一種等離子體滅菌活性物質(zhì)作用因子的定量分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于消毒技術(shù)領(lǐng)域，特別是提供了一種等離子體滅菌活性物質(zhì)作用因子的定量分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002]用于等離子體醫(yī)學(xué)的等離子體源產(chǎn)生的活性物質(zhì)本質(zhì)上是由原子氧(0)、羥基自由基(OH)、過氧化物陰離子(H202_)和臭氧(O3)等組成。這些從等離子體源中釋放出的活性物質(zhì)是通過不同反應(yīng)途徑產(chǎn)生的，例如電子碰撞激發(fā)以及分解，而且它們?cè)诘入x子體-表面相互作用中起到了重要作用。這些活性物質(zhì)中的幾種能與生物物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。OH自由基能夠攻擊質(zhì)膜的不飽和脂肪酸。甚至等離子體處理細(xì)胞能導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化作用。蛋白質(zhì)中的氨基酸易于被氧原子以及亞穩(wěn)態(tài)氧分子的氧化。有趣的是氧化應(yīng)激能夠?qū)е录?xì)胞內(nèi)粘附分子功能產(chǎn)生明顯或特殊變化，而且氧化應(yīng)激在導(dǎo)致細(xì)胞死亡的凋亡以及壞疽途徑中起到了核心作用。所產(chǎn)生的活性物質(zhì)甚至能夠改變細(xì)胞的酶活性因?yàn)橐约白C明經(jīng)過等離子體處理存活的細(xì)菌細(xì)胞的新陳代謝速率發(fā)生了改變。大多數(shù)文獻(xiàn)認(rèn)為活性物質(zhì)可能在所觀察到的低溫等離子體對(duì)細(xì)胞作用現(xiàn)象中起到核心作用，然而，對(duì)于每種活性物質(zhì)的準(zhǔn)確作用并未達(dá)成共識(shí)，對(duì)等離子體產(chǎn)生的活性物質(zhì)作用因子的定量研宄甚少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述問題，本發(fā)明提出一種等離子體滅菌活性物質(zhì)作用因子的定量分析方法。
[0004]本發(fā)明為達(dá)到以上目的，是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
[0005]包括的步驟如下:(I)、將0.5mm直徑的0.22微米孔徑的混合纖維素酯濾膜剪成I X Icm的濾膜塊，然后將菌膜塊逐一分裝到干燥、無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，打開培養(yǎng)皿在紫外燈下將濾膜塊正反面各滅菌5min待用，然后取10 μ I上述原始菌液滴在濾膜塊上，待液體被濾膜塊完全吸收之后進(jìn)行后續(xù)處理；(2)、將彎曲尼龍導(dǎo)管一頭接到等離子體消毒器噴嘴處，將導(dǎo)電性能良好的鐵絲篩網(wǎng)覆蓋在去蓋的培養(yǎng)皿上，保證等離子體流不是直射培養(yǎng)基，從而屏蔽掉帶電粒子和紫外線，管的另一頭置于培養(yǎng)皿中心上方，進(jìn)行等離子體處理；(3)、等離子體處理后立即將帶菌濾膜塊放入無(wú)菌、裝有1ml無(wú)菌水的50ml旋口離心管里，每個(gè)離心管相對(duì)應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記編號(hào)，將帶菌濾膜塊、1ml無(wú)菌水的離心管用漩渦振蕩器振蕩60s，并將離心管放到支架上，用移液槍取900 yL的無(wú)菌水稀釋液注入離心管內(nèi)，標(biāo)明稀釋倍數(shù)；取100 μ L細(xì)菌溶液注入第一個(gè)離心管中，并反復(fù)，使之混合均勻，此即稀釋至10倍；更換槍頭，從10倍管中取100 μ L細(xì)液放入第二支離心管中并混合均勻，即稀釋至100倍，同法可將菌液稀釋至101咅；(4)、取稀釋好的細(xì)菌溶液接種培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)皿接種100 μ L菌液，一式三份，用無(wú)菌玻璃棒將液體均勻涂抹于整個(gè)培養(yǎng)皿；涂完后將玻璃棒在酒精燈火焰上灼燒滅菌一遍，用酒精棉球擦拭后，然后再在火焰上灼燒一遍，放回支架；(5)將接種后的培養(yǎng)皿倒置于37°C的培養(yǎng)箱中，待培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。
【附圖說明】
[0006]圖1為本發(fā)明方法的活性物質(zhì)分離示意圖。
[0007]圖中:1等離子體消毒器、2等離子體射流、3尼龍管、4鐵絲篩網(wǎng)、5培養(yǎng)皿、6帶菌濾月吳塊。
[0008]圖2為活性物質(zhì)定量分析圖。
【具體實(shí)施方式】
[0009]實(shí)施例
[0010]在超凈工作臺(tái)中，制備含有大腸桿菌菌種(編號(hào):ATTC25922)的0.22微米孔徑的混合纖維素酯濾膜，然后進(jìn)行定量研宄，(I)、將0.5_直徑的0.22微米孔徑的混合纖維素酯濾膜剪成IXlcm的濾膜塊，然后將菌膜塊逐一分裝到干燥、無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，打開培養(yǎng)皿在紫外燈下將濾膜塊正反面各滅菌5min待用，然后取10 μ I (細(xì)菌數(shù)約為17)上述原始菌液滴在濾膜塊上，待液體被濾膜塊完全吸收之后(即濾膜上無(wú)明顯水滴)進(jìn)行后續(xù)處理；
(2)、如附圖1，將4cm長(zhǎng)的彎曲尼龍導(dǎo)管3 —頭接到等離子體消毒器I噴嘴處，將導(dǎo)電性能良好的300目鐵絲篩網(wǎng)4覆蓋在去蓋的培養(yǎng)皿5上，保證等尚子體流不是直射培養(yǎng)基，從而屏蔽掉帶電粒子和紫外線，尼龍管3的另一頭置于培養(yǎng)皿5中心上方，保證噴嘴距離皿中心2cm，將氣體流量調(diào)為5L/min進(jìn)行滅菌，等離子體射流2處理時(shí)間分別取0、30、60、90和120s ; (3)、處理后立即將帶菌濾膜塊放入無(wú)菌、裝有1ml無(wú)菌水的50ml旋口離心管里，注意每個(gè)離心管相對(duì)應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記編號(hào)，將帶菌濾膜塊、1ml無(wú)菌水的離心管用漩渦振蕩器振蕩60s，并將離心管(1.5mL容量)放到支架上，標(biāo)明稀釋倍數(shù)，用數(shù)字式移液槍取900 μ L的無(wú)菌水稀釋液注入離心管內(nèi)；取10yL細(xì)菌溶液注入第一個(gè)離心管中，并反復(fù)，使之混合均勻(漩渦振蕩器振蕩1s)，此即稀釋至10倍；更換槍頭，從10倍管中取100 μ L細(xì)液放入第二支離心管中并混合均勻，即稀釋至100倍，同法可將菌液稀釋至10"倍；(4)、取稀釋好的細(xì)菌溶液接種培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)皿接種100 μ L菌液，一式三份，用無(wú)菌玻璃棒將液體均勻涂抹于整個(gè)培養(yǎng)皿；涂完后將玻璃棒在酒精燈火焰上灼燒滅菌一遍，用酒精棉球擦拭后，然后再在火焰上灼燒一遍，放回支架；(5)將接種后的培養(yǎng)皿倒置于37°C的培養(yǎng)箱中，待培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。細(xì)菌數(shù)量變化結(jié)果如附圖2所示，通過與未屏蔽掉帶電粒子和紫外線的等離子體處理效果比較發(fā)現(xiàn)，屏蔽掉帶電粒子和紫外線之后的等離子體處理殺菌能力仍然非常強(qiáng)，證明了等離子體射流中的活性物質(zhì)是主要?dú)⒕饔靡蜃?，通過細(xì)菌對(duì)數(shù)濃度比較可以完成活性物質(zhì)作用因子的定量分析。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種等離子體滅菌活性物質(zhì)作用因子的定量分析方法，其特征在于該方法的步驟如下:(I)、將0.5mm直徑的0.22微米孔徑的混合纖維素酯濾膜剪成I X Icm的濾膜塊，然后將菌膜塊逐一分裝到干燥、無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，打開培養(yǎng)皿在紫外燈下將濾膜塊正反面各滅菌5min待用，然后取10 μ I上述原始菌液滴在濾膜塊上，待液體被濾膜塊完全吸收之后進(jìn)行后續(xù)處理；(2)、將彎曲尼龍導(dǎo)管一頭接到等離子體消毒器噴嘴處，將導(dǎo)電性能良好的鐵絲篩網(wǎng)覆蓋在去蓋的培養(yǎng)皿上，保證等離子體流不是直射培養(yǎng)基，從而屏蔽掉帶電粒子和紫外線，管的另一頭置于培養(yǎng)皿中心上方，進(jìn)行等離子體處理；(3)、等離子體處理后立即將帶菌濾膜塊放入無(wú)菌、裝有1ml無(wú)菌水的50ml旋口離心管里，每個(gè)離心管相對(duì)應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記編號(hào)，將帶菌濾膜塊、1ml無(wú)菌水的離心管用漩渦振蕩器振蕩60s，并將離心管放到支架上，用移液槍取900 μ L的無(wú)菌水稀釋液注入離心管內(nèi)，標(biāo)明稀釋倍數(shù)；取100 μ L細(xì)菌溶液注入第一個(gè)離心管中，并反復(fù)，使之混合均勻，此即稀釋至10倍；更換槍頭，從10倍管中取.100 μ L細(xì)液放入第二支離心管中并混合均勻，即稀釋至100倍，同法可將菌液稀釋至1n倍；(4)、取稀釋好的細(xì)菌溶液接種培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)皿接種100 μ L菌液，一式三份，用無(wú)菌玻璃棒將液體均勻涂抹于整個(gè)培養(yǎng)皿；涂完后將玻璃棒在酒精燈火焰上灼燒滅菌一遍，用酒精棉球擦拭后，然后再在火焰上灼燒一遍，放回支架；(5)將接種后的培養(yǎng)皿倒置于37°C的培養(yǎng)箱中，待培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種等離子體滅菌活性物質(zhì)作用因子的定量分析方法，其步驟如下：首先準(zhǔn)備1×1cm的帶菌濾膜塊；然后將彎曲尼龍導(dǎo)管一頭接到等離子體消毒器噴嘴處，將導(dǎo)電性能良好的鐵絲篩網(wǎng)覆蓋在去蓋的培養(yǎng)皿上，保證等離子體流不是直射培養(yǎng)基，從而屏蔽掉帶電粒子和紫外線，管的另一頭置于培養(yǎng)皿中心上方，進(jìn)行等離子體處理；等離子體處理后立即將帶菌濾膜塊進(jìn)行稀釋和培養(yǎng)，通過與未屏蔽掉帶電粒子和紫外線的等離子體處理效果比較可得到等離子產(chǎn)生的活性物質(zhì)滅菌效果。這種方法通過尼龍管和鐵絲篩網(wǎng)屏蔽掉帶電粒子和紫外線，較好的實(shí)現(xiàn)了等離子體產(chǎn)生的活性物質(zhì)定量分析。
【IPC分類】C12Q1-02, C12R1-19
【公開號(hào)】CN104805174
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510217969
【發(fā)明人】杜長(zhǎng)明, 馬丹燕, 邱培培
【申請(qǐng)人】中山大學(xué)
【公開日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2015年4月24日