一種醇脫氫酶在不對稱還原反應(yīng)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物化學(xué)工程領(lǐng)域，具體涉及一種利用醇脫氫酶催化進(jìn)行不對稱還原 反應(yīng)以制備手性醇的酶-化學(xué)合成方法，以及進(jìn)一步利用該手性醇制備單一構(gòu)型的西汀類 藥物特別是托莫西汀的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 選擇性血清素再攝取抑制劑和去甲腎上腺素再攝取抑制劑類抗抑郁藥多為 含有3-芳氧基-3-芳基丙胺結(jié)構(gòu)的西汀類藥物，例如氟西?。‵luoxetine)、尼索西汀 (Nisoxetine)、托莫西?。═omoxetine)，它們的結(jié)構(gòu)依次如下所示：
[0003]
【主權(quán)項】
1. 一種酶催化制備如式II所示的手性醇的方法，其特征在于：利用醇脫氫酶催化式 III所示的前手性羰基化合物進(jìn)行不對稱還原反應(yīng)，形成式II所示的手性醇；反應(yīng)式如下 所示：
其中，Y選自鹵素、氨基、單取代或二取代氨基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述不對稱還原反應(yīng)在pH為5. 0-8. 0的 異丙醇水溶液中進(jìn)行。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述異丙醇溶液中還含有0-1. OmM的 NADP+〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述不對稱還原反應(yīng)在含有葡萄糖脫氫 酶和葡萄糖的pH為5. 0-8. 0的水溶液中進(jìn)行。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述葡萄糖在反應(yīng)液中的含量為5-200g/ L，葡萄糖脫氫酶的含量為0. 01-lg/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述水溶液中還含有0-1. OmM的 NADP+ 或 NAD+。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：在反應(yīng)體系中，式III所示的前手性羰 基化合物的濃度為l_200g/L，醇脫氫酶的用量為0. 01-10g/L，反應(yīng)在振蕩或攪拌條件下進(jìn) 行，反應(yīng)溫度為20-35 °C。
9. 一種制備式I化合物的方法，包括如下步驟： a) 利用醇脫氫酶催化式III所示的前手性羰基化合物進(jìn)行不對稱還原反應(yīng)，形成式II 所示的手性醇； b) 式II所示的手性醇與試劑G-X反應(yīng)，生成式I化合物； 反應(yīng)式如下所示：
其中，Y選自鹵素、氨基、單取代或二取代的氨基； G選自苯基、甲苯基、三鹵代甲基苯基、烷氧基甲苯基或萘基，優(yōu)選1-萘基、2-甲基苯 基、2-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基； X選自鹵素，如氟、氯、溴、碘。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：步驟b)中式II手性醇與試劑G-X的反 應(yīng)是在含有堿的醚類溶劑中進(jìn)行。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于：所述的醚類溶劑為極性醚類溶劑，所述 的堿選自氫氧化鈉和/或氫氧化鉀。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：步驟b)中，試劑G-X與式II手性醇的 摩爾比為1-5 :1 ;所述的堿與式II手性醇的摩爾比為1-5 :1 ;反應(yīng)溫度為10-65°C ;反應(yīng)時 間為5-20小時。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種利用醇脫氫酶催化進(jìn)行不對稱還原反應(yīng)以制備手性醇的酶-化學(xué)合成方法，以及進(jìn)一步利用該手性醇制備單一構(gòu)型的西汀類藥物特別是托莫西汀的方法。該方法反應(yīng)條件溫和，原料成本低，對環(huán)境友好，反應(yīng)收率高，且產(chǎn)物光學(xué)純度高，相比于傳統(tǒng)的不對稱還原制備方法具有明顯優(yōu)勢。
【IPC分類】C12P7-22, C12P13-00
【公開號】CN104805142
【申請?zhí)枴緾N201510079279
【發(fā)明人】羅煜, 丁時澄, 瞿旭東, 王海濤
【申請人】南京博優(yōu)康遠(yuǎn)生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年2月13日