一種濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，屬于黃酒釀造的技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃酒是世界上最古老的酒類之一，也是我國(guó)的特產(chǎn)，享有"國(guó)酒"之美譽(yù)。由于它 的酒度適中，酒香濃郁，口味獨(dú)特，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有食療價(jià)值，深受消費(fèi)者的歡迎。
[0003] 黃酒成分相當(dāng)復(fù)雜，其酒體是一種不穩(wěn)定的膠體，貯存期間的溫度、光照、PH值等 因素的改變都將在一定程度上破壞其膠體平衡，從而使其中的某些物質(zhì)析出，形成沉淀。這 些沉淀雖對(duì)人體無害，但嚴(yán)重影響了黃酒的外觀品質(zhì)。解決黃酒的沉淀問題已迫在眉睫。因 此，對(duì)這一現(xiàn)象的探索和研宄具有重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。
[0004] 關(guān)于黃酒生產(chǎn)方面的相關(guān)報(bào)道很多，但對(duì)于黃酒工藝的系統(tǒng)性研宄還未見詳細(xì)報(bào) 道。本發(fā)明探索了在黃酒發(fā)酵過程中添加具有殺菌作用的中藥材及其產(chǎn)品對(duì)于霉菌和細(xì)菌 的抑制作用，為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒 抑菌圈的方法，通過對(duì)霉菌和細(xì)菌的抑制作用的控制，從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提 供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，包括以下步驟： (1) 菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面， 37°C培養(yǎng)24h，用接種環(huán)從斜面上挑菌到IOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用； (2) 濾紙片的制備及處理：用打孔器打成若干直徑為5. 5mm的圓形濾紙片，經(jīng)120°C干 熱滅菌2h后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；以無菌 水浸過的濾紙做空白； (3) 藥物稀釋：以吸入20 μ L藥液為標(biāo)準(zhǔn)，若紙片薄，藥物原液需作調(diào)整；根據(jù)紙片內(nèi)各 種抗菌藥物的不同濃度配制藥物原液，其濃度需比紙片濃度大200倍；青霉素 G的紙片為 IOU/片，青霉素 G的原液濃度為2000U/mL，200張紙片內(nèi)即加入ImL青霉素 G原液； (4) 紙片浸潤(rùn)、干燥和保存：用無菌操作法將待測(cè)的抗菌藥物溶液Iml加入攤布于滅菌 平皿中的100片紙片中，置冰箱內(nèi)浸泡1-2小時(shí)，不時(shí)翻動(dòng)，使濾紙片將藥液均勻吸凈，如立 即實(shí)驗(yàn)可不烘干，若保存?zhèn)溆每捎孟铝幸环N方法烘干，干燥的抗菌素紙片可保存6個(gè)月； (5) 按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后， 分別加入0. 2mL供試菌，然后用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾 紙片貼在上述含菌平皿上，每種濃度的濾紙片要間隔一定的距離，并以無菌水和4%己醇的 濾紙片作為對(duì)照； 所述步驟（4)中烘干采用培養(yǎng)皿烘干法或真空抽干法： 所述的培養(yǎng)皿烘干法為：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37°C溫箱內(nèi)保持 2-3h即可干燥，或放在無菌室內(nèi)過夜干燥； 所述的真空抽干法為：將放有抗菌藥物紙片的試管置于干燥器了，用真空抽氣機(jī)抽 干； 所述步驟（4)中的紙片保存為：將制好的各種藥物紙片裝入無菌小瓶中置冰箱內(nèi)保存 備用，收到紙片后應(yīng)立即保存在-20-4°C中，放置1周使用的紙片；紙片容器打開前先置室 溫平衡，裝紙片的容器自冰箱取出后，在室溫IOmin以上打開，紙片貼畢應(yīng)把未用完的放回 冰箱中。
[0007] 所述的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為：牛肉膏3. Og、蛋白胨10. 0g、食鹽5. 0g、瓊脂 18-20g和自來水1000 mL用NaOH調(diào)節(jié)PH至7. 0~7. 2, lkg/cm2、121°C下滅菌30分鐘。
[0008] 本發(fā)明的有益效果如下： 本發(fā)明濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，通過對(duì)霉菌和細(xì)菌的抑制作用的控制， 從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于 此。
[0010] 本發(fā)明一種濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，包括以下步驟： (1) 菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面， 37°C培養(yǎng)24h，用接種環(huán)從斜面上挑菌到IOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用； (2) 濾紙片的制備及處理：用打孔器打成若干直徑為5. 5mm的圓形濾紙片，經(jīng)120°C干 熱滅菌2h后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；以無菌 水浸過的濾紙做空白； (3) 藥物稀釋：以吸入20 μ L藥液為標(biāo)準(zhǔn)，若紙片薄，藥物原液需作調(diào)整；根據(jù)紙片內(nèi)各 種抗菌藥物的不同濃度配制藥物原液，其濃度需比紙片濃度大200倍；青霉素 G的紙片為 IOU/片，青霉素 G的原液濃度為2000U/mL，200張紙片內(nèi)即加入ImL青霉素 G原液； (4) 紙片浸潤(rùn)、干燥和保存：用無菌操作法將待測(cè)的抗菌藥物溶液Iml加入攤布于滅菌 平皿中的100片紙片中，置冰箱內(nèi)浸泡1-2小時(shí)，不時(shí)翻動(dòng)，使濾紙片將藥液均勻吸凈，如立 即實(shí)驗(yàn)可不烘干，若保存?zhèn)溆每捎孟铝幸环N方法烘干，干燥的抗菌素紙片可保存6個(gè)月； (5) 按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后， 分別加入0. 2mL供試菌，然后用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾 紙片貼在上述含菌平皿上，每種濃度的濾紙片要間隔一定的距離，并以無菌水和4%己醇的 濾紙片作為對(duì)照； 所述步驟（4)中烘干采用培養(yǎng)皿烘干法或真空抽干法： 所述的培養(yǎng)皿烘干法為：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37°C溫箱內(nèi)保持 2-3h即可干燥，或放在無菌室內(nèi)過夜干燥； 所述的真空抽干法為：將放有抗菌藥物紙片的試管置于干燥器了，用真空抽氣機(jī)抽 干； 所述步驟（4)中的紙片保存為：將制好的各種藥物紙片裝入無菌小瓶中置冰箱內(nèi)保存 備用，收到紙片后應(yīng)立即保存在-20-4°C中，放置1周使用的紙片；紙片容器打開前先置室 溫平衡，裝紙片的容器自冰箱取出后，在室溫IOmin以上打開，紙片貼畢應(yīng)把未用完的放回 冰箱中。
[0011] 本發(fā)明的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為：牛肉膏3. Og、蛋白胨10. 0g、食鹽5. 0g、瓊脂 18-20g和自來水1000 mL用NaOH調(diào)節(jié)PH至7. 0~7. 2, lkg/cm2、121°C下滅菌30分鐘。
[0012] 實(shí)施例1 以4%的酒精和無菌水為對(duì)照，測(cè)定不同濃度藥液和添加功能性中藥材制作的酒樣對(duì) 金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用。抑菌圈的大小見下表1。
[0013] 表中數(shù)據(jù)為抑菌圈直徑的平均值，單位為mm，抑菌圈直徑越大，抑菌效果越好， " "表不無抑菌圈。
[0014] 由上表1可知：不同濃度的中藥提取液對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌都具有一定 的抑制作用，但對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用較強(qiáng)，其抑菌圈大于大腸桿菌的抑菌圈；添加 功能性中藥材制作的酒樣對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用均強(qiáng)于中藥提取液，這 可能與發(fā)酵過程中形成某種有效成分有關(guān)；另外，酒樣對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用強(qiáng)于 大腸桿菌。
[0015] 本發(fā)明濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，通過對(duì)霉菌和細(xì)菌的抑制作用的控 制，從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
[0016] 上述實(shí)施例僅用于解釋說明本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思，而非對(duì)本發(fā)明權(quán)利保護(hù)的限定， 凡利用此構(gòu)思對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動(dòng)，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面， 37°C培養(yǎng)24h，用接種環(huán)從斜面上挑菌到IOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用； (2) 濾紙片的制備及處理：用打孔器打成若干直徑為5. 5mm的圓形濾紙片，經(jīng)120°C干 熱滅菌2h后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；以無菌 水浸過的濾紙做空白； (3) 藥物稀釋：以吸入20yL藥液為標(biāo)準(zhǔn)，若紙片薄，藥物原液需作調(diào)整；根據(jù)紙片內(nèi)各 種抗菌藥物的不同濃度配制藥物原液，其濃度需比紙片濃度大200倍；青霉素G的紙片為 IOU/片，青霉素G的原液濃度為2000U/mL，200張紙片內(nèi)即加入ImL青霉素G原液； (4) 紙片浸潤(rùn)、干燥和保存：用無菌操作法將待測(cè)的抗菌藥物溶液Iml加入攤布于滅菌 平皿中的100片紙片中，置冰箱內(nèi)浸泡1-2小時(shí)，不時(shí)翻動(dòng)，使濾紙片將藥液均勻吸凈，如立 即實(shí)驗(yàn)可不烘干，若保存?zhèn)溆每捎孟铝幸环N方法烘干，干燥的抗菌素紙片可保存6個(gè)月； (5) 按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后， 分別加入0. 2mL供試菌，然后用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾 紙片貼在上述含菌平皿上，每種濃度的濾紙片要間隔一定的距離，并以無菌水和4%己醇的 濾紙片作為對(duì)照； 所述步驟（4)中烘干采用培養(yǎng)皿烘干法或真空抽干法： 所述的培養(yǎng)皿烘干法為：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37°C溫箱內(nèi)保持 2-3h即可干燥，或放在無菌室內(nèi)過夜干燥； 所述的真空抽干法為：將放有抗菌藥物紙片的試管置于干燥器了，用真空抽氣機(jī)抽 干； 所述步驟（4)中的紙片保存為：將制好的各種藥物紙片裝入無菌小瓶中置冰箱內(nèi)保存 備用，收到紙片后應(yīng)立即保存在-20-4°C中，放置1周使用的紙片；紙片容器打開前先置室 溫平衡，裝紙片的容器自冰箱取出后，在室溫IOmin以上打開，紙片貼畢應(yīng)把未用完的放回 冰箱中。2. 如權(quán)利要求1所述濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，其特征在于所述的牛肉膏 蛋白胨培養(yǎng)基為：牛肉膏3.Og、蛋白胨10. 0g、食鹽5. 0g、瓊脂18-20g和自來水1000 mL用 NaOH調(diào)節(jié)pH至 7. 0 ~7. 2，lkg/cm2、121°C下滅菌 30 分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定黃酒抑菌圈的方法，包括以下步驟：（1）菌液的制備：取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面，用接種環(huán)從斜面上挑菌到lOOmL無菌水中制成菌液，用棉塞塞好備用；（2）濾紙片的制備及處理：用打孔器打成圓形濾紙片，經(jīng)干熱滅菌后備用，用鑷子夾取已滅菌的濾紙片浸在不同濃度的藥液和酒樣中備用；（3）按種培養(yǎng)：在無菌條件下，用已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制平板，待冷卻凝固后，加入供試菌，用無菌涂布器涂布均勻，再用無菌鑷子夾取浸提處理過的濾紙片貼在上述含菌平皿上。本發(fā)明通過對(duì)霉菌和細(xì)菌的抑制作用的控制，從而為功能性黃酒的生產(chǎn)和研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【IPC分類】C12Q1/18
【公開號(hào)】CN104911244
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510353952
【發(fā)明人】魯志康, 張?zhí)K敏
【申請(qǐng)人】紹興文理學(xué)院
【公開日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年6月25日