一種從天然產(chǎn)物中提取分離牡荊素木糖苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及從天然產(chǎn)物中提取分離牡荊素木糖苷的方法，特別是一種從木菠蘿葉 中提取分離牡荊素木糖苷的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 牡荊素木糖苷或牡荊素木糖甙，其英文名稱為vitexin-2" -O-xyloside或者 vitexin-2-O-xyloside，分子式 C26H28O14，分子量：564,結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 木菠蘿（Artocarpus heterophyllus lam)為?？颇静ぬ}屬植物，其果實(shí)又稱菠蘿 蜜、樹菠蘿、蜜冬瓜、牛肚子果等，為世界著名熱帶水果，原產(chǎn)于熱帶亞洲，在熱帶潮濕地區(qū) 廣泛栽培，引入我國(guó)已有1000多年歷史。木菠蘿的果肉性平、味甘微酸、無(wú)毒，有生津、止渴 解煩、醒酒、益氣、助消化之功效?！侗静菥V目》中記載："菠蘿蜜生交趾南番諸國(guó)。內(nèi)肉層疊 如桔，食之味至甜美如蜜，瓢韋，甘香微酸，止渴解煩，醒酒益氣，令人悅澤，核中仁，補(bǔ)中益 氣，令人不饑輕健。"木菠蘿是集水果、木本糧食及珍貴用材于一體的熱帶樹種。目前國(guó)內(nèi)外 對(duì)木菠蘿葉的研宄文獻(xiàn)較少，從目前已有的化學(xué)成分文獻(xiàn)報(bào)道中可知，木菠蘿葉中的化學(xué) 成分主要為黃酮類化合物、多糖類化合物和多酚類化合物等。
[0005] 牡荊素木糖苷在植物中分布并不廣泛，目前對(duì)其各方面的研宄文獻(xiàn)都很少，在已 有的文獻(xiàn)報(bào)道中可知，牡荊素木糖苷具有一定的藥理活性，其具有抗癌和抗氧化的藥理作 用。雖然有文獻(xiàn)報(bào)道木菠蘿葉中含有黃酮類化合物，但是到目前為止，沒(méi)有任何文獻(xiàn)報(bào)道木 菠蘿葉中含有牡荊素木糖苷，也沒(méi)有任何文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)從木菠蘿葉中提取分離高純度牡荊素 木糖苷的制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種能源消耗小，牡荊素木糖苷得率在70%以上，純度達(dá) 90%以上，產(chǎn)量大，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的牡荊素木糖苷提取工藝。
[0007] 本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0008] (1)乙醇提?。簩⒛静ぬ}葉粉碎后用30~50%的乙醇提取，料液比為I : 10~ 1 : 15,提取方法可以有以下幾種：回流提取法、超聲提取法和微波提取法，提取次數(shù)為2~ 3次，提取時(shí)間每次為30~60分鐘，合并提取液，回收乙醇，并將提取液濃縮至料液比為 1 : 0.5~1 : 0.8,靜置12~24小時(shí)，過(guò)濾，得到濃縮液。
[0009] (2)大孔吸附樹脂柱層析：上述濃縮液通過(guò)8~10倍體積的大孔吸附樹脂進(jìn)行飽 和吸附，先后用純水和不同濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，將含有牡荊素木糖苷的洗脫液減壓 濃縮，得到含牡荊素木糖苷粗品的浸膏。
[0010] (3)制備高效液相色譜分離純化：將上述含牡荊素木糖苷粗品的浸膏用3~5倍 量體積的純水溶解，用制備高效液相色譜進(jìn)行分離純化，將含有牡荊素木糖苷的洗脫液減 壓濃縮，得牡荊素木糖苷。
[0011] 上述牡荊素木糖苷的制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹脂的型號(hào)為D101、 AB-8、HZ-806、HPD-100、HPD-400 和 X-5。
[0012] 上述牡荊素木糖苷的制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹脂柱層析的洗脫過(guò)程 為：先用4~5倍量柱體積的純水洗脫去掉大分子量的水溶性雜質(zhì)，再用4~5倍量柱體積 的10~20%乙醇洗脫去掉分子量較小的極性雜質(zhì)，最后用4~5倍量柱體積30~60%乙 醇洗脫得到牡荊素木糖苷粗品。
[0013] 上述牡荊素木糖苷的制備方法，其特征在于所述制備高效液相色譜的色譜條件 為：色譜柱為全制備或者半制備ODS色譜柱，流動(dòng)相為15~30%乙腈或者20~40%甲醇， 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm或者330nm。
[0014] 本發(fā)明的有益效果
[0015] 和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有如下有益效果：
[0016] 1、本發(fā)明方法的提取效率較好，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)，對(duì)木菠蘿葉中所含牡荊 素木糖苷的提取得率達(dá)70%以上。
[0017] 2、本發(fā)明制備的牡荊素木糖苷純度較高，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)，牡荊素木糖苷 的含量可達(dá)到90%以上。
[0018] 3、本發(fā)明的原料為木菠蘿葉，木菠蘿樹在中國(guó)廣西、廣東和海南等南方省份分布 很廣，其葉子一般是被視為農(nóng)作物廢棄物而遺棄掉，既造成極大的浪費(fèi)，同時(shí)也對(duì)環(huán)境造成 不良影響，本發(fā)明提供了木菠蘿葉廢物利用的新用途。
[0019] 4、本發(fā)明分離的牡荊素木糖苷為首次在木菠蘿葉中分離得到，該化合物具有一定 抗癌和抗氧化的藥理活性，本發(fā)明為充分利用牡荊素木糖苷的藥用價(jià)值提供了高純度牡荊 素木糖苷的制備方法。
[0020] 5、目前沒(méi)有任何文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)從天然產(chǎn)物中制備牡荊素木糖苷的方法，本發(fā)明具有 溶劑安全、工藝簡(jiǎn)單、成本較低，適用于工業(yè)生產(chǎn)的特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0022] 實(shí)施例1
[0023] 取Ikg木菠蘿葉（經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)，此批木菠蘿葉中牡荊素木糖苷的含量 為2. 5mg/g，Ikg木菠蘿葉總共含有2. 5g的牡荊素木糖苷），粉碎成粗粉，加入15L濃度為 30 %的乙醇回流提取60分鐘，過(guò)濾，藥渣加入IOL濃度為30 %的乙醇回流提取30分鐘，過(guò) 濾，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，并將提取液濃縮至〇. 5L，提取液室溫靜置12小時(shí)，過(guò) 濾，得到濃縮液。濃縮液通過(guò)柱體積5L的DlOl大孔吸附樹脂柱進(jìn)行飽和吸附，先后用20L 純水和20L 10%的乙醇洗脫除雜，接著用20L 30%的乙醇溶液洗脫牡荊素木糖苷，將30% 乙醇洗脫液減壓回收乙醇至干燥，所得浸膏用3倍量體積的超純水超聲溶解，溶液用微孔 濾膜過(guò)濾，濾液用高效液相色譜法進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，色譜條件為：制備高效液相色譜儀 (LC-8A，日本島津公司），半制備ODS色譜柱（10 X 250mm，5 μ m，美國(guó)菲羅門公司），進(jìn)樣量為 lmL，流動(dòng)相為18%的乙腈，流速為5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。收集含有牡荊素木糖苷的 洗脫液減壓濃縮，得到I. 95g含量為93. 2%的牡荊素木糖苷（提取得率為78. 0% )。
[0024] 提取得率的計(jì)算公式如下：
[0025]
[0026] 實(shí)施例2
[0027] 取Ikg木菠蘿葉（經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)，此批木菠蘿葉中牡荊素木糖苷的含量 為2. 5mg/g，Ikg木菠蘿葉總共含有2. 5g的牡荊素木糖苷），粉碎成粗粉，加入15L濃度為 50 %的乙醇超聲提取60分鐘，過(guò)濾，藥渣加入IOL濃度為50 %的乙醇超聲提取30分鐘，過(guò) 濾，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，并將提取液濃縮至〇. 8L，提取液室溫靜置24小時(shí)，過(guò) 濾，得到濃縮液。濃縮液通過(guò)柱體積6. 5L的X-5大孔吸附樹脂柱進(jìn)行飽和吸附，先后用30L 純水和30L 20%的乙醇洗脫除雜，接著用30L 50%的乙醇溶液洗脫牡荊素木糖苷，將50% 乙醇洗脫液減壓回收乙醇至干燥，所得浸膏用5倍量體積的超純水超聲溶解，溶液用微孔 濾膜過(guò)濾，濾液用高效液相色譜法進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，色譜條件為：制備高效液相色譜儀 (LC-8A，日本島津公司），半制備ODS色譜柱（20 X 250mm，5 μ m，日本島津公司），進(jìn)樣量為 5mL，流動(dòng)相為25%的甲醇，流速為10mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為330nm。收集含有牡荊素木糖苷的 洗脫液減壓濃縮，得到2. 03g含量為95. 1 %的牡荊素木糖苷（提取得率為81. 2% )。
[0028] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明、【具體實(shí)施方式】及試驗(yàn)，對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描 述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見 的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的 范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從天然產(chǎn)物中提取分離牡荊素木糖苷的方法，包括以下幾個(gè)步驟： (1) 乙醇提?。簩⒛静ぬ}葉粉碎后用30~50%的乙醇提取，料液比為I : 10~1 : 15， 提取方法可以有以下幾種：回流提取法、超聲提取法和微波提取法，提取次數(shù)為2~3次，提 取時(shí)間每次為30~60分鐘，合并提取液，回收乙醇，并將提取液濃縮至料液比為1 : 0. 5~ 1 : 0.8,靜置12~24小時(shí)，過(guò)濾，得到濃縮液； (2) 大孔吸附樹脂柱層析：上述濃縮液通過(guò)8~10倍體積的大孔吸附樹脂進(jìn)行飽和吸 附，先后用純水和不同濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，將含有牡荊素木糖苷的洗脫液減壓濃縮， 得到含牡荊素木糖苷粗品的浸膏； (3) 制備高效液相色譜分離純化：將上述含牡荊素木糖苷粗品的浸膏用3~5倍量體 積的純水溶解，用制備高效液相色譜進(jìn)行分離純化，將含有牡荊素木糖苷的洗脫液減壓濃 縮，得到牡荊素木糖苷。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述牡荊素木糖苷的制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹脂的型 號(hào)為 DlOl、AB-8、HZ-806、HPD-100、HPD-400 和 X-5。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述牡荊素木糖苷的制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹脂柱層 析的洗脫過(guò)程為：先用4~5倍量柱體積的純水洗脫去掉大分子量的水溶性雜質(zhì)，再用4~ 5倍量柱體積的10~20%乙醇洗脫去掉分子量較小的極性雜質(zhì)，最后用4~5倍量柱體積 30~60 %乙醇洗脫得到牡荊素木糖苷粗品。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述牡荊素木糖苷的制備方法，其特征在于所述制備高效液相色譜 的色譜條件為：色譜柱為全制備或者半制備ODS色譜柱，流動(dòng)相為15~30%乙腈或者20~ 40%甲醇，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm或者330nm。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種提取效率高，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的分離提純牡荊素木糖苷的方法。工藝步驟包括：乙醇提取、大孔吸附樹脂柱層析、制備高效液相色譜分離純化。本發(fā)明制備的牡荊素木糖苷純度達(dá)到90％以上，制備方法具有安全、簡(jiǎn)單、成本較低，適用于工業(yè)生產(chǎn)的特點(diǎn)。
【IPC分類】C07H1/08, C07H17/04
【公開號(hào)】CN104974202
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510359678
【發(fā)明人】潘小姣, 鄧家剛, 韋海紅, 李耀華, 梁臣艷, 梁潔
【申請(qǐng)人】廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2015年10月14日
【申請(qǐng)日】2015年6月26日