含砜基團的5-氟-n-(吡啶-2-基)吡啶-2-胺衍生物的制作方法
【專利說明】含砜基團的5-氟-N-(吡啶-2-基）吡啶-2-胺衍生物
[0001] 本發(fā)明涉及如本文所描述和定義的通式（I)的含砜基團的5-氟-N-(吡啶-2-基） P比啶-2-胺衍生物，及其制備方法，其在治療和/或預防疾病--特別是過度增殖性疾病和 /或病毒引起的感染性疾病和/或心血管疾病一一中的用途。本發(fā)明還涉及用于制備所述 通式（I)的化合物的中間體化合物。
[0002] 細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK)蛋白家族由細胞分裂周期的關鍵調(diào)節(jié)物（細胞周 期CDK)(其參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)（轉(zhuǎn)錄CDK))的成員和具有其他功能的成員組成。CDK需要 激活與調(diào)節(jié)性細胞周期蛋白亞基的聯(lián)系。細胞周期CDK的CDK1/細胞周期蛋白B、CDK2/細 胞周期蛋白A、CDK2/細胞周期蛋白E、CDK4/細胞周期蛋白D和CDK6/細胞周期蛋白D被相 繼激活，以驅(qū)動細胞進入并穿過細胞分裂周期。轉(zhuǎn)錄CDK的CDK9/細胞周期蛋白T和CDK7/ 細胞周期蛋白H通過羧基末端結(jié)構(gòu)域（CTD)的磷酸化調(diào)節(jié)RNA聚合酶II的活性。正轉(zhuǎn)錄 因子b(P-TEFb)為CDK9和四種細胞周期蛋白配偶子（partner)(細胞周期蛋白T1、細胞周 期蛋白K、細胞周期蛋白T2a或T2b)之一的異二聚體。
[0003] 而⑶K9 (NCBI基因庫基因ID1025)排他性地參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，此外⑶K7作為⑶K激 活激酶（CAK)參與細胞周期調(diào)節(jié)。
[0004] 基因通過RNA聚合酶II的轉(zhuǎn)錄由預引發(fā)復合物在啟動子區(qū)的組裝及CTD的Ser5 和Ser7通過⑶K7/細胞周期蛋白H的磷酸化而啟動。對于大部分基因，RNA聚合酶II在 其沿DNA模板移動20-40個核苷酸后停止mRNA轉(zhuǎn)錄。RNA聚合酶II的這種啟動子近側(cè)暫 停由負性延伸因子介導，并且被認為是響應各種刺激以控制快速誘導的基因的表達的主要 控制機制（Cho等人，CellCycle9, 1697, 2010)。P-TEFb關鍵性地參與克服RNA聚合酶II 的啟動子近側(cè)暫停和通過CTD的Ser2的磷酸化及負向延伸因子的磷酸化和失活轉(zhuǎn)為多產(chǎn) 的延伸狀態(tài)。
[0005]P-TEFb自身的活性由若干機制調(diào)節(jié)。約一半細胞的P-TEFb存在于與7SK的 小核RNA(7SKsnRNA)、La相關蛋白7 (LARP7/PIP7S)和六亞甲基雙乙酰胺誘導蛋白 l/2(HEXMl/2,He等人，MolCell29,588,2008)的失活復合物中。其余一半P-TEFb存 在于含布羅莫結(jié)構(gòu)域（bromodomain)蛋白Brd4的活性復合物中（Yang等人，MolCell 19, 535, 2005)。Brd4通過與乙酰化組蛋白相互作用將P-TEFb募集到預備用于基因轉(zhuǎn)錄 的染色質(zhì)區(qū)域。通過交替與其正調(diào)節(jié)物和負調(diào)節(jié)物相互作用，P-TEFb保持功能平衡：與 7SKsnRNA復合物結(jié)合的P-TEFb表示能夠根據(jù)細胞轉(zhuǎn)錄和細胞增殖需要釋放活性P-TEFb 的儲庫（Zhou&Yik,MicrobiolMolBiolRev70,646,2006)。此外，P-TEFb活性由翻譯 后修飾來調(diào)節(jié)，其包括磷酸化/去磷酸化、泛素化和乙?；▍⒁奀ho等人，CellCycle 9, 1697, 2010)〇
[0006]P-TEFb異二聚體的⑶K9激酶活性的活性下調(diào)與多種人類病理學環(huán)境有關，例如 過度增殖性疾?。ɡ绨┌Y）、病毒引起的感染性疾病或心血管疾病：
[0007] 癌癥被認為是由增殖和細胞死亡（細胞凋亡）的失衡介導的過度增殖性疾病。在 多種人類腫瘤中發(fā)現(xiàn)高水平的抗凋亡Bcl-2-家族蛋白，它們是腫瘤細胞存活延長和治療 抵抗的原因。已顯示，P-TEFb激酶活性的抑制會降低RNA聚合酶II的轉(zhuǎn)錄活性，導致短壽 的抗凋亡蛋白（特別是Mcl-1和XIAP)減少，恢復腫瘤細胞經(jīng)歷細胞凋亡的能力。許多與轉(zhuǎn) 化的腫瘤表型有關的其他蛋白（例如Myc、NF-kB應答基因轉(zhuǎn)錄物、有絲分裂激酶）是短壽 蛋白或由短壽轉(zhuǎn)錄物編碼，其對由P-TEFb抑制介導的RNA聚合酶II的活性降低敏感（參 見Wang&Fischer, Trends Pharmacol Sci29, 302, 2008)〇
[0008] 許多病毒依靠宿主細胞的轉(zhuǎn)錄機制來轉(zhuǎn)錄它們自己的基因組。在HIV-1的情況 中，RNA聚合酶II被募集至病毒LTR的啟動子區(qū)域。病毒轉(zhuǎn)錄激活劑（Tat)蛋白與初生的病 毒轉(zhuǎn)錄物結(jié)合，并克服通過P-TEFb的募集引起的啟動子近側(cè)RNA聚合酶II暫停，這反過來 促進轉(zhuǎn)錄延伸。此外，Tat蛋白通過替換7SKsnRNA復合物中的P-TEFb抑制蛋白HEXM1/2 來增加活性P-TEFb部分。最新數(shù)據(jù)已顯示，P-TEFb的激酶活性的抑制足以在對宿主細胞 無細胞毒性的激酶抑制劑濃度下阻斷HIV-1復制（參見Wang&Fischer,TrendsPharmacol Sci29, 302, 2008)。相似地，對于其他病毒，如B-細胞癌癥相關Epstein-Barr病毒，已報 道了通過病毒蛋白的P-TEFb募集，其中核抗原EBNA2蛋白與P-TEFb相互作用（Bark-Jones 等人，Oncogene，25, 1775, 2006)，及人類T-嗜淋巴細胞病毒1型（HTLV-1)，其中轉(zhuǎn)錄激活 劑Tax募集P-TEFb(Zhou等人，JVirol. 80, 4781，2006) 〇
[0009] 心臟肥大（心臟對于機械超負荷和壓力（血流動力壓力，例如高血壓、心肌梗死） 的適應性反應）長期會導致心力衰竭和死亡。已顯示，心臟肥大與心肌細胞中增加的轉(zhuǎn)錄 活性和RNA聚合酶II CTD磷酸化相關。已發(fā)現(xiàn)，P-TEFb通過來自失活的7SK snRNA/HEXM 1/2復合物的解離來激活。這些發(fā)現(xiàn)表明P-TEFb激酶活性的藥理學抑制作為治療心臟肥大 的治療方法（參見Dey等人，Cell Cycle 6, 1856, 2007)。
[0010] 總之，多種證據(jù)表明，P-TEFb異二聚體（=⑶K9和四種細胞周期蛋白配偶子（細 胞周期蛋白T1、細胞周期蛋白K、細胞周期蛋白T2a或T2b)之一）的CDK9激酶活性的選擇 性抑制代表治療疾?。ɡ绨┌Y、病毒性疾病和/或心臟疾?。┑男路椒?。CDK9屬于至少 13種密切相關的激酶家族，其中細胞周期CDK亞群在調(diào)節(jié)細胞增殖中履行多種角色。因此， 期望細胞周期CDK(例如CDK1/細胞周期蛋白B、CDK2/細胞周期蛋白A、CDK2/細胞周期蛋 白E、CDK4/細胞周期蛋白D、CDK6/細胞周期蛋白D)和CDK9的共同抑制影響正常增殖組 織，例如腸粘膜、淋巴和造血器官以及生殖器官。為了使CDK9激酶抑制劑的治療范圍最大 化，需要對CDK9具有高選擇性的分子。
[0011] 許多不同出版物中描述了一般性的CDK抑制劑以及CDK9抑制劑：
[0012] W02008129070和W02008129071均描述了 2, 4-二取代的氨基嘧啶通常作為CDK 抑制劑。還宣稱這些化合物中的一些可以分別作為選擇性⑶K9抑制劑（W02008129070)和 CDK5 抑制劑（W02008129071)起作用，但沒有給出具體的CDK9IC5(I(W02008129070)或CDK5 IC5Q(W02008129071)數(shù)據(jù)。這些化合物的嘧啶核的5-位不含氟原子。
[0013]W02008129080公開了 4, 6-二取代的氨基嘧啶，并且證明這些化合物對多種蛋白 激酶（例如⑶K1、⑶K2、⑶K4、⑶K5、⑶K6和⑶K9)的蛋白激酶活性顯示抑制作用，優(yōu)選對 CDK9的抑制作用（實施例80)。
[0014] 102005026129公開了4,6-二取代的氨基嘧啶，并且證明這些化合物對多種蛋白 激酶（特別是⑶K2、⑶K4和⑶K9)的蛋白激酶活性顯示抑制作用。
[0015]W02011116951公開了取代的三嗪衍生物作為選擇性⑶K9抑制劑。
[0016]W02012117048公開了二取代的三嗪衍生物作為選擇性⑶K9抑制劑。
[0017]W02012117059公開了二取代的吡啶衍生物作為選擇性CDK9抑制劑。EP1218360 B1 (對應于US2004116388A1、US7074789B2 和W02001025220A1)描述了三嗪衍生物作為激 酶抑制劑，但沒有公開有效的或選擇性的CDK9抑制劑。
[0018]W02008079933公開了氨基吡啶和氨基嘧啶衍生物及它們作為CDK1、CDK2、CDK3、 ⑶K4、⑶K5、⑶K6、⑶K7、⑶K8或⑶K9抑制劑的用途。
[0019]W02011012661描述了氨基吡啶衍生物用作⑶K抑制劑。
[0020]W02011026917公開了衍生自取代的4-苯基吡啶-2-胺的甲酰胺作為CDK9抑制 劑。
[0021]W02012066065公開了苯基-雜芳基胺作為⑶K9抑制劑。相比其他⑶K亞型，優(yōu)選 CDK9選擇性，然而公開的CDK抑制數(shù)據(jù)限于CDK9。未公開連接到嘧啶核的C4位置的雙環(huán)體 系。在連接至嘧啶核C4的基團中，可視為其包含烷氧基苯基，但未建議通過連接于嘧啶環(huán) C5的氟原子以及嘧啶C2的苯胺來表征的特定取代模式，其特征是間位取代的磺酰基-