肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和報(bào)道的透明，中國(guó)國(guó)內(nèi)曝光的食品安全問(wèn)題呈現(xiàn)明顯上升趨 勢(shì)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)2002~2011年食物中毒的事件一共有3373起，中毒人數(shù)11. 47萬(wàn)人，死 亡人數(shù)2088人。引發(fā)食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，中毒起數(shù)和人數(shù)均最多， 分別占總起數(shù)的35. 72%和總?cè)藬?shù)的57. 04%。有效監(jiān)控食品生產(chǎn)和流通領(lǐng)域的微生物污 染，已經(jīng)成為人們所面臨的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題。
[0003] 目前食品微生物衛(wèi)生檢測(cè)涉及的致病菌主要包括沙門氏菌、志賀氏菌、致瀉大腸 埃希式菌、副溶血性弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、空腸彎曲菌、金黃色葡萄球菌、溶血鏈球 菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽孢桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等。食品中這些致病 性微生物的檢測(cè)，多數(shù)主要還是依靠傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法來(lái)確定，這些方法最大的問(wèn)題是耗時(shí) 長(zhǎng)，不能滿足快速檢測(cè)的要求，無(wú)法做出快速判斷和選擇。如沙門氏菌的檢測(cè)，傳統(tǒng)培養(yǎng)方 法沙門氏菌的檢測(cè)時(shí)間是4~7d，很難滿足食品安全快速檢測(cè)的要求。
[0004] 沙門氏菌（Salmonella)屬于腸桿菌科，是一群寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的無(wú)芽孢 革蘭氏陰性桿菌。根據(jù)生化反應(yīng)、DNA同源性等，沙門菌屬分為腸道沙門菌（S.enterica) 和邦戈沙門菌（S.bongori)兩個(gè)種及7個(gè)亞種。腸道沙門菌又分為6個(gè)亞種，即腸道亞 種（subsp. enterica)、薩拉姆亞種（subsp. Salamae)、亞利桑那亞種（subsp. enterica)雙 亞利桑那亞種（subsp.diarigonae)、豪頓亞種（subsp.houtenae)和英迪加亞種（subsp. indica)。從人類和溫血?jiǎng)游镏蟹蛛x的沙門氏菌屬于腸道沙門氏菌腸道亞種（Salmonella enterica subspecies enterica)。食用污染細(xì)菌的蛋類、肉類、奶制品是引起人類沙門氏 菌感染的重要原因。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法， 該方法與國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行比較不存在顯著性差異，檢測(cè)時(shí)間短，檢出限為10~107cfu/mL。
[0006] 肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0007] 步驟1，取肉制品，放入含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液中，攪拌后均質(zhì)；
[0008] 步驟2,將步驟1均質(zhì)后的樣品液過(guò)濾，濾液濃縮；
[0009] 步驟3,取步驟2所得濾液，依次加入75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液， 37 °C反應(yīng)30min后，送入微生物快速檢測(cè)儀中檢測(cè)。
[0010] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1中肉制品用量為15~30g，含lwt%牛血清蛋 白的PBS-T溶液用量為30~50mL。
[0011] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1中所述PBS-T溶液為含0. 05v/v%吐溫-20的 PBS溶液，PBS溶液pH為6. 8。
[0012] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1中均質(zhì)條件為8000~lOOOOiVmin,均質(zhì)時(shí)間 3 ~5min〇
[0013] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟2中過(guò)濾采用濾紙過(guò)濾。
[0014] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟2中濃縮采用0. 45 μ m的濾膜過(guò)濾濃縮。
[0015] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟3中增長(zhǎng)液的配置方法為：0.05mL濃度為 0. 002M的氯金酸溶液和IOmL濃度為0. 04M的CATB十六烷基三甲基溴化銨混勻，加熱后冷 卻，加入濃度為0. 04M的抗壞血酸。
[0016] 作為上述發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟3中濾液、75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色 液的體積比為1~5 :4~12 :0· 5~2. 4 :0· 05~0· 1。
[0017] 本發(fā)明的檢測(cè)方法與國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行比較不存在顯著性差異，其相關(guān)性高，檢測(cè)結(jié) 果準(zhǔn)確，檢測(cè)時(shí)間短（2h)，檢出限為10~107cfu/mL，可以應(yīng)用于實(shí)際檢測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 實(shí)施例1
[0019] 肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0020] 步驟1，取肉制品，放入含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液中，攪拌后均質(zhì)；
[0021] 步驟2,將步驟1均質(zhì)后的樣品液過(guò)濾，濾液濃縮；
[0022] 步驟3,取步驟2所得濾液，依次加入75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液， 37 °C反應(yīng)30min后，送入微生物快速檢測(cè)儀中檢測(cè)。
[0023] 步驟1中肉制品用量為15g，含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液用量為30mL。
[0024] 步驟1中所述PBS-T溶液為含0. 05v/v %吐溫-20的PBS溶液，PBS溶液pH為6. 8。
[0025] 步驟1中均質(zhì)條件為8000r/min，均質(zhì)時(shí)間5min。
[0026] 步驟2中過(guò)濾采用濾紙過(guò)濾。
[0027] 步驟2中濃縮采用0. 45 μ m的濾膜過(guò)濾濃縮。
[0028] 步驟3中增長(zhǎng)液的配置方法為：0. 05mL濃度為0. 002M的氯金酸溶液和IOmL濃度 為0. 04M的CATB十六烷基三甲基溴化銨混勻，加熱后冷卻，加入濃度為0. 04M的抗壞血酸。
[0029] 步驟3中濾液、75 %乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液的體積比為1 :4 :0. 5 : 0. 05〇
[0030] 實(shí)施例2
[0031] 肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0032] 步驟1，取肉制品，放入含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液中，攪拌后均質(zhì)；
[0033] 步驟2,將步驟1均質(zhì)后的樣品液過(guò)濾，濾液濃縮；
[0034] 步驟3,取步驟2所得濾液，依次加入75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液， 37 °C反應(yīng)30min后，送入微生物快速檢測(cè)儀中檢測(cè)。
[0035] 步驟1中肉制品用量為20g，含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液用量為36mL。
[0036] 步驟1中所述PBS-T溶液為含0. 05v/v %吐溫-20的PBS溶液，PBS溶液pH為6. 8。
[0037] 步驟1中均質(zhì)條件為9000r/min，均質(zhì)時(shí)間4min。
[0038] 步驟2中過(guò)濾采用濾紙過(guò)濾。
[0039] 步驟2中濃縮采用0. 45 μ m的濾膜過(guò)濾濃縮。
[0040] 步驟3中增長(zhǎng)液的配置方法為：0. 05mL濃度為0. 002M的氯金酸溶液和IOmL濃度 為0. 04M的CATB十六烷基三甲基溴化銨混勻，加熱后冷卻，加入濃度為0. 04M的抗壞血酸。
[0041] 步驟3中濾液、75 %乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液的體積比為2 :7 :1. 2 : 0. 06〇
[0042] 實(shí)施例3
[0043] 肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0044] 步驟1，取肉制品，放入含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液中，攪拌后均質(zhì)；
[0045] 步驟2,將步驟1均質(zhì)后的樣品液過(guò)濾，濾液濃縮；
[0046] 步驟3,取步驟2所得濾液，依次加入75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液， 37 °C反應(yīng)30min后，送入微生物快速檢測(cè)儀中檢測(cè)。
[0047] 步驟1中肉制品用量為22g，含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液用量為40mL。
[0048] 步驟1中所述PBS-T溶液為含0· 05v/v %吐溫-20的PBS溶液，PBS溶液pH為6. 8。
[0049] 步驟1中均質(zhì)條件為8000r/min，均質(zhì)時(shí)間5min。
[0050] 步驟2中過(guò)濾采用濾紙過(guò)濾。
[0051 ] 步驟2中濃縮采用0. 45 μ m的濾膜過(guò)濾濃縮。
[0052] 步驟3中增長(zhǎng)液的配置方法為：0. 05mL濃度為0. 002M的氯金酸溶液和IOmL濃度 為0. 04M的CATB十六烷基三甲基溴化銨混勻，加熱后冷卻，加入濃度為0. 04M的抗壞血酸。
[0053] 步驟3中濾液、75 %乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液的體積比為4 :11 :1. 9 : 0. 07〇
[0054] 實(shí)施例4
[0055] 肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0056] 步驟1，取肉制品，放入含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液中，攪拌后均質(zhì)；
[0057] 步驟2,將步驟1均質(zhì)后的樣品液過(guò)濾，濾液濃縮；
[0058] 步驟3,取步驟2所得濾液，依次加入75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液， 37 °C反應(yīng)30min后，送入微生物快速檢測(cè)儀中檢測(cè)。
[0059] 步驟1中肉制品用量為30g，含Iwt %牛血清蛋白的PBS-T溶液用量為50mL。
[0060] 步驟1中所述PBS-T溶液為含0. 05v/v %吐溫-20的PBS溶液，PBS溶液pH為6. 8。
[0061] 步驟1中均質(zhì)條件為10000r/min，均質(zhì)時(shí)間3min。
[0062] 步驟2中過(guò)濾采用濾紙過(guò)濾。
[0063] 步驟2中濃縮采用0. 45 μ m的濾膜過(guò)濾濃縮。
[0064] 步驟3中增長(zhǎng)液的配置方法為：0. 05mL濃度為0. 002M的氯金酸溶液和IOmL濃度 為0. 04M的CATB十六烷基三甲基溴化銨混勻，加熱后冷卻，加入濃度為0. 04M的抗壞血酸。
[0065] 步驟3中濾液、75 %乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液的體積比為5 :12 :2. 4 : 0· 1〇
[0066] 將實(shí)施例1至4所得結(jié)果與GB 4789. 4 - 2010沙門氏菌的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié) 果如下：
[0067]

[0068] 由上表可知，本發(fā)明提供的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法與國(guó)標(biāo)GB 4789. 4-2010 的檢測(cè)方法不存在顯著差異。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：包括以下步驟： 步驟1，取肉制品，放入含lwt%牛血清蛋白的PBS-T溶液中，攪拌后均質(zhì)； 步驟2,將步驟1均質(zhì)后的樣品液過(guò)濾，濾液濃縮； 步驟3,取步驟2所得濾液，依次加入75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液，37°C反應(yīng) 30min后，送入微生物快速檢測(cè)儀中檢測(cè)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟1中肉制 品用量為15~30g，含lwt%牛血清蛋白的PBS-T溶液用量為30~50mL。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟1中所述 PBS-T溶液為含0? 05v/v%吐溫-20的PBS溶液，PBS溶液pH為6. 8。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟1中均質(zhì) 條件為8000~10000r/min，均質(zhì)時(shí)間3~5min。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟2中過(guò)濾 采用濾紙過(guò)濾。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟2中濃縮 采用0. 45ym的濾膜過(guò)濾濃縮。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟3中增長(zhǎng) 液的配置方法為：〇. 〇5mL濃度為0. 002M的氯金酸溶液和IOmL濃度為0. 04M的CATB十六 烷基三甲基溴化銨混勻，加熱后冷卻，加入濃度為0. 04M的抗壞血酸。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟3中濾液、 75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液的體積比為1~5 :4~12 :0. 5~2. 4 :0. 05~0. 1。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肉制品中沙門氏菌的檢測(cè)方法，先取肉制品，放入含1wt%牛血清蛋白的PBS-T溶液中，攪拌后均質(zhì)；再將均質(zhì)后的樣品液過(guò)濾，濾液濃縮；然后取所得濾液，依次加入75%乙醇水溶液、增長(zhǎng)液和BCIP染色液，37℃反應(yīng)30min后，最后送入微生物快速檢測(cè)儀中檢測(cè)。本發(fā)明的檢測(cè)方法與國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行比較不存在顯著性差異，其相關(guān)性高，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，檢測(cè)時(shí)間短（2h），檢出限為10～107cfu/mL，可以應(yīng)用于實(shí)際檢測(cè)。
【IPC分類】C12Q1/10, C12R1/42
【公開號(hào)】CN104928348
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510368383
【發(fā)明人】熊開勝, 張海防, 謝建庭
【申請(qǐng)人】蘇州東辰林達(dá)檢測(cè)技術(shù)有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月29日