液進(jìn)行熱過濾，取濾液，得到羊毛角蛋白溶液。
[0039](4)對(duì)所得到的濾液透析72h，透析膜的截留分子量為8000?14000，每隔3h換一次去離子水。
[0040](5)透析完成后，邊攪拌邊向透析液中加醋酸溶液，調(diào)節(jié)其pH至4.0?4.5，使角蛋白完全析出。
[0041](6)將其靜置2h后，去除上清液，對(duì)沉淀進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速為lOOOOrpm，溫度為10°C，時(shí)間為 1min。
[0042](7)對(duì)離心所得沉淀冷凍12h，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到角蛋白固體。
[0043](8)用粉碎機(jī)將角蛋白固體粉碎成粉末，得到羊毛角蛋白粉末，將其置于4°C待用。最終羊毛角蛋白分子量在1Kda以上的產(chǎn)量最高可達(dá)66%，分子量大部分集中在40?50Kdao
[0044]實(shí)施例3
[0045](I)將羊毛纖維在H2O2堿性溶液中洗凈，其中30% H2O2的濃度為6mL/L，純堿的濃度為1(^/1，溫度為501，浴比40:1。再用乙醇-丙酮混合溶劑脫脂12h，然后將烘干后的羊毛剪碎。其中，脫脂過程使用的脫脂劑浸沒羊毛纖維即可，乙醇-丙酮混合溶劑中乙醇與丙酮的體積比為2:1。
[0046](2)將剪碎后的羊毛纖維加入到L-半胱氨酸-尿素復(fù)合液體中，其中浴比20:1，L-半胱氨酸用量為25g/L，尿素的用量為6mol/L。用200g/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值至10左右，蓋上塞子密封，升溫至75°C，機(jī)械振蕩8h后，得到羊毛和角蛋白的混合溶液。
[0047](3)對(duì)羊毛、角蛋白混合溶液進(jìn)行熱過濾，取濾液，得到羊毛角蛋白溶液。
[0048](4)對(duì)所得到的濾液透析72h，透析膜的截留分子量為8000?14000，每隔3h換一次去離子水。
[0049](5)透析完成后，邊攪拌邊向透析液中加醋酸溶液，調(diào)節(jié)其pH至4.0?4.5，使角蛋白完全析出。
[0050](6)將其靜置2h后，去除上清液，對(duì)沉淀進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速為lOOOOrpm，溫度為10°C，時(shí)間為 1min。
[0051](7)對(duì)離心所得沉淀冷凍24h，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到角蛋白固體。
[0052](8)用粉碎機(jī)將角蛋白固體粉碎成粉末，得到羊毛角蛋白粉末，將其置于4°C待用。最終羊毛角蛋白分子量在SKda以上的產(chǎn)量最高可達(dá)68%，分子量大部分集中在40?50Kda。
[0053]實(shí)施例4
[0054](I)將羊毛纖維在H2O2堿性溶液中洗凈，其中30% H2O2的濃度為6mL/L，純堿的濃度為1(^/1，溫度為501，浴比40:1。再用乙醇-丙酮混合溶劑脫脂12h，然后將烘干后的羊毛剪碎。其中，脫脂過程使用的脫脂劑浸沒羊毛纖維即可，乙醇-丙酮混合溶劑中乙醇與丙酮的體積比為2:1。
[0055](2)將剪碎后的羊毛纖維加入到L-半胱氨酸-尿素復(fù)合液體中，其中浴比20:1，L-半胱氨酸用量為30g/L，尿素的用量為lOmol/L。用200g/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值至10左右，蓋上塞子密封，升溫至95°C，機(jī)械振蕩4h后，得到羊毛和角蛋白的混合溶液。對(duì)羊毛、角蛋白混合溶液進(jìn)行熱過濾，取濾液。
[0056](3)對(duì)所得到的濾液透析72h，透析膜的截留分子量為8000?14000，每隔3h換一次去離子水。
[0057](4)透析完成后，邊攪拌邊向透析液中加醋酸溶液，調(diào)節(jié)其pH至4.0?4.5，使角蛋白完全析出。
[0058](5)將其靜置2h后，去除上清液，對(duì)沉淀進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速為lOOOOrpm，溫度為10°C，時(shí)間為 1min。
[0059](6)對(duì)離心所得沉淀冷凍24h，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到角蛋白固體。最終羊毛角蛋白分子量在8Kda以上的產(chǎn)量最高可達(dá)72%，分子量大部分集中在40?50Kda。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，包括: (1)將羊毛纖維在H2O2的堿性溶液中清洗，然后用水清洗，再用乙醇-丙酮混合溶劑脫脂12?24h，烘干，將得到的羊毛纖維剪碎；其中，清洗的溫度為40?60°C，浴比為30:1?40:1，脫脂過程使用的脫脂劑浸沒羊毛纖維即可； (2)將步驟(I)中剪碎后的羊毛纖維加入到L-半胱氨酸-尿素復(fù)合液體中，浴比10:1?30:1，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至9.5?10.5，密封，升溫至65?85°C，機(jī)械振蕩3?8h，得到羊毛角蛋白溶液；其中，L-半胱氨酸用量為10?50g/L，尿素的用量為5?1mol/L ； (3)對(duì)步驟(2)中得到的羊毛和角蛋白的混合溶液進(jìn)行熱過濾，取濾液，得到羊毛角蛋白溶液； (4)對(duì)步驟(3)中得到的羊毛角蛋白溶液透析48?72h; (5)透析完成后，邊攪拌邊向透析液中加醋酸溶液，調(diào)節(jié)pH至4.0?4.5，使角蛋白完全析出；靜置2?3h后，去除上清液，對(duì)沉淀進(jìn)行離心； (6)將步驟(5)中離心所得沉淀放入_60°C冰箱冷凍6?12h，然后在冷凍干燥機(jī)上干燥48?72h，得到角蛋白固體； (7)用粉碎機(jī)將步驟(6)中得到的角蛋白固體粉碎成粉末，得到羊毛角蛋白粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，其特征在于，所述步驟⑴中H2O2的堿性溶液中30% H2O2的濃度為4-8mL/L，純堿的濃度為5_15g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(I)中乙醇-丙酮混合溶劑中乙醇與丙酮的體積比為1:1?2:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(I)中羊毛纖維剪碎至I?5cm長。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(2)中NaOH溶液的濃度為200g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(2)中振蕩的時(shí)間為4?7h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(4)中透析時(shí)透析膜的截留分子量為8000?14000，每隔3?4h換一次去離子水。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(5)中離心的條件為離心轉(zhuǎn)速為lOOOOrpm，溫度為10?20°C，時(shí)間為lOmin。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用L-半胱氨酸再生羊毛角蛋白的方法，包括：將羊毛纖維洗凈，用乙醇-丙酮混合溶劑脫脂，剪碎；將剪碎的羊毛纖維加入到L-半胱氨酸復(fù)合液體中，密封，在65～85℃下振蕩3～8h，得到羊毛角蛋白溶液。然后熱過濾，取濾液進(jìn)行透析；透析后，調(diào)節(jié)pH值至4.0～4.5，使角蛋白完全析出，離心，對(duì)固體成分進(jìn)行冷凍干燥，粉碎，得到羊毛角蛋白粉末。本發(fā)明簡單實(shí)用，采用成本較低的L-半胱氨酸溶解、醋酸沉析，制備分子量高、提取率高的角蛋白粉末。制成的角蛋白粉末穩(wěn)定，可以較長時(shí)間貯存，粉末可以用于創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)，也可以選擇合適溶劑溶解角蛋白粉末，與其他聚合物進(jìn)行復(fù)合紡絲，應(yīng)用于組織工程等。
【IPC分類】D01F4-00, D06M15-15, D01F8-02, C08L89-04
【公開號(hào)】CN104861663
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510210614
【發(fā)明人】李戎, 王魁, 馬吉宏, 菅應(yīng)凱
【申請(qǐng)人】東華大學(xué)
【公開日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年4月28日