一株釀酒酵母菌株及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一株釀酒酵母{Saccharomyces cerevisiaS) MLBl菌株及其應用，屬于微生物生防防治技術領域。
【背景技術】
[0002]新鮮水果和蔬菜在采后需要有一定的貯藏和運輸周期，在此期間大量的采后損失，如腐爛、營養(yǎng)和水分損失常常發(fā)生。在流通過程中損失的主要原因可歸納為:生理的(果蔬自身生理衰敗)、病理的(病原微生物致腐)、物理的(機械損傷、環(huán)境濕度不適宜)以及三者共同作用引起的。然而最終呈現(xiàn)在人們眼前的直觀損失幾乎均為病理性的腐爛損失，其中真菌則是果蔬產品采后最主要的致腐病原菌。據統(tǒng)計，發(fā)達國家有10-30%的新鮮果品損失于采后的腐爛，在缺乏貯運冷藏設備的發(fā)展中國家，其腐損率高達40-50%。目前我國的果蔬采后病害損失也非常嚴重，據資料顯示，我國每年果蔬腐爛超過8000萬噸，造成的經濟損失達750億元，占整個產值的30-40%。
[0003]水果采后病害的發(fā)生是寄主和病原菌在一定的環(huán)境條件下相互斗爭，最后導致發(fā)病的過程，并經過進一步的發(fā)展而使病害擴大和蔓延。
[0004]雖然化學殺菌劑以高效、低成本、使用方便等特點得到廣泛使用，但其直接作用于果蔬產品，對食品安全具有的潛在威脅。自20世紀80年代中期，在作物病蟲害生物防治蓬勃發(fā)展的帶動下，果蔬采后生物防治作為一種控制采后病害的新途徑逐漸被人們所重視，并逐步成為研宄熱點。
[0005]果蔬采后病害生物防治就是重新建立果蔬表面的微生物類群，形成生物學緩沖，以抑制采后病害的發(fā)生。與化學殺菌劑不同的是，生物防治不是對病原菌完全殺滅，只是使病原菌處于一種低活性和高抑制的狀態(tài)；不是對病害完全抑制，而是達到一種穩(wěn)定而持久的對病害的相對控制。人為引入拮抗菌用于采后果蔬的病害防治，這是目前利用拮抗菌的主要途徑。與在大田進行生物防治相比，在采后應用拮抗菌防病具有獨特而明顯的優(yōu)勢:
(I)果蔬貯藏環(huán)境容易控制，避免了將生防制劑施于高度變化而難于預測的環(huán)境中，而這個問題是以前大田生物防治的重要限制因素；(2)范圍小而防治對象明確，拮抗菌容易擊中目標病原菌，防治效率提高，同時生產成本也相對降低(羅閏良，1993)。
[0006]采后生物防治的拮抗菌主要有細菌、酵母菌和小型絲狀真菌。在這些拮抗細菌中，對枯草芽抱桿菌研宄較多，實驗證明它能有效防治柑桔青霉病、綠霉病和蒂腐病(Gutterl953 ；Singh和DeveralI，1984 ;范青等，2000a)，桃，油桃，李，杏褐腐病(Pusey 和 Wilson, 1984 ；范青等，2000b)。其它細菌如 Bacillus pumilus 和 Bacillus
可防治梨青霉病和灰霉病(Janisiewcz 和 Rotiman，1987，1988)。部分小型絲狀真菌也被用于果蔬采后生物防治，如Lim和Tohrbock(1950)分離的Penicillumsp.能夠防治菠蘿青霉病。
[0007]由于酵母菌能在較干燥的果蔬表面生存，能夠產生胞外多糖加強其自身的生存能力，能迅速利用營養(yǎng)進行繁殖，受殺蟲劑的影響較小，故近年來倍受青睞，對其研宄也日益廣泛和深入。例如能有效防治蘋果灰霉病的酵母措抗菌有'Kloeckera api cu I a ta > Candi daguilliermondii (Maclaugahlin 等，1992)，Candida oleophila (Mercier 和 Wilson，1994)，Sporbolomyces /^^^(FilonoW, 1998), Pichia anomala(Ji jakIi 和 Lepoivre，1998)，Candida sake^W Candida ie/wia(Wilson 等，1993)，Cryptococcus albidusi^na和Tina，2001)，Trichosporon sp (田世平，2001);對柑桔綠霉病有抑制效果的famata (Arras, 1996);還有能防治蘋果、梨、草墓、稱猴桃、葡萄青霉病、軟腐病和黑斑病等多種病害的 Pichia membranefaciens(Fan 和 Tian，2000)，Candida guilliermondii(范青等，2000c)，Rhodotorula glut ins ?Μ Cryptococcus laurentii (Lima 等，1998)，等等。
[0008]酵母菌與其它生防微生物相比，具有許多優(yōu)越性:
1、拮抗效果好。酵母菌能有效地利用貧乏營養(yǎng)快速增殖，干燥情況下可在果蔬表面定殖并存活相當長時間，能耐受低溫等不良環(huán)境，拮抗效果好。
[0009]2、能和化學殺菌劑共同使用。酵母菌對化學殺菌劑有較大的抗性，可以和化學殺菌劑混用，減少殺菌劑的用量，提高生防效果。
[0010]3、不產生抗菌素。酵母菌不產生抗菌素，能夠避免病原菌對抗菌素產生抗性而降低生物防治抑菌效果，另一方面也能夠避免某些抗菌素對人體的不利影響。
[0011]目前，投入市場的生防制劑并不多，能進行商業(yè)化生產的酵母菌只有畢赤氏酵母、假絲酵母等少數幾種，且文獻報道的拮抗酵母大多用來防治果蔬傷口的病原菌，而不是直接用在果蔬表皮防止正常果蔬的病原菌入侵；另一方面在商業(yè)化生產條件下，由于環(huán)境條件的不確定性，其防效或者達不到要求或者不穩(wěn)定，且與化學殺菌劑相比防治成本較高。
[0012]經過文獻檢索，未見與本發(fā)明相同的公開文獻報道。

【發(fā)明內容】

[0013]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)行酵母菌作為拮抗生防菌應用于果蔬采后病的不足，而提供一株能直接應用于果蔬采后灰葡萄孢浸染病防治的釀酒酵母iSaccharotnycescerevisiae) MLBl菌株菌株及其應用。
[0014]本發(fā)明通過從從自然界中進行菌株分離、培養(yǎng)，獲得一株能對果蔬采后病原菌灰葡萄有措抗作用的釀酒酵母{Saccharomyces cerevisiae) MLBl菌株，該菌株2014年I月6日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為:CGMCC N0.8689。保藏單位地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號。
[0015]本發(fā)明的釀酒酵母{Saccharomyces cerevisiad) MLBl菌株的基本生理特征為:25 °C培養(yǎng)，細胞圓形、卵圓形或洋梨形。在幼年菌落中，細胞為3~7 X 4~10微米，長和寬的比是1:1~2:1;2(TC培養(yǎng)21天在麥芽汁中沉淀。子囊孢子圓形，平滑；為野生型菌株，而非基因工程菌株。
[0016]本發(fā)明的釀酒酵母{Saccharomyces cerevisiae) MLBl菌株在制備抑制果蔬采后植物病原菌灰葡萄孢制劑中的應用。
[0017]本發(fā)明的釀酒酵母{Saccharomyces cerevisiad) MLBl菌株，是通過如下常規(guī)過程獲得:
將采集自云南省元江縣城郊的土壤樣品(2克)，用麥芽液體培養(yǎng)基富集培養(yǎng)48小時，然后按稀釋涂布法取一定量的富集液進行涂布分離，挑取單菌落純化保存?zhèn)溆茫捎玫呐囵B(yǎng)基為YNB培養(yǎng)基。
[0018]本發(fā)明實現(xiàn)的能直接抑制果蔬灰葡萄孢培養(yǎng)物按如下常規(guī)發(fā)酵步驟實現(xiàn):
首先，將麥芽按微生物常規(guī)麥芽處理方法制備成麥芽液體培養(yǎng)基備用，滅菌條件
115。。20 分鐘。
[0019]其次，將MLBl菌株按微生物發(fā)酵常規(guī)液體種子培養(yǎng)方法、以滅菌麥芽培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，經搖瓶、種子罐一系列培養(yǎng)后，當每毫升培養(yǎng)液含酵母數大于IX18個時，按發(fā)酵罐培養(yǎng)液1/15的量投入到發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，溫度控制在28°C，保持持續(xù)通入無菌空氣。培養(yǎng)48-72小時。
[0020]最后，收集發(fā)酵液，即為目的培養(yǎng)物備用，經常規(guī)生測后確定抑制效果。
[0021]本發(fā)明的有益效果在于:
1、酵母菌株MLBl能有效抑制病原菌灰葡萄孢，培養(yǎng)物對果蔬采后病原菌灰葡萄的抑制效果>60%ο
[0022]2、彌補了果蔬采后病原菌灰葡萄孢防治來源和防治效果的不足，擴大了現(xiàn)行果蔬采后病防治生防菌的菌株來源和提高果蔬采后病生防效果。
【具體實施方式】
[0023]本發(fā)明實施例的釀酒酵母{Saccharomyces cerevisiai) MLBl菌株，是通過如下常規(guī)過程獲得:
將采集自云南省元江縣城郊的土壤樣品(2克)，用麥芽液體培養(yǎng)基富集培養(yǎng)48小時，然后按稀釋涂布法取一定量的富集液進行涂布分離，挑取單菌落純化保存?zhèn)溆?，采用的培養(yǎng)基為YNB培養(yǎng)基。
[0024]本發(fā)明能抑制病原菌灰葡萄孢的實施例如下:
實施例一:
抑制果蔬灰葡萄孢酵母培養(yǎng)物按如下常規(guī)發(fā)酵步驟實現(xiàn):
首先，將麥芽按微生物常規(guī)麥芽處理方法制備成麥芽液體培養(yǎng)基備用，滅菌條件115。。20 分鐘。
[0025]其次，將MLBl菌株按微生物發(fā)酵常規(guī)液體種子培養(yǎng)方法、以滅菌麥芽培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，經搖瓶、種子罐一系列培養(yǎng)后，當每毫升培養(yǎng)液含酵母數大于IX18個時，按發(fā)酵罐培養(yǎng)液1/15的量接入到發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)，溫度控制在28°C，保持持續(xù)通入無菌空氣。培養(yǎng)48小時。
[0026]最后，收集發(fā)酵液，即為目的培養(yǎng)物備用，經常規(guī)的生測后確定抑制效果為60%。
[0027]實施例二:
與實施例一不同之處:種子培養(yǎng)液的糖濃度為3%，種子培養(yǎng)液酵母數大于1.8X 18個時接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐培養(yǎng)液的糖濃度為7%，培養(yǎng)時間72小時。經常規(guī)生測后確定抑制效果為80%。
[0028]實施例三:
與實施例一不同之處:種子培養(yǎng)液的糖濃度為3%，種子培養(yǎng)液酵母數達到2.5X 18個時接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐培養(yǎng)液的糖濃度為7%，培養(yǎng)時間60小時。經常規(guī)生測后確定抑制效果為70%。
[0029]實施例四:
與實施例一不同之處:種子培養(yǎng)液的糖濃度為3%，種子培養(yǎng)液酵母數大于2.0X 18個時接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐培養(yǎng)液的糖濃度為9%，培養(yǎng)時間72小時。經常規(guī)生測后確定抑制效果為85%。
【主權項】
1.一株釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) MLBl 菌株，保藏號為:CGMCCN0..868902.權利I所述釀酒酵母(Sacclmromycescerevisiae) MLBl菌株在制備抑制果蔬采后植物病原菌灰葡萄孢生防制劑中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一株釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株及其應用，屬于微生物生防防治技術領域。本發(fā)明的釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株，保藏號為：CGMCC No.8689。本發(fā)明的釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株在制備抑制果蔬采后植物病原菌灰葡萄孢生防制劑中的應用。本發(fā)明的有益效果在于：1、酵母菌株MLB1能有效抑制病原菌灰葡萄孢，培養(yǎng)物對果蔬采后病原菌灰葡萄的抑制效果>60%。2、彌補了果蔬采后病原菌灰葡萄孢防治菌株來源和防治效果的不足，擴大了現(xiàn)行果蔬采后病防治生防菌的菌株來源和提高果蔬采后病生防效果。CGMCC No.868920140106
【IPC分類】A01N63/04, A01P3/00, C12N1/16, C12R1/865
【公開號】CN104946548
【申請?zhí)枴緾N201510360508
【發(fā)明人】喬敏, 余澤芬, 賈東晨, 張克勤
【申請人】云南大學
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年6月26日