腸膜明串珠菌及其在低溫青貯中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域,涉及一株腸膜明串珠菌及其在低溫青貯中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 青貯是在乳酸菌的厭氧發(fā)酵作用下將碳水化合物轉(zhuǎn)化為有機(jī)酸,從而使pH降低 達(dá)到長期貯存的目的。乳酸菌和溫度是青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)好壞的決定性因素。
[0003] 燕麥?zhǔn)歉吆貐^(qū)冬春飼補(bǔ)的主要飼料作物,由于高寒地區(qū)溫度低海拔高,不利于 乳酸菌的生長,很難發(fā)酵出品質(zhì)優(yōu)良并可以長期貯存的飼料。
[0004] 因此,篩選出耐高低溫、耐鹽、耐酸堿的抗逆性較強(qiáng)的菌株,并將其作為發(fā)酵劑添 加到低溫青貯燕麥飼料中,將會(huì)對(duì)高寒地區(qū)的青貯飼料制作有著巨大的應(yīng)用價(jià)值。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一株腸膜明串珠菌。
[0006] 本發(fā)明所提供的腸膜明串珠菌具體為腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QHl_1135,該菌株已于2015年4月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心 (簡稱CCTCC,地址為:湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)武漢大學(xué)保藏中 心),其保藏編號(hào)為CCTCC NO :M 2015256。
[0007] 所述腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QHl_1135從中國青海省貴德 丹霞地貌冰草分離得到的,該菌株單菌落為圓形,革蘭氏染色陰性,不產(chǎn)過氧化氫;該菌株 能夠發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣,為異型發(fā)酵。在5°C和10°C長勢(shì)良好,45°C環(huán)境生長微弱,在50°C生 長良好,表明該菌株均有良好的耐低溫生長能力。在3. 00%的NaCl濃度中均生長良好,在 6. 50%的NaCl濃度中也可以存活,表明該菌株具有一定的耐鹽能力。液體5°C培養(yǎng)7-14 天,該菌株的上清液pH分別降到3. 5,產(chǎn)酸能力較好。該菌株在pH3. 0-9. 0的環(huán)境中生長良 好,表明該菌株有較好的耐酸堿生長能力。其16S rDNA序列如序列表中序列1所示。
[0008] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種菌劑。
[0009] 本發(fā)明所提供的菌劑的活性成分為所述腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QHl-1135CCTCC NO :M 2015256〇
[0010] 所述菌劑除了包含作為活性成的所述腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QHl-1135CCTCC Ν0:Μ 2015256 外,還可包含輔料,如 MRS 固體培養(yǎng)基(溶 劑為水,溶質(zhì)及其濃度如下:蛋白胨l〇g/L,牛肉膏10g/L,酵母膏5g/L,葡萄糖20g/L,三水 合乙酸鈉 5g/L,吐溫801g/L,磷酸氫二鉀2g/L,檸檬酸銨2g/L,硫酸鎂2g/L,硫酸錳0. 25g/ L,瓊脂17g/L)等。
[0011] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種青貯飼料添加劑。
[0012] 本發(fā)明所提供的青貯飼料添加劑的活性成分為所述腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QHl-1135CCTCC NO :M 2015256〇
[0013] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種青貯飼料。
[0014] 本發(fā)明所提供的青貯飼料中含有所述青貯飼料添加劑。
[0015] 所述腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QH1-1135CCTCC NO :M 2015256 或所述菌劑在如下任一中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍:
[0016] (al)抑制細(xì)菌;
[0017] (a2)制備細(xì)菌抑制劑;
[0018] (a3)制備所述青貯飼料添加劑;
[0019] (a4)制備所述青貯飼料。
[0020] 所述(al)的應(yīng)用為非疾病診斷或治療的應(yīng)用。
[0021] 在所述(al)和所述(a2)中,所述細(xì)菌具體可為藤黃微球菌和/或沙門氏菌。
[0022] 其中,所述腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QH1-1135CCTCC NO : M2015256或所述菌劑對(duì)所述細(xì)菌的抑制具體體現(xiàn)為30°C條件下的抑制。
[0023] 所述青貯飼料添加劑在制備所述青貯飼料中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0024] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種制備所述青貯飼料的方法。
[0025] 本發(fā)明所提供的制備所述青貯飼料的方法,具體可包括:將青貯原料與所述腸膜 明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QHl_1135CCTCC NO :M 2015256 混合,進(jìn)行固體厭 氧發(fā)酵,收集所有發(fā)酵產(chǎn)物,得到所述青貯飼料;
[0026] 在本發(fā)明中,所述青貯原料為燕麥全株;具體為乳熟期燕麥全株,水分含量 82. 97%,切割成l-2cm小段。
[0027] 在所述方法中,所述燕麥全株和所述腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) QH1-1135CCTCC NO :M 2015256 的配比可為 100g :105cfu ;所述發(fā)酵為低溫 發(fā)酵;所述低溫可為5°C ;所述發(fā)酵的時(shí)間可為30天。
[0028] 本發(fā)明所提供的腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QH1-1135CCTCC NO :M 2015256具有耐低溫、耐鹽、耐酸堿等抗逆性,并在低溫青貯(5°C)過程中迅速繁殖并 產(chǎn)酸降PH,有效的抑制有害雜菌的生長或產(chǎn)生,粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維等營養(yǎng)成分有效 保留,非營養(yǎng)物質(zhì)如粗灰分成分降低,達(dá)到長期保存青貯飼料的效果。
[0029] 保藏說明
[0030] 菌種名稱:腸膜明串珠菌
[0031] 拉丁名:(Leuconostoc mesenteroides)
[0032] 菌株編號(hào):QH1-1135
[0033] 保藏機(jī)構(gòu):中國典型培養(yǎng)物保藏中心
[0034] 保藏機(jī)構(gòu)簡稱:CCTCC
[0035] 地址:湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)武漢大學(xué)保藏中心
[0036] 保藏日期:2015年4月28日
[0037] 保藏中心登記入冊(cè)編號(hào):CCTCC NO :M 2015256
【具體實(shí)施方式】
[0038] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明,均為常規(guī)方法。
[0039] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等,如無特殊說明,均可從商業(yè)途徑得到。
[0040] 實(shí)施例1、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)QH1-1135的分離與鑒定
[0041] 一、菌株QH1-1135的分尚與篩選
[0042] 取中國青海省貴德丹霞地貌冰草10g,放入90mL無菌水,震蕩10秒,吸取ImL液體 放于I. 5mL離心管,依次稀釋101,103, IO5倍,取稀釋液體20 μ L分別涂布到MRS瓊脂培養(yǎng) 基上,30°C厭氧培養(yǎng)48小時(shí),取單菌落MRS固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng),將獲得的其中一株菌編號(hào) 為 QH1-1135。
[0043] 其中,所述MRS固體培養(yǎng)基的溶劑為水,溶質(zhì)及其濃度如下:蛋白胨10g/L,牛肉膏 10g/L,酵母膏5g/L,葡萄糖20g/L,三水合乙酸鈉5g/L,吐溫801g/L,磷酸氫二鉀2g/L,檸檬 酸銨2g/L,硫酸鎂2g/L,硫酸錳0. 25g/L,瓊脂17g/L。
[0044] 二、菌株 QH1-1135 的鑒定
[0045] 從以下幾個(gè)方面對(duì)步驟一分離并篩選得到的菌株QH1-1135進(jìn)行鑒定。
[0046] 1、形態(tài)學(xué)鑒定
[0047] 步驟一分離并篩選得到的菌株QH1-1135單菌落革蘭氏染色后,顯微鏡下觀察單 菌落形狀呈圓形。
[0048] 2、生理生化特征鑒定
[0049] 步驟一分離并篩選得到的菌株QH1-1135革蘭氏染色陰性,不產(chǎn)過氧化氫;能夠發(fā) 酵葡萄糖產(chǎn)氣,為異型發(fā)酵。
[0050] 利用API 50CH檢測(cè)菌株QH1-1135對(duì)不同碳源的發(fā)酵利用情況。結(jié)果如表1所 示??梢?,菌株QH1-1135可以發(fā)酵利用半乳糖,葡萄糖,D-甘露糖,七葉靈,纖維二糖,蔗 糖,核糖,L-阿拉伯糖,D-木糖,α-甲基-D-葡糖苷,蜜二糖,甘露醇,麥芽糖,松三糖,棉子 糖,D-果糖做碳源;不可以發(fā)酵利用D-阿拉伯糖醇,甘油,D-阿拉伯糖,β -甲基-木糖苷, L-木糖,半乳糖醇,纖維糖,葡糖酸鹽,糖原,木糖醇,2-酮基-葡糖酸鹽,D-海藻糖,L-阿拉 伯醇,D-來蘇糖,赤藻糖醇,5-酮基-葡糖酸鹽,核糖醇,L-山梨糖,乳糖,鼠李糖,山梨糖, 淀粉,苦杏苷,熊果苷,α -甲基-D-甘露糖,菊糖,β -龍膽二糖,塔格糖,L-海藻糖做碳源; 可以微弱發(fā)酵利用水楊苷,海藻糖,N-乙酰葡糖胺,D