一種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基，適用于乳酸鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn)使用，具體地說，涉及一 種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基及其應(yīng)用，屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著抗生素在畜牧業(yè)越來越廣泛的應(yīng)用，其弊端逐漸顯現(xiàn)出來，耐藥性細(xì) 菌的產(chǎn)生、動物腸道菌群的失調(diào)、殘留藥物對人體的危害等方面使抗生素治療受到限制。尋 找天然無害且高效的抗菌活性物質(zhì)已成為預(yù)防、治療畜禽疾病的趨勢。乳酸鏈球菌抗菌肽 具有平衡胃腸道菌群，殺滅胃腸道病原菌，促進(jìn)消化吸收等作用，對于雞等較易發(fā)生的消化 道疾病，如腹瀉、傳染性胃腸炎、雞腸炎、沙門氏菌病等有極好的功效。
[0003] 盡管乳酸鏈球菌抗菌肽有著顯著的優(yōu)勢，然而由于其自身不能合成多種氨基酸、 維生素及相關(guān)生長因子，因此導(dǎo)致營養(yǎng)要求和培養(yǎng)條件較為復(fù)雜。常用的乳酸鏈球菌培養(yǎng) 基為MRS培養(yǎng)基，原料昂貴，尤其氮源成分價格比重較大，在生產(chǎn)中應(yīng)用成本太高。生長過 程中，菌體會產(chǎn)生乳酸等有機酸類代謝產(chǎn)物，使培養(yǎng)基的pH值不斷下降，從而抑制乳酸鏈 球菌的生長，導(dǎo)致菌體活性下降甚至死亡。因此，采用傳統(tǒng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，菌種密度較低，質(zhì) 量無法保證，且生產(chǎn)成本較高。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)的乳酸鏈球菌培養(yǎng)基具有以下缺陷：乳酸鏈球菌的發(fā)酵時間長，制得的 菌液含菌量低，提取的抗菌肽純度低，抗菌效果不夠理想，培養(yǎng)基成本高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對以上不足，提供一種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基， 實現(xiàn)以下發(fā)明目的： 1、 提高制備的乳酸鏈球菌菌液的含菌量；使含菌量為3. 8-6.OX109cfu/ml; 2、 提高培養(yǎng)的乳酸鏈球菌中提取的抗菌肽純度；使純度為63-72% ; 3、 提高培養(yǎng)的乳酸鏈球菌中提取的抗菌肽的抗菌效果； 4、 縮短發(fā)酵培養(yǎng)乳酸鏈球菌的發(fā)酵時間； 5、 降低發(fā)酵培養(yǎng)基的成本。
[0006] 為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，采用以下技術(shù)方案： 一種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包括下列組分：葡萄糖、玉米漿、磷 酸氫二鉀、醋酸鈉、明膠、抗壞血酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳、蒸餾水。
[0007] 以下是對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)： 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組分的總量份為：葡萄糖25-35份、玉米漿10-20份、磷酸氫二鉀2-3 份、醋酸鈉3-5份、明膠1. 5-2. 5份、抗壞血酸鈉0. 4-0. 6份、硫酸鎂0. 2-0. 4份、硫酸錳 0? 05-0. 1份、蒸餾水1000份。
[0008] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下重量份的組分：葡萄糖30份、玉米漿15份、磷酸氫二 鉀2份、醋酸鈉4份、明膠2份、抗壞血酸鈉0. 5份、硫酸鎂0. 3份、硫酸錳0. 08份、蒸餾水 1000 份。
[0009] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法包括調(diào)pH值步驟：調(diào)整溶液pH值至6. 8~7. 0。
[0010] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法還包括滅菌步驟：采用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌，滅菌溫 度為121°C，滅菌時間為30min。
[0011] 一種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基的應(yīng)用，包括制備種子液、接種、發(fā)酵步驟。
[0012] 所述的制備種子液步驟：乳酸鏈球菌菌種接種量為l〇g/L，制成的種子液的乳酸 鏈球菌含量為 1.ox107-5.OX107cfu/ml。
[0013] 所述的接種步驟中種子液：培養(yǎng)基的體積比為4:100。
[0014] 所述的發(fā)酵步驟：發(fā)酵溫度為37-39°C，發(fā)酵罐的攪拌轉(zhuǎn)速為120r/min，發(fā)酵罐內(nèi) 壓力為〇? 〇5MPa。
[0015] 采用本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基制備乳酸鏈球菌菌液，含菌量為3. 8-6.OX109cfu/ml， 從得到的菌液中提取的乳酸鏈球菌抗菌肽純度為63-72%。
[0016] 采用本發(fā)明技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果： 1、 采用本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基制備乳酸鏈球菌菌液，含菌量為3. 8-6.OX109cfu/ml; 2、 采用本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)提取的乳酸鏈球菌抗菌肽純度為63-72% ; 3、 采用本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)提取的乳酸鏈球菌抗菌肽，對大腸桿菌的抑菌圈直徑 為8. 11-9. 36mm，效價為7723-8627IU/mL;抗菌肽對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為 8. 56-9. 05mm，效價為 7824-8778IU/mL; 4、 采用本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)乳酸鏈球菌，發(fā)酵時間為30-34小時； 5、 本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基成本為1920-2321元/噸。
【具體實施方式】
[0017] 實施例1一種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基 培養(yǎng)基所含組分及其重量份如下： 葡萄糖25份、玉米漿20份、磷酸氫二鉀3份、醋酸鈉3份、明膠1. 5份、抗壞血酸鈉0. 4 份、硫酸鎂0. 2份、硫酸錳0. 05份、蒸餾水1000份； 培養(yǎng)基制備方法： 步驟1、按上述重量份稱取所有的組分，備用； 步驟2、將稱好的葡萄糖、玉米漿溶解于蒸餾水中，得到葡萄糖、玉米漿混合溶液，在無 菌條件下過濾，濾液保持無菌，備用； 步驟3、調(diào)pH值 將稱好的除葡萄糖、玉米漿、蒸餾水以外的其他所有組分混合均勻，加入到步驟2的混 合溶液中，攪拌至完全溶解，轉(zhuǎn)速80r/min，溶解后，調(diào)整溶液pH值至6. 8~7. 0 ; 步驟4、滅菌 將步驟3得到的混合溶液置于121°C高壓蒸汽滅菌鍋中，滅菌30min; 步驟5、在無菌條件下，滅菌后的混合溶液冷卻至常溫，制得成品發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0018] 實施例2 -種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基 培養(yǎng)基所含組分及其重量份如下： 葡萄糖30份、玉米漿15份、磷酸氫二鉀2份、醋酸鈉4份、明膠2份、抗壞血酸鈉0. 5 份、硫酸鎂0. 3份、硫酸錳0. 08份、蒸餾水1000份； 培養(yǎng)基制備方法：采用實施例1的制備方法。
[0019] 實施例3 -種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基 培養(yǎng)基所含組分及其重量份如下： 葡萄糖35份、玉米漿10份、磷酸氫二鉀2份、醋酸鈉5份、明膠2. 5份、抗壞血酸鈉0. 6 份、硫酸鎂0. 4份、硫酸錳0. 1份、蒸餾水1000份； 培養(yǎng)基制備方法：采用實施例1的制備方法。
[0020] 實施例4一種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基 培養(yǎng)基所含組分及其重量份如下： 葡萄糖30份、玉米漿15份、磷酸氫二鉀2份、醋酸鈉4份、明膠2份、抗壞血酸鈉0. 5 份、硫酸鎂0. 3份、硫酸錳0. 08份、南瓜汁0. 6份、枸櫞酸鐵銨0. 06份、天門冬素0. 12份、 鹽酸吡哆醇0. 1份、維生素B6 0. 08份、維生素C0. 3份、維生素D0. 1份、蒸餾水1000 份； 培養(yǎng)基制備方法： 步驟1、按上述重量份稱取所有的組分，備用； 步驟2、將稱好的葡萄糖、玉米漿溶解于蒸餾水中，得到葡萄糖、玉米漿混合溶液，在無 菌條件下過濾，濾液保持無菌，備用； 步驟3、將稱好的除葡萄糖、玉米漿、蒸餾水以外的其他所有組分混合均勻，得到混合溶 液； 步驟4、調(diào)pH 將步驟2和步驟3得到的溶液混合，lOOrpm轉(zhuǎn)速攪拌20min，靜止后，調(diào)pH至6. 8-7. 0 ; 步驟5、滅菌 將步驟3得到的混合溶液置于121°C高壓蒸汽滅菌鍋中，滅菌30min; 步驟6、在無菌條件下，滅菌后的混合溶液冷卻至常溫，制得成品發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0021] 實施例5 -種乳酸鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基 培養(yǎng)基所含組分及其重量份如下： 葡萄糖30份、玉米漿15份、磷酸氫二鉀2份、醋酸鈉4份、明膠2份、抗壞血酸鈉0. 5 份、硫酸鎂0.