用于治療癌癥的抗adam28抗體的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗人ADAM28抗體及其藥物用途。
【背景技術(shù)】
[0002] ADAM蛋白（解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶）是參與跨膜蛋白的胞外結(jié)構(gòu)域脫落、細(xì)胞粘 附和浸潤的多功能蛋白（非專利文獻(xiàn)1，2)。人基因組含有25種ADAM，其包括四種假基因 和21種ADAM，所述21種ADAM由表現(xiàn)出蛋白水解活性的13種蛋白水解性ADAM和八種非 蛋白水解性ADAM構(gòu)成（非專利文獻(xiàn)1，3)。蛋白水解性ADAM共享基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP) 的金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域，且典型的蛋白水解性ADAM蛋白包含肽原、金屬蛋白酶、解聯(lián)蛋白樣 (disintegrin-like)、富含半胱氨酸、表皮生長因子樣、跨膜和細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域（非專利文 獻(xiàn) 3-9 )。許多蛋白水解性 ADAM，包括 ADAM8、ADAM9、ADAM12、ADAM15、ADAM17、ADAM19 和 ADAM28,在人癌癥中過表達(dá)，且與腫瘤生長和進(jìn)展相關(guān)（非專利文獻(xiàn)5，9)。本發(fā)明人的先 前研宄已經(jīng)表明，ADAM28 (也稱為ADAM金屬肽酶結(jié)構(gòu)域28)(其具有兩種替代亞型，包括原 型膜錨定形式（ADAM28m)和短分泌形式（ADAM28)(非專利文獻(xiàn)5，10，11))在人非小細(xì)胞 肺癌和乳腺癌中大量表達(dá)（非專利文獻(xiàn)12，13)。通過原位雜交和免疫組織化學(xué)，本發(fā)明人 已經(jīng)表明，ADAM28主要在癌組織中含有的癌細(xì)胞中表達(dá)，并且ADAM28的mRNA表達(dá)水平與乳 腺癌的細(xì)胞增殖（非專利文獻(xiàn)13)且與非小細(xì)胞肺癌中的癌細(xì)胞增殖和浸潤（非專利文獻(xiàn) 12)相關(guān)。在平行研宄中，本發(fā)明人顯示，非小細(xì)胞肺癌患者中的血清ADAM27水平基本上隨 著腫瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和癌癥復(fù)發(fā)的進(jìn)展而增加（非專利文獻(xiàn)14)。這些數(shù)據(jù)暗示，ADAM28參 與特別是人癌癥中的細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。本發(fā)明人已經(jīng)表明，ADAM28通過選擇性消化IGF-I/ IGFBP-3復(fù)合物的IGF-結(jié)合蛋白-3 (IGFBP-3)經(jīng)由胰島素樣生長因子-I (IGF-I)的增強(qiáng) 的生物利用度而有助于癌細(xì)胞增殖（非專利文獻(xiàn)13)，并且通過消化乳腺癌中的結(jié)締組織 生長因子有助于血管生成（非專利文獻(xiàn)15)。
[0003] 噬菌體展示方法是已經(jīng)通過在功能肽或蛋白和編碼其的DNA之間以噬菌體顆粒 的形式形成--對應(yīng)而實(shí)現(xiàn)體外高速選擇的展示技術(shù)之一。這種噬菌體展示方法已經(jīng)被 應(yīng)用于抗體選擇，并且通過該方法獲得的許多抗體已經(jīng)被開發(fā)作為藥物（非專利文獻(xiàn)16)。 此外，也已經(jīng)建立了通過組合人人工抗體文庫和噬菌體展示方法而獲得特異性抗體的方 法，而此類方法已經(jīng)由多個(gè)公司實(shí)施，如MorphoSys的HuCAL (人組合抗體文庫（Human Combinatorial Antibody Library))所證明。
[0004] [文獻(xiàn)列表]
[非專利文獻(xiàn)] 非專利文獻(xiàn) I: Mol Aspects Med 2008; 29 (5): 258-289 非專利文獻(xiàn) 2: Semin Cell Dev Biol. 2009; 20 (2): 138-145 非專利文獻(xiàn) 3: Pathol Int. 2010; 60 (7): 477-496 非專利文獻(xiàn) 4: Genes Dev. 2003; 17 (1): 7-30 非專利文獻(xiàn) 5: Cancer Sci. 2007; 98 (5): 621-628 非專利文獻(xiàn) 6: Nat Rev Mol Cell Biol. 2005; 6 (1): 32-43 非專利文獻(xiàn) 7: Kelley's Textbook of Rheumatology. 8th ed. Philadelphia, PA: Elsevier Saunders; 2009: 115-134 非專利文獻(xiàn) 8: Curr Opin Cell Biol. 2003; 15 (5): 598-606 非專利文獻(xiàn) 9: Nat Rev Cancer. 2008; 8 (12): 929-941 非專利文獻(xiàn) 10: JBiol Chem. 1999; 274 (41): 29251-29259 非專利文獻(xiàn) 11: CurrPharmDes. 2009; 15 (20): 2349-2358 非專利文獻(xiàn) 12: Int J Cancer. 2006; 118 (2): 263-273 非專利文獻(xiàn) 13: Cancer Res. 2006; 66 (20): 9913-9920 非專利文獻(xiàn) 14: Int J Cancer. 2010; 127 (8): 1844-1856 非專利文獻(xiàn) 15: Biochem Biophys Res Commun. 2010; 402 (4): 651-657 非專利文獻(xiàn) 16: Rothe, C. etal. J. Mol. Biol. 2008; 376:1182-1200。
[0005] 發(fā)明概述 本發(fā)明待解決的問題 本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供可用于預(yù)防或治療癌癥或抑制癌癥轉(zhuǎn)移的抗人ADAM28抗 體。
[0006] 解決問題的方法 為了解決上述問題，本發(fā)明人已經(jīng)制備結(jié)合人ADAM28的多種抗ADAM28抗體。作為結(jié) 果，他們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一些制備的抗人ADAM28抗體抑制ADAM28的酶活性，并且顯示對癌細(xì)胞 增殖的優(yōu)異的抑制作用，和在體內(nèi)模型中對癌轉(zhuǎn)移的抑制作用。基于上述發(fā)現(xiàn)，他們已經(jīng)進(jìn) 行了進(jìn)一步研宄，并且完成了本發(fā)明。
[0007] 因此，本發(fā)明涉及以下內(nèi)容。
[0008] [1]特異性結(jié)合人ADAM28且具有抑制人ADAM28的酶活性的活性的抗體。
[0009] [2] [1]的抗體，其在包含SEQ ID NO: 21、22或23顯示的氨基酸序列的表位處結(jié) 合人 ADAM28。
[0010] [3] [1]的抗體，其包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，其中 (1) 所述輕鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 5中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 7中顯示的氨基酸序列的⑶R3,并 且 所述重鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 8中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 9中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 10中顯示的氨基酸序列的⑶R3 ; (2) 所述輕鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 5中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 7中顯示的氨基酸序列的⑶R3,并 且 所述重鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 8中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 9中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 10中顯示的氨基酸序列的⑶R3， 并且在選自SEQ ID NO: 5、6和7中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、 缺失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸，和/或 在選自SEQ ID NO: 8、9和10中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、缺 失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸； (3) 所述輕鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 11中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 12中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 14中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16中顯示的氨基酸序列的⑶R3; 或 (4) 所述輕鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 11中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 12中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 14中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16中顯示的氨基酸序列的⑶R3， 并且在選自SEQ ID NO: 11、12和13中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取 代、缺失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸，和/或 在選自SEQ ID NO: 14、15和16中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、 缺失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸； (5) 所述輕鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 24中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 25中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 26中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 27中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 28中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 29中顯示的氨基酸序列的⑶R3; 或 (6) 所述輕鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 24中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 25中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 26中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 27中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 28中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 29中顯示的氨基酸序列的⑶R3， 并且在選自SEQ ID NO: 24、25和26中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取 代、缺失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸，和/或 在選自SEQ ID NO: 27、28和29中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、 缺失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸。
[0011] [4] [3]的抗體，其中 (1'）所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 17中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區(qū) 包含SEQ ID NO: 18中顯示的氨基酸序列； (3'）所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 19中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區(qū) 包含SEQ ID NO: 20中顯示的氨基酸序列；或 (5'）所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 30中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區(qū) 包含SEQ ID NO: 31中顯示的氨基酸序列。
[0012] [5]藥物組合物，其包含[1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體。
[0013] [6]用于預(yù)防或治療癌癥的藥劑，其包含[1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體。
[0014] [7]癌轉(zhuǎn)移抑制劑，其包含[1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體。
[0015] [8]預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中的癌癥的方法，其包括將有效量的[1] - [4]中任一 項(xiàng)的抗體施用于所述哺乳動(dòng)物。
[0016] [9] [8]的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
[0017] [10]抑制哺乳動(dòng)物中的癌轉(zhuǎn)移的方法，其包括將有效量的[1] - [4]中任一項(xiàng)的 抗體施用于所述哺乳動(dòng)物。
[0018] [11] [10]的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
[0019] [12] [1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體，其用于預(yù)防或治療癌癥。
[0020] [13] [1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體，其用于抑制癌轉(zhuǎn)移。
[0021] [14] [1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體用于產(chǎn)生用于預(yù)防或治療癌癥的藥劑的用途。
[0022] [15] [1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體用于產(chǎn)生癌轉(zhuǎn)移抑制劑的用途。
[0023] [16]多核苷酸，其編碼[1] - [4]中任一項(xiàng)的抗體。
[0024] [17]載體，其包含[16]的多核苷酸。
[0025] [18]轉(zhuǎn)化體，其包含[17]的載體。
[0026] 發(fā)明效果 根據(jù)本發(fā)明，提供了可用于預(yù)防或治療癌癥或抑制癌癥轉(zhuǎn)移的抗人ADAM28抗體。
[0027] 附圖簡述 圖1顯示抗人ADAM28抗體的酶活性抑制作用。
[0028] 圖2顯示抗人ADAM28抗體的體外癌細(xì)胞增殖抑制作用。
[0029] 圖3顯示抗人ADAM28抗體的體內(nèi)癌細(xì)胞增殖抑制作用。
[0030] 圖4顯示抗人ADAM28抗體的體內(nèi)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制作用。
[0031] 圖5顯示抗人ADAM28抗體的體內(nèi)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制作用。
[0032] 實(shí)施方案的描述 本發(fā)明提供了具有對人ADAM28特異性結(jié)合活性和抑制人ADAM28的酶活性的活性的抗 體。
[0033] ADAM28是已知蛋白，并且其氨基酸序列和其cDNA序列也是已知的。ADAM28包括兩 種原型膜錨定形式（ADAM28m)和短分泌形式（ADAM28S)，這兩者都涵蓋在本發(fā)明的ADAM28 中。人ADAM28m的代表性氨基酸序列顯示于SEQ ID NO: 2,人ADAM28m的代表性cDNA序列 顯示于SEQ ID NO: 1，人ADAM28s的代表性氨基酸序列顯示于SEQ ID NO: 4,且人ADAM28s 的代表性cDNA序列顯示于SEQ ID NO: 3。
[0034] 本發(fā)明的抗體具有對人ADAM28的特異性結(jié)合活性。
[0035] "人ADAM28"意指ADAM28的氨基酸序列或核酸序列具有與人中天然表達(dá)的ADAM28 的氨基酸序列或核苷酸序列相同或基本上相同的氨基酸序列或核酸序列。"基本上相同"意 指目標(biāo)氨基酸序列或核酸序列與