食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 世界衛(wèi)生組織將食源性疾病分為5種類型：食物中毒、細(xì)菌性腸道感染癥、病毒性 腸道感染癥、食源性寄生蟲病、人畜共患感染癥。食源性病原微生物與這5種類型的食源性 疾病均有關(guān)聯(lián)。按照其生物學(xué)特性的不同，引起食物中毒的微生物通常分為兩大類：第一類 為感染型，如沙門氏菌、空腸彎曲菌、致病性大腸桿菌；另一類為毒素型，如蠟樣芽孢桿菌、 金黃色葡萄球菌、肉毒梭菌等。感染型微生物可以在人類腸道中增殖，毒素型微生物則是產(chǎn) 生芽孢或毒素，即使通過加熱殺菌也不能消除其危害。
[0003] 目前食品微生物衛(wèi)生檢測涉及的致病菌主要包括沙門氏菌、志賀氏菌、致瀉大腸 埃希式菌、副溶血性弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、空腸彎曲菌、金黃色葡萄球菌、溶血鏈球 菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽孢桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等。食品中這些致病 性微生物的檢測，多數(shù)主要還是依靠傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法來確定，這些方法最大的問題是耗時(shí) 長，不能滿足快速檢測的要求，無法做出快速判斷和選擇。
[0004] 蠟樣芽孢桿菌屬于人獸共患病原菌之一，目前蠟樣芽孢桿菌的檢測方法主要是平 板計(jì)數(shù)法，中國使用的國標(biāo)法檢測主要分為兩步，第一步是菌落的平板計(jì)數(shù)，僅培養(yǎng)就需要 12~20h，第二步是可疑菌落的證實(shí)試驗(yàn)，包括培養(yǎng)、形態(tài)觀察、染色鏡檢、生化試驗(yàn)、與類 似菌的鑒別等步驟，按照國標(biāo)法完成蠟樣芽孢桿菌整個(gè)檢測程序至少需要3~5d，檢測時(shí) 間非常長，方法也比較復(fù)雜。很難滿足食品安全快速檢測的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方 法，該方法檢測時(shí)間在5h以內(nèi)，檢出限為50~106cfu/mL。
[0006] 食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，包括以下步驟：
[0007] 步驟1，取食品樣品，加入磷酸鹽緩沖液，70°C水浴加熱20min，冷卻后離心，沉淀 加至萌發(fā)液中，得芽孢懸液；
[0008] 步驟2,取步驟1所得芽孢懸液，加入發(fā)酵液，在37°C、150rpm條件下培養(yǎng)3h ;
[0009] 步驟3,將步驟2所得菌液用蛋白胨溶液稀釋，稀釋液過濾濃縮，濃縮液經(jīng)X-Gluc 染色后用微生物快速檢測儀中進(jìn)行檢測。
[0010] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1中食品樣品的用量為1〇~20g，磷酸鹽緩沖液 的用量為50~100mL。
[0011] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1所用的磷酸鹽緩沖液pH為6. 8。
[0012] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1中萌發(fā)液由以下組分組成：lwt% L-丙氨酸， 2. 5wt%氯化鎂，2wt%硫酸鋅，I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0013] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟2中芽孢懸液和發(fā)酵液的體積比為I :100~ 150〇
[0014] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟2中發(fā)酵液的配方為：葡萄糖0.5g，蛋白胨lg， 酵母粉〇. 5g，NaCl 0. 5g，KH2PO4 0. lg，微量元素溶液lmL，蒸餾水IOOmL，其中，微量元素： CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L，MgSO4 · 7H20 0· 5g/L。
[0015] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0016] 本發(fā)明提供的檢測方法與國標(biāo)檢測方法之間無顯著差異，檢測時(shí)間在5h以內(nèi)，檢 出限為50~106cfu/mL。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 實(shí)施例1
[0018] 食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，包括以下步驟：
[0019] 步驟1，取食品樣品，加入磷酸鹽緩沖液，70°C水浴加熱20min，冷卻后離心，沉淀 加至萌發(fā)液中，得芽孢懸液；
[0020] 步驟2,取步驟1所得芽孢懸液，加入發(fā)酵液，在37°C、150rpm條件下培養(yǎng)3h ;
[0021] 步驟3,將步驟2所得菌液用蛋白胨溶液稀釋，稀釋液過濾濃縮，濃縮液經(jīng)X-Gluc 染色后用微生物快速檢測儀中進(jìn)行檢測。
[0022] 步驟1中食品樣品的用量為10g，磷酸鹽緩沖液的用量為50mL。
[0023] 步驟1所用的磷酸鹽緩沖液pH為6. 8。
[0024] 步驟1中萌發(fā)液由以下組分組成：lwt%L-丙氨酸，2. 5wt%氯化鎂，2wt%硫酸鋅， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0025] 步驟2中芽孢懸液和發(fā)酵液的體積比為1 :100。
[0026] 步驟2中發(fā)酵液的配方為：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl 0. 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸餾水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0027] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0028] 實(shí)施例2
[0029] 食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，包括以下步驟：
[0030] 步驟1，取食品樣品，加入磷酸鹽緩沖液，70°C水浴加熱20min，冷卻后離心，沉淀 加至萌發(fā)液中，得芽孢懸液；
[0031] 步驟2,取步驟1所得芽孢懸液，加入發(fā)酵液，在37°C、150rpm條件下培養(yǎng)3h ;
[0032] 步驟3,將步驟2所得菌液用蛋白胨溶液稀釋，稀釋液過濾濃縮，濃縮液經(jīng)X-Gluc 染色后用微生物快速檢測儀中進(jìn)行檢測。
[0033] 步驟1中食品樣品的用量為14g，磷酸鹽緩沖液的用量為60mL。
[0034] 步驟1所用的磷酸鹽緩沖液pH為6. 8。
[0035] 步驟1中萌發(fā)液由以下組分組成：Iwt % L-丙氨酸，2. 5wt %氯化鎂，2wt %硫酸鋅， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0036] 步驟2中芽孢懸液和發(fā)酵液的體積比為1 :115。
[0037] 步驟2中發(fā)酵液的配方為：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl 0. 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸餾水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0038] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0039] 實(shí)施例3
[0040] 食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，包括以下步驟：
[0041] 步驟1，取食品樣品，加入磷酸鹽緩沖液，70°C水浴加熱20min，冷卻后離心，沉淀 加至萌發(fā)液中，得芽孢懸液；
[0042] 步驟2,取步驟1所得芽孢懸液，加入發(fā)酵液，在37°C、150rpm條件下培養(yǎng)3h ;
[0043] 步驟3,將步驟2所得菌液用蛋白胨溶液稀釋，稀釋液過濾濃縮，濃縮液經(jīng)X-Gluc 染色后用微生物快速檢測儀中進(jìn)行檢測。
[0044] 步驟1中食品樣品的用量為18g，磷酸鹽緩沖液的用量為70mL。
[0045] 步驟1所用的磷酸鹽緩沖液pH為6. 8。
[0046] 步驟1中萌發(fā)液由以下組分組成：Iwt % L-丙氨酸，2. 5wt %氯化鎂，2wt %硫酸鋅， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0047] 步驟2中芽孢懸液和發(fā)酵液的體積比為1 :120。
[0048] 步驟2中發(fā)酵液的配方為：葡萄糖0· 5g，蛋白胨lg，酵母粉0· 5g，NaCl 0· 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸餾水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0049] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0050] 實(shí)施例4
[0051] 食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，包括以下步驟：
[0052] 步驟1，取食品樣品，加入磷酸鹽緩沖液，70°C水浴加熱20min，冷卻后離心，沉淀 加至萌發(fā)液中，得芽孢懸液；
[0053] 步驟2,取步驟1所得芽孢懸液，加入發(fā)酵液，在37°C、150rpm條件下培養(yǎng)3h ;
[0054] 步驟3,將步驟2所得菌液用蛋白胨溶液稀釋，稀釋液過濾濃縮，濃縮液經(jīng)X-Gluc 染色后用微生物快速檢測儀中進(jìn)行檢測。
[0055] 步驟1中食品樣品的用量為20g，磷酸鹽緩沖液的用量為100mL。
[0056] 步驟1所用的磷酸鹽緩沖液pH為6. 8。
[0057] 步驟1中萌發(fā)液由以下組分組成丙氨酸，2. 5wt%氯化鎂，2wt%硫酸鋅， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0058] 步驟2中芽孢懸液和發(fā)酵液的體積比為1 :150。
[0059] 步驟2中發(fā)酵液的配方為：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl 0. 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸餾水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0060] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0061] 將實(shí)施例1至4所得結(jié)果與國標(biāo)GB4789. 14所得結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果如下：
[0062]
[0063] 由上表可知，本發(fā)明提供的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法與國標(biāo)GB4789. 14 的檢測方法不存在顯著差異。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟： 步驟1，取食品樣品，加入磷酸鹽緩沖液，70°C水浴加熱20min，冷卻后離心，沉淀加至 萌發(fā)液中，得芽孢懸液； 步驟2,取步驟1所得芽孢懸液，加入發(fā)酵液，37°C、150rpm培養(yǎng)3h; 步驟3,將步驟2所得菌液用蛋白胨溶液稀釋，稀釋液過濾濃縮，濃縮液經(jīng)X-Gluc染色 后用微生物快速檢測儀中進(jìn)行檢測。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于：步驟1中食 品樣品的用量為10~20g，磷酸鹽緩沖液的用量為50~100mL。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于：步驟1所用 的磷酸鹽緩沖液pH為6. 8。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于：步驟1中萌 發(fā)液由以下組分組成：lwt%L-丙氨酸，2. 5wt%氯化鎂，2wt%硫酸鋅，I. 5wt%甘露醇，I. 4wt% 葡萄糖苷。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于：步驟2中芽 孢懸液和發(fā)酵液的體積比為1 :100~150。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于：步驟2中發(fā) 酵液的配方為：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl0. 5g，KH2PO4 0.lg，微量元素溶 液lmL，蒸餾水 100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnS04.4H20 0.1g/L，F(xiàn)eS04.7H20 0.6g/L， ZnS04.7H20 0? 5g/L，CoCl2 ? 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L，MgSO4 ? 7H20 0? 5g/L。7. 根據(jù)權(quán)利要求I所述的食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于：步驟3中過 濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45Mm。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，先取食品樣品，加入磷酸鹽緩沖液，70℃水浴加熱20min，冷卻后離心，沉淀加至萌發(fā)液中，得芽孢懸液；再取所得芽孢懸液，加入發(fā)酵液，在37℃、150rpm條件下培養(yǎng)3h；然后將所得菌液用蛋白胨溶液稀釋，稀釋液過濾濃縮，濃縮液經(jīng)X-Gluc染色后用微生物快速檢測儀中進(jìn)行檢測。本發(fā)明提供的檢測方法與國標(biāo)檢測方法之間無顯著差異，檢測時(shí)間在5h以內(nèi)，檢出限為50～106cfu/mL。
【IPC分類】C12R1/085, C12Q1/04
【公開號(hào)】CN104928345
【申請?zhí)枴緾N201510368782
【發(fā)明人】熊開勝, 張海防, 謝建庭
【申請人】蘇州東辰林達(dá)檢測技術(shù)有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年6月29日