一種由車前子制備阿拉伯木聚糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿拉伯木聚糖（arabinoxylan，AX)是一類主要由阿拉伯糖和木糖組成的戊聚糖， 是許多谷物的種皮和細(xì)胞壁組織中含量較高的一種非淀粉類多糖。文獻(xiàn)資料表明阿拉伯 木聚糖具有增強(qiáng)免疫力、抗癌、潤(rùn)腸通便、預(yù)防心血管疾病等多種生理功能。同時(shí)，由于AX 特殊的理化性質(zhì)，如高黏性和氧化凝膠性，某些阿拉伯木聚糖對(duì)于谷物制品、面制品等加工 產(chǎn)品的品質(zhì)有重要影響。除了本身的功能特性，阿拉伯木聚糖還可以通過降解產(chǎn)生低聚糖 (arabinoxylan oligosaccharides, AXOS)，AXOS 具有潛在的益生元活性。
[0003] 車前子是車前科植物車前（/?/? iago asia iica L.)或平車前（/?/? iago 也/TTi^sa Willd.)的干燥成熟種子。車前子被國家食品藥品監(jiān)督管理總局列為可用于保健 食品的物品。車前子多糖是車前子中眾多活性成分其中的一種，已有研宄證明車前子多糖 主要由阿拉伯糖和木糖組成，同時(shí)含有少量鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等其他類型的單糖。因 此，大粒車前子可以作為阿拉伯木聚糖或者制備阿拉伯木聚寡糖的天然來源。然而，目前還 沒有針對(duì)制備車前子阿拉伯木聚糖的文獻(xiàn)或?qū)＠_報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種由車前子制備阿拉伯木聚糖的方法。
[0005] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0006] 本發(fā)明所述的由車前子制備阿拉伯木聚糖的方法，其特征是按以下步驟。
[0007] (1)乙醇浸泡、干燥：將車前子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇中浸泡12 h以上，期間 攪拌數(shù)次，然后過濾收集車前子，置于干燥箱中調(diào)節(jié)溫度40-55°C，烘干。
[0008] (2)溫水提?。很嚽白咏?jīng)除雜后，按車前子：水的重量體積比（kg/L)l :10-1:30的 比例，加入溫水，40~70°C溫水提取，提取時(shí)間1-3 h，提取結(jié)束后過濾，收集車前子。
[0009] (3)多糖制備：將步驟（2)收集的車前子按車前子：水的重量體積（kg/L)比為 1:30的比例，加溫水提取，提取溫度100°C，提取次數(shù)1次，提取時(shí)間3 h ;提取液進(jìn)行離心， 離心轉(zhuǎn)速控制在4800 r/min，離心時(shí)間10 min，收集上清多糖溶液并進(jìn)行濃縮；往濃縮液中 加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇進(jìn)行沉淀（乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%)，靜置12 h以上再離 心收集沉淀，最后通過加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥，得到阿拉伯木聚糖類多糖。
[0010] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：1、兩步法實(shí)現(xiàn)制備車前子來源阿拉伯木聚糖類多糖，制備所得 的多糖，顯色法測(cè)定結(jié)果顯示其總糖含量達(dá)到75%以上，通過離子色譜法測(cè)定顯示阿拉伯 糖和木糖含量之和占所有單糖總量的83%以上，最高可以達(dá)到95% ;2、本方法的生產(chǎn)工藝簡(jiǎn) 單、應(yīng)用前景廣。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 實(shí)施例1。
[0012] 將車前子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇中浸泡16 h，期間攪拌數(shù)次，然后過濾收集 車前子，置于干燥箱中調(diào)節(jié)溫度50°C，烘干。稱取上述經(jīng)除雜后的車前子（20 g)，采用溫水 提取，提取溫度為40°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:20,提取次數(shù)為1次，提取時(shí) 間3 h，提取結(jié)束后過濾、收集車前子。將上述經(jīng)溫水提取后收集的車前子用于后續(xù)提取， 提取溫度為l〇〇°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:30,提取次數(shù)1次，提取時(shí)間3 h ; 提取液進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速控制在4800 r/min，離心時(shí)間10 min，收集上清多糖溶液并進(jìn)行 濃縮。往濃縮液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇進(jìn)行沉淀（乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%)，靜 置12 h再離心收集沉淀，最后通過加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥，得到阿拉伯木聚糖類多 糖1.4 g，記為A。
[0013] 實(shí)施例2。
[0014] 將車前子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇中浸泡12 h，期間攪拌數(shù)次，然后過濾收集 車前子，置于干燥箱中調(diào)節(jié)溫度50°C，烘干。稱取上述經(jīng)除雜后的車前子（20 g)，采用溫水 提取，提取溫度為70°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:20,提取次數(shù)為1次，提取時(shí) 間3 h，提取結(jié)束后過濾、收集車前子。將上述經(jīng)溫水提取后收集的車前子用于后續(xù)提取，提 取溫度為l〇〇°C，車前子與水的重量體積比（kg/ L)為1:30,提取次數(shù)1次，提取時(shí)間3 h ; 提取液進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速控制在4800 r/min，離心時(shí)間10 min，收集上清多糖溶液并進(jìn)行 濃縮。往濃縮液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇進(jìn)行沉淀（乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%)，靜 置14 h再離心收集沉淀，最后通過加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥，得到阿拉伯木聚糖類多 糖I. 3 g，記為B。
[0015] 實(shí)施例3。
[0016] 將車前子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇中浸泡14 h，期間攪拌數(shù)次，然后過濾收集 車前子，置于干燥箱中調(diào)節(jié)溫度55°C，烘干。稱取上述經(jīng)除雜后的車前子（20 g)，采用溫水 提取，提取溫度為50°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:10,提取次數(shù)為1次，提取時(shí) 間3 h，提取結(jié)束后過濾、收集車前子。將上述經(jīng)溫水提取后收集的車前子用于后續(xù)提取， 提取溫度為l〇〇°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:30,提取次數(shù)1次，提取時(shí)間3 h ; 提取液進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速控制在4800 r/min，離心時(shí)間10 min，收集上清多糖溶液并進(jìn)行 濃縮。往濃縮液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇進(jìn)行沉淀（乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%)，靜 置16 h再離心收集沉淀，最后通過加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥，得到阿拉伯木聚糖類多 糖I. 2 g，記為C。
[0017] 實(shí)施例4。
[0018] 將車前子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇中浸泡15 h，期間攪拌數(shù)次，然后過濾收集 車前子，置于干燥箱中調(diào)節(jié)溫度40°C，烘干。稱取上述經(jīng)除雜后的車前子（20 g)，采用溫水 提取，提取溫度為50°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:30,提取次數(shù)為1次，提取時(shí) 間3 h，提取結(jié)束后過濾、收集車前子。將上述經(jīng)溫水提取后收集的車前子用于后續(xù)提取， 提取溫度為l〇〇°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:30,提取次數(shù)1次，提取時(shí)間3 h ; 提取液進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速控制在4800 r/min，離心時(shí)間10 min，收集上清多糖溶液并進(jìn)行 濃縮。往濃縮液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇進(jìn)行沉淀（乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%)，靜 置13 h再離心收集沉淀，最后通過加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥，得到阿拉伯木聚糖類多 糖I. 9 g，記為D。
[0019] 實(shí)施例5。
[0020] 將車前子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇中浸泡17 h，期間攪拌數(shù)次，然后過濾收集 車前子，置于干燥箱中調(diào)節(jié)溫度50°C，烘干。稱取上述經(jīng)除雜后的車前子（20 g)，采用溫水 提取，提取溫度為50°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:30,提取次數(shù)為1次，提取時(shí) 間I h，提取結(jié)束后過濾、收集車前子。將上述經(jīng)溫水提取后收集的車前子用于后續(xù)提取， 提取溫度為l〇〇°C，車前子與水的重量體積比（kg/L)為1:30,提取次數(shù)1次，提取時(shí)間3 h ; 提取液進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速控制在4800 r/min，離心時(shí)間10 min，收集上清多糖溶液并進(jìn)行 濃縮。往濃縮液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇進(jìn)行沉淀（乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%)，靜 置12 h再離心收集沉淀，最后通過加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥，得到阿拉伯木聚糖類多 糖I. 8 g，記為E。
[0021] 下面結(jié)合上述具體實(shí)施例中所得樣品，對(duì)本發(fā)明所述的車前子阿拉伯木聚糖的基 本理化指標(biāo)作進(jìn)一步說明。
[0022] 1、材料與方法。
[0023] 單糖標(biāo)準(zhǔn)品：鼠李糖（Rha)、阿拉伯糖（Ara)、葡萄糖（Glc)、木糖（Xyl)、半乳糖 (Gal)、甘露糖（Man)、巖藻糖（Fuc)、葡萄糖醛酸（GlcA)，半乳糖醛酸（GalA);氫氧化鈉、醋 酸鈉、苯酷、硫酸、味挫、無水乙醇等。以上試劑至少為國產(chǎn)分析純。
[0024] 2、主要儀器與設(shè)備。
[0025] ICS-5000離子色譜儀（美國Dionex公司）、TU-1900紫外可見分光光度計(jì)（北京普 析通用儀器有限責(zé)任公司）、Milli-Q超純水儀(美國Millipore公司）等。
[0026] 3、實(shí)驗(yàn)方法。
[0027] 3. 1單糖組成分析。
[0028] 采用儀器ICS-5000離子色譜儀分析單糖組成。準(zhǔn)確稱取5.0 mg樣品，加入0.5 mL超純水使其溶解。以0. 5 mL12 M &504溶液在冰浴條件下攪拌30 min，再加入2 mL超 純水，將樣品置于l〇〇°C油浴2 h。水解液稀釋，過0.22 μπι濾膜后用離子色譜儀分析。
[0029] 色譜柱：CarboPac ΡΑ20 分析柱（3X150 mm)，CarboPac ΡΑ20 分析柱（3X30 mm); 淋洗液：250 mmol/LNaOH溶液、100 mol/L醋酸鈉溶液；流速：0. 5 mL/min ;進(jìn)樣量：10. 0 UL ;柱溫：35°C ;再生液：200 mmol/LNaOH 溶液。
[0030] 3.2中性糖含量測(cè)定。
[0031] 以木糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚-硫酸法測(cè)定樣品中中性糖的含量。樣品平行測(cè)定三 次，取平均值。
[0032] 3. 3糖醛酸含量測(cè)定。
[0033] 以葡萄糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用硫酸-咔唑法測(cè)定樣品中糖醛酸的含量。樣品平行 測(cè)定三次，取平均值。
[0034] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0035] 由表1可知，A、B、C、D和E的總糖含量（中性糖含量和糖醛酸含量之和）至少在 75. 1%，而Ara和Xyl兩者之和占所測(cè)全部單糖質(zhì)量百分比達(dá)到83%以上。
[0036] 表1車前子多糖糖含量、糖醛酸含量和單糖組成結(jié)果
n. d.，not determined，未檢測(cè)到；trace，少量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種由車前子制備阿拉伯木聚糖的方法，其特征是按以下步驟： (1) 將車前子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇中浸泡12h以上，期間攪拌數(shù)次，然后過濾收 集車前子，置于干燥箱中調(diào)節(jié)溫度40-55°C，烘干； (2) 車前子經(jīng)除雜后，按車前子：水的重量體積比（kg/L)l: 10-1:30的比例，加入溫水， 40~70°C溫水提取，提取時(shí)間1-3h，提取結(jié)束后過濾，收集車前子； (3) 多糖制備：將步驟（2)收集的車前子按車前子：水的重量體積（kg/L)比為1:30的 比例，加溫水提取，提取溫度l〇〇°C，提取次數(shù)1次，提取時(shí)間3h;提取液進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn) 速控制在4800r/min，離心時(shí)間10min，收集上清多糖溶液并進(jìn)行濃縮；往濃縮液中加入質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇進(jìn)行沉淀，乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%，靜置12h以上再離心收集沉 淀，最后通過加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥，得到阿拉伯木聚糖類多糖。
【專利摘要】一種由車前子制備阿拉伯木聚糖的方法，按以下步驟：（1）將車前子置于乙醇中浸泡，然后過濾收集車前子，烘干；（2）按車前子:水的重量體積比（kg/L）1:10-1:30的比例，40~70oC溫水提取1-3 h，過濾、收集車前子；（3）多糖制備：將步驟（2）收集的車前子按車前子:水的重量體積（kg/L）比為1:30的比例，溫水提取，溫度100oC，次數(shù)1次，提取時(shí)間3 h；提取液離心，收集上清多糖溶液并進(jìn)行濃縮；往濃縮液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇沉淀，乙醇的終濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%，靜置、離心收集沉淀；加水復(fù)溶、旋轉(zhuǎn)濃縮、冷凍干燥。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，所得多糖總糖含量達(dá)到75%以上，阿拉伯糖和木糖含量之和占所有單糖總量的83%以上，最高可以達(dá)到95%。
【IPC分類】C08B37/00
【公開號(hào)】CN104926952
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510314617
【發(fā)明人】殷軍藝, 施曉丹, 汪星逸, 謝明勇, 聶少平
【申請(qǐng)人】南昌大學(xué)
【公開日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月10日