗 體（primaryanti-〇)36antibody)加以處理。"正常心臟"（C和D)表示獲自非缺血心臟 的兩個切片。與"正常心臟"相比，來自代表性心臟（其在4°C的St.Thomas溶液中儲存了 18小時）的切片（E和F)顯示出增強的CD36染色。在具有InMSS-31 (G和H)或IOOnM SS-20(1和J)的St.Thomas溶液中儲存的心臟中，CD36染色顯著降低。
[0027] 圖13，SS_31和SS-20減少了離體豚鼠心臟中的脂質(zhì)過氧化作用，其中離體豚鼠心 臟在延長的（prolonged)冷缺血以后經(jīng)受熱再灌注。經(jīng)受在St.Thomas溶液中冷藏18小 時的心臟的HNE染色（A)與非缺血心臟的HNE染色進(jìn)行對比（B)。在貯存于SS-31 (C)或 SS-20 (D)的心臟中，HNE染色減少。
[0028] 圖14，SS_31和SS-20消除了離體豚鼠心臟中的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，其中該離體豚鼠心 臟在持續(xù)的冷缺血以后經(jīng)受熱再灌注。在St.Thomas溶液中經(jīng)受18小時冷藏的心臟（C和 D);非缺血正常心臟（A和B)。在貯存于SS-31 (E和F)或SS-20 (G和H)的心臟中沒有觀 察到凋亡的細(xì)胞。
[0029] 圖15，SS_31和SS-20可維持離體豚鼠心臟中的冠狀動脈流量，其中離體豚鼠心臟 在延長的冷缺血以后經(jīng)受熱再灌注。單獨用心臟停搏液（St.Thomas溶液）或用包含InM SS-31 (A)或IOOnMSS-20 (B)的St.Thomas溶液灌注豚鼠心臟3分鐘，然后經(jīng)受18小時的 冷缺血（4°C)。
[0030] 圖16,SS-31防止對糖尿病小鼠近端小管的損傷。通過鏈脲霉素（STZ)注射5天 來誘導(dǎo)糖尿病。在3周后獲得的腎切片顯示，在STZ處理的動物中失去刷狀緣（B)，而在未 用STZ處理的小鼠中則沒有觀察到失去刷狀緣（A)。在每日接受SS-31(3mg/kg)的用STZ 處理的動物中沒有觀察到刷狀緣的喪失（C)。
[0031] 圖17,SS-31防止了糖尿病小鼠中腎小管上皮細(xì)胞的凋亡。通過鏈脲霉素（STZ) 注射5天來誘導(dǎo)糖尿病。3周后獲得的腎切片顯示，在STZ處理的動物中近端小管中凋亡的 細(xì)胞顯著增加（A，圖片b)，而在未用STZ處理的小鼠中則未觀察到近端小管中凋亡的細(xì)胞 顯著增加（A，圖片a)。在每日接受SS-31(3mg/kg)的小鼠中未觀察到STZ誘導(dǎo)的凋亡（A， 圖片c)。SS-31療法顯著降低了由STZ引起的凋亡細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)（B)。
【具體實施方式】
[0032]
[0033] 本發(fā)明涉及通過某些芳族陽離子肽來減少⑶36表達(dá)。這些芳族陽離子肽是水溶 性的和高極性的。盡管有這些性質(zhì)，但這些肽可以容易地穿透細(xì)胞膜。
[0034] 本發(fā)明所用的芳族陽離子肽包括最少3個氨基酸，并且優(yōu)選包括最少4個氨基酸， 氨基酸通過肽鍵共價相連。
[0035] 在本發(fā)明的芳族陽離子肽中存在的氨基酸的最大數(shù)目為大約20個，它們通過肽 鍵共價相連。優(yōu)選地，氨基酸的最大數(shù)目為約12個，更優(yōu)選約9個，以及最優(yōu)選約6個。最 佳地，在肽中存在的氨基酸的數(shù)目為4個。
[0036] 本發(fā)明所用的芳族陽離子肽的氨基酸可以是任何氨基酸。如在本文中所使用的， 術(shù)語"氨基酸"用來指任何包含至少一個氨基基團和至少一個羧基基團的有機分子。優(yōu)選 地，至少一個氨基基團是在羧基基團的a位。
[0037] 氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括，例如，二十種最常見的通常 存在于哺乳動物蛋白質(zhì)中的左旋（L)氨基酸，S卩，丙氨酸（Ala)、精氨酸（Arg)、天冬酰胺 (Asn)、天冬氨酸（Asp)、半胱氨酸（Cys)、谷氨酰胺（Gln)、谷氨酸（Glu)、甘氨酸（Gly)、組氨 酸（His)、異亮氨酸（Ileu)、亮氨酸（Leu)、賴氨酸（Lys)、蛋氨酸（Met)、苯丙氨酸（Phe)、脯 氨酸（Pro)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)、色氨酸（Trp)、酪氨酸（Ty