3. 6608 和鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933分別接入三個裝有3號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐、步驟1中1. 3活化的解木聚糖梭 菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis) ACCC No. 03189分別接入兩個裝有4號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐和步驟1中1. 4活化的蘇云金芽 胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841和蘇云金芽孢桿菌賭螟亞 種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No. 1043 分別接入兩 個裝有5號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐,均在30°C進行靜止逐級擴大培養(yǎng),擴大培養(yǎng)過程中接種量為 5%-10% (體積百分比含量),分別得到黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO: M209125發(fā)酵液(10X109cfu/ml)(簡稱黑曲霉ZM-8發(fā)酵液)、擬康氏木霉(Trichoderma 口8611(1〇1?)11;[1^;[;006]\0^勵.3.6608 發(fā)酵液(10\109〇;1!\1/1111)(簡稱擬康氏木霉發(fā)酵液)、 鮮綠青霉(卩6]1;[(3;[11;[11111¥181(1;[031:11111)06]\0^腸.3.5933 發(fā)酵液(10\109〇;1!\1/1111)(簡 稱鮮綠青霉發(fā)酵液)、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555發(fā)酵液 (10X109cfu/ml)(簡稱解木聚糖梭菌發(fā)酵液)和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189發(fā)酵液(10X 109cfu/ml)(簡稱枯草芽胞桿菌發(fā)酵液)、蘇云金芽胞桿菌殺蟲變 種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 發(fā)酵液(10X109cfu/ml)(簡稱蘇云金芽 胞桿菌殺蟲變種發(fā)酵液)和蘇云金芽孢桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae Shvetsova)ACCC CFCC No. 1043發(fā)酵液(10X109cfu/ml)(簡稱蘇云金芽抱桿菌 蠟螟亞種發(fā)酵液)。
[0052] 3、菌劑的制備
[0053] 3.1、菌劑A的制備
[0054] 將按照步驟2得到的蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種發(fā)酵液和蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞 種發(fā)酵液的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為1:1的比例進行混合得到發(fā)酵混合液A。該發(fā)酵 混合液A中,蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841和蘇云 金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae)CFCC No. 1043 的含量 均為5 X 109cfu/ml。將吸附載體和上述發(fā)酵混合液A混合,保持總含水量為75% (質(zhì)量百 分比),30°C靜止培養(yǎng)3天待充分吸附后,35°C通風自然干燥得到菌劑A,菌劑A中的活性成 分的含量為1 X 108cfu/g菌劑,菌劑A的活性成分為:蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 和蘇云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae)CFCC No. 1043。所述菌劑A中,蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 和蘇云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae) CFCC No. 1043 的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為 1:1〇
[0055] 3. 2、菌劑B的制備
[0056] 按照步驟2得到的黑曲霉ZM-8發(fā)酵液、擬康氏木霉發(fā)酵液、鮮綠青霉發(fā)酵液、解 木聚糖梭菌發(fā)酵液和枯草芽胞桿菌發(fā)酵液的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為1:1:1:1:1的 比例進行混合得到發(fā)酵混合液B。該發(fā)酵混合液B中,黑曲霉ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608、 鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189 的含 量均為2 X 109cfu/ml。將吸附載體和上述發(fā)酵混合液B混合,保持總含水量為75% (質(zhì)量 百分比),30°C靜止培養(yǎng)3天待充分吸附后,35°C通風自然干燥得到菌劑B,菌劑B中的活性 成分的含量為1 X 108cfu/g菌劑,菌劑B的活性成分為:黑曲霉ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608、 鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189。所 述菌劑 B 中,黑曲霉 ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉 (!'1';[。110(161'1]1&卩8611(1〇1?)11;[1^;[;006]\0^腸.3.6608、鮮綠青霉(?611;[。;[11;[11111¥181(1;[。&1:11111) CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞 桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189 的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為 1:1:1:1: 1。
[0057] 3. 3、菌劑C的制備
[0058] 將按照步驟2得到的黑曲霉ZM-8發(fā)酵液、擬康氏木霉發(fā)酵液、鮮綠青霉發(fā)酵 液、解木聚糖梭菌發(fā)酵液、枯草芽胞桿菌發(fā)酵液、蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種發(fā)酵液和 蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種發(fā)酵液進行混合得到發(fā)酵混合液C。該發(fā)酵混合液C中,黑 曲霉 ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC N0.3.6608 和鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933 的含量均為 lX109cfu/ml,解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189 的含量均為 2X109cfu/ml, 蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841和蘇云金芽孢桿菌 賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No. 1043 的含量 均為1. 5X 109cfu/ml。將吸附載體和上述發(fā)酵混合液C混合,保持總含水量為75% (質(zhì) 量百分比),30°C靜止培養(yǎng)3天待充分吸附后,35°C通風自然干燥得到菌劑C,菌劑C中的 活性成分的含量為1 X 108cfu/g菌劑,菌劑C的活性成分為:黑曲霉ZM-8 (Aspergi 1 lus niger ZM_8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608、鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌 (Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555、枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189、蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841 和蘇 云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No.1043。所述菌劑 C 中,黑曲霉 ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC N0:M209125、 擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii) CGMCC NO. 3. 6608、鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555、枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis