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一種具有殺蟲效果的秸稈腐解菌劑及其應(yīng)用_3

文檔序號:8468554閱讀:來源:國知局
3. 6608 和鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933分別接入三個裝有3號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐、步驟1中1. 3活化的解木聚糖梭 菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis) ACCC No. 03189分別接入兩個裝有4號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐和步驟1中1. 4活化的蘇云金芽 胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841和蘇云金芽孢桿菌賭螟亞 種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No. 1043 分別接入兩 個裝有5號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐,均在30°C進行靜止逐級擴大培養(yǎng),擴大培養(yǎng)過程中接種量為 5%-10% (體積百分比含量),分別得到黑曲霉ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO: M209125發(fā)酵液(10X109cfu/ml)(簡稱黑曲霉ZM-8發(fā)酵液)、擬康氏木霉(Trichoderma 口8611(1〇1?)11;[1^;[;006]\0^勵.3.6608 發(fā)酵液(10\109〇;1!\1/1111)(簡稱擬康氏木霉發(fā)酵液)、 鮮綠青霉(卩6]1;[(3;[11;[11111¥181(1;[031:11111)06]\0^腸.3.5933 發(fā)酵液(10\109〇;1!\1/1111)(簡 稱鮮綠青霉發(fā)酵液)、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555發(fā)酵液 (10X109cfu/ml)(簡稱解木聚糖梭菌發(fā)酵液)和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189發(fā)酵液(10X 109cfu/ml)(簡稱枯草芽胞桿菌發(fā)酵液)、蘇云金芽胞桿菌殺蟲變 種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 發(fā)酵液(10X109cfu/ml)(簡稱蘇云金芽 胞桿菌殺蟲變種發(fā)酵液)和蘇云金芽孢桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae Shvetsova)ACCC CFCC No. 1043發(fā)酵液(10X109cfu/ml)(簡稱蘇云金芽抱桿菌 蠟螟亞種發(fā)酵液)。
[0052] 3、菌劑的制備
[0053] 3.1、菌劑A的制備
[0054] 將按照步驟2得到的蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種發(fā)酵液和蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞 種發(fā)酵液的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為1:1的比例進行混合得到發(fā)酵混合液A。該發(fā)酵 混合液A中,蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841和蘇云 金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae)CFCC No. 1043 的含量 均為5 X 109cfu/ml。將吸附載體和上述發(fā)酵混合液A混合,保持總含水量為75% (質(zhì)量百 分比),30°C靜止培養(yǎng)3天待充分吸附后,35°C通風自然干燥得到菌劑A,菌劑A中的活性成 分的含量為1 X 108cfu/g菌劑,菌劑A的活性成分為:蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 和蘇云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae)CFCC No. 1043。所述菌劑A中,蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 和蘇云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae) CFCC No. 1043 的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為 1:1〇
[0055] 3. 2、菌劑B的制備
[0056] 按照步驟2得到的黑曲霉ZM-8發(fā)酵液、擬康氏木霉發(fā)酵液、鮮綠青霉發(fā)酵液、解 木聚糖梭菌發(fā)酵液和枯草芽胞桿菌發(fā)酵液的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為1:1:1:1:1的 比例進行混合得到發(fā)酵混合液B。該發(fā)酵混合液B中,黑曲霉ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608、 鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189 的含 量均為2 X 109cfu/ml。將吸附載體和上述發(fā)酵混合液B混合,保持總含水量為75% (質(zhì)量 百分比),30°C靜止培養(yǎng)3天待充分吸附后,35°C通風自然干燥得到菌劑B,菌劑B中的活性 成分的含量為1 X 108cfu/g菌劑,菌劑B的活性成分為:黑曲霉ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608、 鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189。所 述菌劑 B 中,黑曲霉 ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉 (!'1';[。110(161'1]1&卩8611(1〇1?)11;[1^;[;006]\0^腸.3.6608、鮮綠青霉(?611;[。;[11;[11111¥181(1;[。&1:11111) CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞 桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189 的菌落形成單位(cfu)數(shù)目比為 1:1:1:1: 1。
[0057] 3. 3、菌劑C的制備
[0058] 將按照步驟2得到的黑曲霉ZM-8發(fā)酵液、擬康氏木霉發(fā)酵液、鮮綠青霉發(fā)酵 液、解木聚糖梭菌發(fā)酵液、枯草芽胞桿菌發(fā)酵液、蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種發(fā)酵液和 蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種發(fā)酵液進行混合得到發(fā)酵混合液C。該發(fā)酵混合液C中,黑 曲霉 ZM-8 (Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC N0.3.6608 和鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933 的含量均為 lX109cfu/ml,解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189 的含量均為 2X109cfu/ml, 蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841和蘇云金芽孢桿菌 賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No. 1043 的含量 均為1. 5X 109cfu/ml。將吸附載體和上述發(fā)酵混合液C混合,保持總含水量為75% (質(zhì) 量百分比),30°C靜止培養(yǎng)3天待充分吸附后,35°C通風自然干燥得到菌劑C,菌劑C中的 活性成分的含量為1 X 108cfu/g菌劑,菌劑C的活性成分為:黑曲霉ZM-8 (Aspergi 1 lus niger ZM_8)CCTCC NO :M209125、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608、鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌 (Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555、枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189、蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No.01841 和蘇 云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No.1043。所述菌劑 C 中,黑曲霉 ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC N0:M209125、 擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii) CGMCC NO. 3. 6608、鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555、枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis
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