p;1與!1-16&1的耦合常數(shù)為11.4抱，確定該羥基為 α型。同時(shí)，13C-NMR譜中在δ 216. 5出現(xiàn)一個(gè)羰基碳信號(hào)，該羰基碳與Η-5( δ 2.43, m)， H-23 ( δ 3· 59, d，10. 8)，H-24 ( δ 〇· 96, s)遠(yuǎn)程相關(guān)，且 C-4 向低場(chǎng)位移了 9. 8ppm，以上數(shù)據(jù) 說(shuō)明C-3位的羥基被氧化成羰基。綜上，確定該化合物的結(jié)構(gòu)為：2 α，15 α，23-三羥基-3 氧代-12-烯-28-烏蘇酸，為一化合物。其1H-NMR譜、13C-NMR譜信號(hào)歸屬見(jiàn)表1。
[0103] 表1.化合物1的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)
[0104]
[0105]

[0106] 實(shí)施例3--積雪草酸衍生物化合物2的結(jié)構(gòu)鑒定
[0107] 化合物 2 為白色固體，HR-ESI-MS 給出 501. 3243 ([M-H]-)，結(jié)合1H-NMR 和 13C-NMR 推斷確定分子式為C3QH4606。1H-NMR^OOMH z, pyridine-d5)中，顯示該化合物有六組甲基氫 信號(hào) δ 1. 47 (3H, s)，δ 1. 18 (3H, s)，δ 1. 03 (3H, d, 6. 0)，δ 〇· 98 (3H, s)，δ 〇· 92 (3H, d, 6. 6)， δ 0. 82 (3Η，s);低場(chǎng)處有一活潑氫信號(hào)：δ 5.60 (t，3. 9)，推測(cè)可能是雙鍵上的氫。13C-NMR 譜中顯示兩個(gè)不飽和碳原子S 126. 9和δ 140. 8, 一個(gè)羧基碳原子δ 180. 3, 一個(gè)羰基碳信 號(hào)δ 213. 1。綜合以上信息可以推斷該化合物為烏蘇烷型五環(huán)三萜類(lèi)化合物。
[0108] 依據(jù)HSQC、HMBC譜可以對(duì)該化合物的碳?xì)渥鬟M(jìn)一步的歸屬。
[0109] 與積雪草酸比較，1H-NMR 譜中，化合物 2 在 4. 93ppm(lH, dd, J = 6. 6, 11. 4Hz) 出現(xiàn)一個(gè)氫原子信號(hào)；13C-NMR譜中，在68. Oppm處出現(xiàn)一個(gè)連氧碳信號(hào)，說(shuō)明發(fā)生了羥 基化反應(yīng)。在HSQC譜中，4. 93ppm與68. Oppm相關(guān)。在HMBC譜中，可觀察到δ 68. 0與 Η-16 ( δ 2. 46, m)，Η-27 ( δ 1. 47, s)的相關(guān)信號(hào)，同時(shí)，C-14和C-16分別向低場(chǎng)位移6. 5ppm 和11. 5ppm，C-27向高場(chǎng)位移5. 9ppm，以上數(shù)據(jù)均說(shuō)明化合物2是積雪草酸中15位羥基化 的產(chǎn)物，同時(shí)!1-15&1與!1-16&1的耦合常數(shù)為11.4抱，確定該羥基為€ [型。同時(shí)，13(：-匪1?譜 中在δ 213.1出現(xiàn)一個(gè)羰基碳信號(hào)，該羰基碳與δ 2. 58 (H-I)，δ 2. 34 (H-I)，δ 5.08 (H-3) 遠(yuǎn)程相關(guān)，且C-l、C-4分別向低場(chǎng)位移了 6. 4ppm和6. 7ppm，以上數(shù)據(jù)說(shuō)明C-2位的羥基被 氧化成羰基。綜上，確定化合物2的結(jié)構(gòu)為：2_氧代-3 β，15 α，23-三羥基-12-烯-28-烏 蘇酸，為一化合物，其1H-NMR譜、13C-NMR譜信號(hào)歸屬見(jiàn)表2。
[0110] 表2.化合物2的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)
[0111]
[0112]

[0113] 實(shí)施例4一一積雪草酸衍生物化合物1、2對(duì)α -葡萄糖苷酶活性抑制作用
[0114] 采用4-硝基苯-a -D-吡喃葡萄糖苷（PNPG)為底物測(cè)定化合物1和2對(duì)α -葡 萄糖苷酶活性的抑制作用。分別在96孔板中每孔中加入pH 6. 8的磷酸鉀緩沖液112 μ 1， 加入20 μ 1的0. 2U/ml α -葡萄糖苷酶和抑制劑8 μ 1，在37°C恒溫孵育15min后加入20 μ 1 濃度為2. 5mmol/l的PNPG，37°C恒溫反應(yīng)15min再加入0· 2mol/l的Na2CO3水溶液80 μ 1， 于405nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度A值，計(jì)算IC5(I。
[0115] 表3實(shí)驗(yàn)分組及所加試劑
[0116]
[0117] 實(shí)驗(yàn)分為空白組、不加抑制劑的陰性組、阿卡波糖陽(yáng)性組和待測(cè)樣品組。在96孔 板中，依次加入如表3所示的各種試劑，于37°C溫育15min，再加入20 μ 12. 5mmol/l 4-硝 基苯-a -D-吡喃葡萄糖苷（PNPG)，于37°C溫育15min，加入80 μ 10. 2mol/l的Na2CO3溶液， 于405nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度值，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)復(fù)孔。計(jì)算抑制率和IC5Q。
[0118]
[0119] 表4化合物對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的抑制作用的IC5tl值
[0120]
[0121]
[0122] 以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限 制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和 替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和 修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種符合通式（I)的積雪草酸衍生化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或醋，或其任何光 學(xué)異構(gòu)體，或任何互變異構(gòu)體：其中，Rl、尺2、尺3、尺4、Rs、Re、馬、Rs、尺9、Rio可獨(dú)立地相同或不同地為氨，哲基，駿基、C1-6燒 哲基、Ci_e燒駿基、Ci_e烷氧基，未取代或由Ci_e烷基、面素、哲基或Ci_e烷氧基一取代或多取 代的C3_e環(huán)烷基，或未取代或由面素一取代或多取代的CW烷基、C2_6鏈締基或C2_6鏈訣基。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，其中Re為甲哲基，Rg為-C00M，R1。為哲 基，為式（II)化合物：其中， Rl、R2、Rs、R4、Rs、馬、Rs可獨(dú)立地相同或不同地為氨，哲基，駿基、C1_6燒哲基、Cl_e燒駿 基、Ci_e烷氧基，未取代或由Ci_e烷基、面素、哲基或Ci_e烷氧基一取代或多取代的C3_e環(huán)燒 基，或未取代或由面素一取代或多取代的Ci_e烷基、C2_6鏈締基或C2_6鏈訣基； M為氨或堿金屬。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于，其中R1為哲基，R2為駿基。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于，其中R1為駿基，R2為哲基。5. -種如上述權(quán)利要求任意一項(xiàng)所述積雪草酸衍生化合物的制備方法，其特征在于， 通過(guò)微生物對(duì)積雪草酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到的。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，所述微生物為黑曲霉。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，所述制備方法的具體為包括： 步驟1 ;積雪草酸的微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng) 將積雪草酸溶解于有機(jī)溶劑中，配成濃度為10-30g/l的底物溶液，加入到經(jīng)培養(yǎng)的微 生物菌液中進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)； 步驟2;產(chǎn)物的提取分離純化 用有機(jī)萃取劑對(duì)步驟1得到的產(chǎn)物進(jìn)行萃取，然后濃縮、分離純化得到權(quán)利要求1所述 化合物。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1中轉(zhuǎn)化反應(yīng)溫度為 20-30°C，反應(yīng)時(shí)間為至少3天。9. 一種如權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的積雪草酸衍生物或由權(quán)利要求5-7任意一項(xiàng) 所述方法制備的積雪草酸衍生物用于制備抑制a-葡萄糖巧酶的藥物的應(yīng)用。10. -種降糖藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括具有抑制抑制a-葡萄糖 巧酶作用的由權(quán)利要求5-7任意一項(xiàng)所述方法制備的積雪草酸衍生化合物或權(quán)利要求1-4 任意一項(xiàng)所述積雪草酸衍生化合物，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽或醋，或其任何光學(xué)異構(gòu) 體，或任何互變異構(gòu)體，和一種或多種可藥用載體或賦形劑。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種符合通式(I)的積雪草酸衍生化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，或其任何光學(xué)異構(gòu)體，或任何互變異構(gòu)體：(I)，其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10可獨(dú)立地相同或不同地為氫，羥基，羧基、C1-6烷羥基、C1-6烷羧基、C1-6烷氧基，未取代或由C1-6烷基、鹵素、羥基或C1-6烷氧基一取代或多取代的C3-6環(huán)烷基，或未取代或由鹵素一取代或多取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6鏈炔基。本發(fā)明還提供了一種上述積雪草酸衍生物的制備方法和在制備降糖藥物中的應(yīng)用其中，制備方法適合大規(guī)模生產(chǎn)，得到的積雪草酸衍生物在制備降糖藥物的應(yīng)用中，具有突出效果。
【IPC分類(lèi)】A61K31/56, C12R1/685, C12P33/00, C07J63/00, A61P3/10
【公開(kāi)號(hào)】CN104926914
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510253931
【發(fā)明人】馮旭, 儲(chǔ)智勇, 鄒贏鋅, 欒潔, 陳松, 張術(shù), 郭飛飛
【申請(qǐng)人】中國(guó)人民解放軍海軍醫(yī)學(xué)研究所
【公開(kāi)日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年5月18日