沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 沙門(mén)氏菌由于其很強(qiáng)的致病性而被關(guān)注，沙門(mén)氏菌能引起腹瀉，腹痛，發(fā)燒，嘔吐， 甚至死亡。而預(yù)防食品中生物性污染的關(guān)鍵在于對(duì)食源性致病菌的監(jiān)測(cè)能力和水平。近十 年來(lái)，研發(fā)了一種實(shí)時(shí)檢測(cè)沙門(mén)氏菌的磁致伸縮生物傳感器。其檢測(cè)機(jī)理是當(dāng)沙門(mén)氏菌吸 附在磁致伸縮生物傳感器上時(shí)，生物傳感器重量增加，導(dǎo)致其共振頻率發(fā)生改變，從而根據(jù) 檢測(cè)的共振頻率改變量確認(rèn)待測(cè)物質(zhì)中沙門(mén)氏菌的濃度。
[0003] 然而，當(dāng)其他細(xì)菌或雜質(zhì)吸附到生物傳感器上時(shí)，也會(huì)同樣引起生物傳感器重量 增加，使其共振頻率發(fā)生改變，由此產(chǎn)生檢測(cè)誤差，導(dǎo)致生物傳感器檢測(cè)精確度降低。因此， 有效降低磁致伸縮生物傳感器非專(zhuān)一性吸附沙門(mén)氏菌是十分必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：基于上述問(wèn)題，本發(fā)明提供沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢 測(cè)方法。
[0005] 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的一個(gè)技術(shù)方案是：沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢測(cè)方 法，包括以下步驟：
[0006] (1)制備生物傳感器：合金切割，清洗，真空退火，合金表面依次涂覆防腐蝕層和 生物活性層，制得磁彈性共振生物傳感器；
[0007] (2)生物傳感器表面沉積E2噬菌體：把生物傳感器浸入E2噬菌體菌懸液中l(wèi)h，使 噬菌體均勻地吸附在生物傳感器表面；
[0008] (3)生物傳感器表面沉積阻滯劑：把附有噬菌體的生物傳感器浸入糖蛋白緩沖液 中2h，獲得測(cè)試生物傳感器；
[0009] (4)檢測(cè)待測(cè)樣品中沙門(mén)氏菌的濃度：把測(cè)試生物傳感器浸泡在含有沙門(mén)氏菌的 待測(cè)樣品溶液中30min，取出后用去離子水清洗測(cè)試生物傳感器2次，檢測(cè)測(cè)試生物傳感器 表面沙門(mén)氏菌吸附情況。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟（2)中E2噬菌體菌懸液的E2噬菌體濃度為1X103~1X10 9vir/ mL〇
[0011] 進(jìn)一步地，步驟（3)中糖蛋白緩沖液的溶劑為T(mén)BS。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是：使用糖蛋白緩沖液作為阻滯劑來(lái)有效降低生物傳感器非專(zhuān) 一性吸附沙門(mén)氏菌；采用的技術(shù)方法是將由蛋白質(zhì)大分子構(gòu)成的阻滯劑覆蓋在傳感器表面 中沒(méi)有固定噬菌體的局部，從而阻止其他細(xì)菌產(chǎn)生的非專(zhuān)一性吸附，由此避免因非專(zhuān)一性 結(jié)合導(dǎo)致的檢測(cè)誤差，保障生物傳感器的檢測(cè)精度。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。
[0014] 圖1是在濃度1.OX106CFU/mL的沙門(mén)氏菌溶液中浸泡30分鐘后，沒(méi)有使用糖蛋 白阻滯劑的測(cè)試生物傳感器表面吸附細(xì)菌情況；
[0015] 圖2是在濃度1. 0X106CFU/mL的沙門(mén)氏菌溶液中浸泡30分鐘后，使用糖蛋白阻 滯劑的測(cè)試生物傳感器表面吸附細(xì)菌情況；
[0016] 圖3是在濃度1.OX106CFU/mL的沙門(mén)氏菌溶液中浸泡30分鐘后，沒(méi)有使用糖蛋 白阻滯劑的控制生物傳感器表面吸附細(xì)菌情況；
[0017] 圖4是在濃度1.OX106CFU/mL的沙門(mén)氏菌溶液中浸泡30分鐘后，使用糖蛋白阻 滯劑的控制生物傳感器表面吸附細(xì)菌情況。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 現(xiàn)在結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，以下實(shí)施例旨在說(shuō)明本發(fā)明而不是 對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步限定。
[0019] 實(shí)施例
[0020] (1)使用METGLAS? 2826MB合金作為磁致伸縮生物傳感器平臺(tái)，使用微切割鋸把 合金制成ImmXO. 2mmX0. 028mm大小，使用丙酮進(jìn)行超聲清洗，風(fēng)干。在220°C下真空退火 2h，以消除拋光和切割過(guò)程中的殘余應(yīng)力及缺陷。在合金表面依次濺射涂覆厚度90nm的Cr 層和厚度150nm的Au層，以得到防腐蝕層和生物活性層。
[0021] (2)把磁彈性共振傳感器浸入5X10nvir/mLE2噬菌體菌懸液中l(wèi)h，菌懸液溶劑 為T(mén)BS，噬菌體均勻地物理吸附在生物傳感器表面。
[0022] (3)把附有噬菌體的生物傳感器浸入作為阻滯劑的糖蛋白緩沖液中2h，獲得測(cè)試 生物傳感器。
[0023] (4)配制濃度為1X106CFU/mL沙門(mén)氏菌溶液lmL，把測(cè)試生物傳感器浸泡在沙門(mén) 氏菌溶液中30min，取出后用去離子水清洗測(cè)試生物傳感器2次。
[0024] 測(cè)試結(jié)果如圖1、2示，圖1是光學(xué)顯微鏡下沒(méi)有使用阻滯劑的測(cè)試生物傳感器表 面吸附沙門(mén)氏菌的情況，圖2是光學(xué)顯微鏡下使用阻滯劑的測(cè)試生物傳感器表面吸附沙門(mén) 氏菌的情況。由此可知，使用糖蛋白的測(cè)試生物傳感器上的細(xì)菌明顯比不使用糖蛋白的測(cè) 試生物傳感器上的少，說(shuō)明使用糖蛋白阻滯劑可有效得降低生物傳感器的非專(zhuān)一性細(xì)菌吸 附。
[0025] 對(duì)比例
[0026] (1)使用METGLAS? 2826MB合金作為磁致伸縮生物傳感器平臺(tái)，使用微切割鋸把 合金制成ImmXO. 2mmX0. 028mm大小，使用丙酮進(jìn)行超聲清洗，風(fēng)干。在220°C下真空退火 2h，以消除拋光和切割過(guò)程中的殘余應(yīng)力及缺陷。在合金表面依次濺射涂覆厚度90nm的Cr 層和厚度150nm的Au層，以得到防腐蝕層和生物活性層。
[0027] (2)把生物傳感器浸入作為阻滯劑的糖蛋白緩沖液中2h，獲得控制生物傳感器。
[0028] (3)配制濃度為1X106CFU/mL沙門(mén)氏菌溶液lmL，把控制生物傳感器浸泡在沙門(mén) 氏菌溶液中30min，取出后用去離子水清洗控制生物傳感器2次。
[0029] 測(cè)試結(jié)果如圖3、4示，圖3是光學(xué)顯微鏡下沒(méi)有使用阻滯劑的控制生物傳感器表 面吸附沙門(mén)氏菌的情況，圖4是光學(xué)顯微鏡下使用阻滯劑的控制生物傳感器表面吸附沙門(mén) 氏菌的情況。由此可知，使用糖蛋白的控制生物傳感器上的細(xì)菌明顯比不使用糖蛋白的控 制生物傳感器上的少，說(shuō)明使用糖蛋白阻滯劑可有效地降低生物傳感器的非專(zhuān)一性細(xì)菌吸 附。
[0030] 以上述依據(jù)本發(fā)明的理想實(shí)施例為啟示，通過(guò)上述的說(shuō)明內(nèi)容，相關(guān)工作人員完 全可以在不偏離本項(xiàng)發(fā)明技術(shù)思想的范圍內(nèi)，進(jìn)行多樣的變更以及修改。本項(xiàng)發(fā)明的技術(shù) 性范圍并不局限于說(shuō)明書(shū)上的內(nèi)容，必須要根據(jù)權(quán)利要求范圍來(lái)確定其技術(shù)性范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢測(cè)方法，其特征是：包括以下步驟： (1) 制備生物傳感器：合金切割，清洗，真空退火，合金表面依次涂覆防腐蝕層和生物 活性層，制得磁彈性共振生物傳感器； (2) 生物傳感器表面沉積E2噬菌體：把生物傳感器浸入E2噬菌體菌懸液中l(wèi)h，使噬菌 體均勻地吸附在生物傳感器表面； (3) 生物傳感器表面沉積阻滯劑：把附有噬菌體的生物傳感器浸入糖蛋白緩沖液中 2h，獲得測(cè)試生物傳感器； (4) 檢測(cè)待測(cè)樣品中沙門(mén)氏菌的濃度：把測(cè)試生物傳感器浸泡在含有沙門(mén)氏菌的待測(cè) 樣品溶液中30min，取出后用去離子水清洗測(cè)試生物傳感器2次，檢測(cè)測(cè)試生物傳感器表面 沙門(mén)氏菌吸附情況。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢測(cè)方法，其特征是：所述的步驟（2) 中E2噬菌體菌懸液的E2噬菌體濃度為IXIO3~IX10 9vir/mL。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢測(cè)方法，其特征是：所述的步驟（3) 中糖蛋白緩沖液的溶劑為T(mén)BS。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及沙門(mén)氏菌的高專(zhuān)一性檢測(cè)方法，包括以下步驟：制備生物傳感器、生物傳感器表面沉積E2噬菌體、生物傳感器表面沉積阻滯劑、檢測(cè)待測(cè)樣品中沙門(mén)氏菌的濃度。本發(fā)明的有益效果是：使用糖蛋白緩沖液作為阻滯劑來(lái)有效降低生物傳感器非專(zhuān)一性吸附沙門(mén)氏菌；采用的技術(shù)方法是將由蛋白質(zhì)大分子構(gòu)成的阻滯劑覆蓋在傳感器表面中沒(méi)有固定噬菌體的局部，從而阻止其他細(xì)菌產(chǎn)生的非專(zhuān)一性吸附，由此避免因非專(zhuān)一性結(jié)合導(dǎo)致的檢測(cè)誤差，保障生物傳感器的檢測(cè)精度。
【IPC分類(lèi)】C12R1-92, C12Q1-10, C12R1-42, C12Q1-70
【公開(kāi)號(hào)】CN104818343
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510230811
【發(fā)明人】胡靜, 胡佳佳
【申請(qǐng)人】常州大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年5月7日