一株短小芽孢桿菌及其保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一株短小芽孢桿菌，及其在有益于保育 仔豬方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 保育仔豬，簡(jiǎn)稱斷奶仔豬，此階段的豬相當(dāng)脆弱，母源抗體消失，新的免疫系統(tǒng)還 沒(méi)有建立，再加上生長(zhǎng)速度快、應(yīng)激因素多等原因，很容易發(fā)生各種疾病甚至出現(xiàn)大面積死 亡?？股?、化學(xué)藥品雖然能在較短時(shí)間內(nèi)解決出現(xiàn)的問(wèn)題，但由此引發(fā)的藥物抗性和藥物 殘留問(wèn)題，有可能會(huì)對(duì)仔豬后期生長(zhǎng)產(chǎn)生影響。如何提高保育仔豬健康狀況、成活率、整齊 度、充分發(fā)揮生長(zhǎng)后效性，是每個(gè)養(yǎng)殖戶共同關(guān)心的問(wèn)題。
[0003] 微生態(tài)制劑具有調(diào)控動(dòng)物腸道微生物平衡、增殖有益菌、抑制有害菌、降低腸道pH 值、提高消化道酶活性、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和機(jī)體免疫力等作用，關(guān)于微生態(tài)制劑在仔豬養(yǎng)殖 中的應(yīng)用報(bào)道日益增多。CN 101703136B報(bào)道了植物乳桿菌活菌制劑在防治仔豬拉稀上的 應(yīng)用，仔豬拉稀有效率在90 %以上，治愈率80 %以上。CN 103255080B報(bào)道了凝結(jié)芽孢桿菌 (Bacillus coagulans HM-09)在制備改善乳仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉的飼料中的應(yīng)用，可以減 少斷奶仔豬腹瀉的發(fā)生率，進(jìn)而減少腸源性疾病的發(fā)生，提高飼料消化率，提高仔豬飼料利 用率。CN 103205373B報(bào)道了一株用于乳仔豬養(yǎng)殖的丁酸梭菌，可在乳仔豬腸道內(nèi)拮抗動(dòng)物 病原菌，維持和調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，并產(chǎn)生淀粉梅、維生素，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)飼 料的消化吸收和營(yíng)養(yǎng)作用。
[0004] 一般來(lái)說(shuō)，微生態(tài)制劑起效慢，畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中需要堅(jiān)持使用才能收到很好的效 果。因此，開(kāi)發(fā)一種既能長(zhǎng)效保健用、又能快速解決仔豬拉稀、下痢等問(wèn)題的微生態(tài)制劑，對(duì) 于實(shí)現(xiàn)保育仔豬平穩(wěn)生產(chǎn)顯得尤為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本申請(qǐng)人提供了一株短小芽孢桿菌及其保育仔豬 用復(fù)合微生態(tài)制劑。本發(fā)明既能快速解決仔豬拉稀、下痢等問(wèn)題，又能在長(zhǎng)期使用過(guò)程中 提升保育仔豬的健康水平。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] -株短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus)ZS008,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心， 保藏編號(hào)為CCTCC NO.M2015451，保藏日期為2015年7月13日。保藏單位地址為中國(guó)·武 漢.武漢大學(xué)。
[0008] 一種保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑，由以下菌種組合配制成為復(fù)合菌劑： 短小芽孢桿菌CCTCC No. M2015451、凝結(jié)芽孢桿菌CCTCC No. M2015273、枯草芽孢桿菌CCTCC No. M 2011443、地衣芽孢桿菌 CCTCC No. M 2012458。
[0009] 所述復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑的有效活菌數(shù)為I. 4X 108-7. OX 101(lcfu/g，各菌種 的組成成分如下：
[0010]
[0011] 所述凝結(jié)芽孢桿菌為凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans)ZS007,保藏于中國(guó)典 型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2015273。
[0012] 所述的保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑的應(yīng)用在于提升保育仔豬的生產(chǎn)性 能。使用量為I. 0~5. Og/頭?天。
[0013] 枯草芽孢桿菌CCTCC No. M 2011443、地衣芽孢桿菌CCTCC No. M 2012458的單菌粉 購(gòu)自泰州綠圣元生物科技有限公司，其產(chǎn)品規(guī)格均為5. OX 101(lCfU/g
[0014] 本發(fā)明有益的技術(shù)效果在于：
[0015] (1)能快速解決仔豬拉稀、下痢等問(wèn)題；
[0016] (2)長(zhǎng)期使用后，可以提升保育仔豬的健康水平，從而達(dá)到提升保育仔豬生產(chǎn)能力 的效果。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 1、短小芽孢桿菌的篩選
[0018] 從江蘇無(wú)錫方鼎鼎養(yǎng)豬場(chǎng)附近的土壤樣品稱取2g，加入98ml無(wú)菌生理鹽水，80°C 熱處理IOmin后，在37°C搖床上120rpm條件下振蕩20min，吸取上清液Iml加入LB培養(yǎng)基 中稀釋涂布進(jìn)行菌株分離。通過(guò)對(duì)菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)、16S rDNA分析等手 段有效而準(zhǔn)確的確定菌種的屬種。
[0019] 最終得到編號(hào)為ZS008的菌種，鑒定為短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus)。該菌 種保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC No. M2015451，保藏日期為2015年7 月13日。
[0020] 2、凝結(jié)芽孢桿菌的篩選
[0021] 從江蘇無(wú)錫馬山某奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)附近的土壤樣品稱取2g，加入98ml無(wú)菌生理鹽水， 80°C熱處理IOmin后，在37°C搖床上120rpm條件下振蕩20min，吸取上清液Iml加入LB培 養(yǎng)基中稀釋涂布進(jìn)行菌株分離。通過(guò)對(duì)菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)、16S rDNA分析 等手段有效而準(zhǔn)確的確定菌種的屬種。
[0022] 最終得到編號(hào)為ZS-007的菌種，鑒定為凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans)。
[0023] ZS-007于2015年5月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M 2015273。
[0024] 3、復(fù)合微生態(tài)制劑的制備
[0025] 復(fù)合微生態(tài)制劑由短小芽孢桿菌CCTCC No. M2015451、凝結(jié)芽孢桿菌CCTCC No. M 2015273、枯草芽孢桿菌CCTCC No. M 2011443、地衣芽孢桿菌CCTCC No. M 2012458復(fù)配而 成。
[0026] 其中枯草芽孢桿菌CCTCC No. M 2011443、地衣芽孢桿菌CCTCC No. M 2012458的單 菌粉采購(gòu)自泰州綠圣元生物科技有限公司，其產(chǎn)品規(guī)格均為5. OX 101(lCfU/g。
[0027] 實(shí)施例1~3所配制的微生態(tài)制劑產(chǎn)品，各微生物含量如下表1 :
[0028] 表 1
[0029]
[0030] 單菌粉按照既定比例混合均勻后，添加無(wú)水葡萄糖作為載體，補(bǔ)充到總重量 的100% (以芽孢桿菌作為有效成分，加入載體后使產(chǎn)品總重量滿足最終活菌數(shù)達(dá)到 4. 0 X 108cfu/g，混合均勾后備用。
[0031] 加工過(guò)程應(yīng)保證操作環(huán)境的清潔，避免污染?？刂骗h(huán)境濕度70%以下，各原料水 分含量低于13%，該產(chǎn)品制成后常溫下保存24個(gè)月，-18°C下保存期限可以達(dá)到60個(gè)月以 上，保質(zhì)期內(nèi)活菌數(shù)穩(wěn)定。
[0032] 4、復(fù)合益生菌劑在保育仔豬上的應(yīng)用效果
[0033] 選擇自繁自養(yǎng)同批的杜X長(zhǎng)X大三元雜交斷奶仔豬90頭。依據(jù)胎次、體重、公 母比例相同或相似的原則，將小豬分為A、B、C3個(gè)組，其中A組為對(duì)照組，B試驗(yàn)組1，C組 為試驗(yàn)組2,每組設(shè)2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15頭，隨機(jī)分組，分頭編號(hào)；各組基礎(chǔ)日糧相同（正 大全價(jià)料），營(yíng)養(yǎng)水平一致。A組不添加任何酶制劑，B組基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加含有短小 芽孢桿菌的復(fù)合微生態(tài)制劑（實(shí)施例1)，C組同B組、但不含有短小芽孢桿菌；微生態(tài)制劑 用量為的用量為L(zhǎng)Og/頭?天。仔豬21日齡，平均體重6. 5kg斷奶，預(yù)實(shí)驗(yàn)7天，飼養(yǎng)試驗(yàn) 30天。飼養(yǎng)地點(diǎn)南京某養(yǎng)殖合作社。
[0034] 試驗(yàn)結(jié)果如表2~4所示。
[0035] 表2試驗(yàn)豬只增重和試驗(yàn)期內(nèi)平均日增重
[0036]
[0037] 表3飼喂加酶益生素試驗(yàn)各組飼料報(bào)酬情況
[0038]
[0039] 表4飼喂加酶益生素試驗(yàn)各組仔豬腹瀉的頻率
[0040]
[0041] 仔豬發(fā)生拉稀現(xiàn)象后，按每頭豬5g的份量使用微生態(tài)制劑產(chǎn)品進(jìn)行治療。產(chǎn)品用 冷開(kāi)水IOmL攪拌后，抽入注射器，并用注射器沿仔豬口角灌服。微生態(tài)制劑產(chǎn)品中含有短 小芽孢桿菌時(shí)，仔豬4-6hr后精神好轉(zhuǎn)，24hr內(nèi)拉稀終止，恢復(fù)食欲。微生態(tài)制劑產(chǎn)品中不 含有短小芽孢桿菌時(shí)，仔豬12hr后精神好轉(zhuǎn)；鞏固治療一次，2天左右拉稀終止，恢復(fù)食欲。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus)ZS008,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保 藏編號(hào)為CCTCC NO. M2015451，保藏日期為2015年7月13日。2. -種保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑，其特征在于由以下菌種組合配制成為復(fù) 合菌劑：短小芽孢桿菌CCTCC N0.M2015451、凝結(jié)芽孢桿菌CCTCC NO. M2015273、枯草芽孢桿 菌 CCTCC NO. M 2011443、地衣芽孢桿菌 CCTCC NO. M 2012458。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑，其特征在于所述復(fù)合 微生態(tài)芽孢桿菌制劑的有效活菌數(shù)為I. 4X 108-7. OX 101(lcfu/g，各菌種的組成成分如下： 菌種 每克產(chǎn)品對(duì)應(yīng)菌種活菌數(shù)（CfU) 短小朵孢桿藺 CCTCC No. M2015451 0.4χ 10x-2.〇x IO10 凝結(jié)芽孢桿菌 CCTCC No. Μ2015273 0.4χ108-2.〇χ1010 枯草芽孢桿菌 CCTCC No. M 2011443 0.4χ108-2.〇χ1010 地衣芽孢桿菌 CCTCC No. M 2012458 0.2χ108-1.〇χ1010"4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑，其特征在于所述凝結(jié) 芽孢桿菌為凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans)ZS007,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心， 保藏編號(hào)為 CCTCC Ν0:Μ 2015273。5. 權(quán)利要求2所述的保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑的應(yīng)用，其特征在于提升保 育仔豬的生產(chǎn)性能。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑的應(yīng)用，其特征在于所 述復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑的使用量為1. 〇~5. Og/頭?天。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一株短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)ZS008，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO.M2015451，保藏日期為2015年7月13日；本發(fā)明還提供了一種保育仔豬用復(fù)合微生態(tài)芽孢桿菌制劑，由以下菌種組合配制成為復(fù)合菌劑：短小芽孢桿菌CCTCC No.M2015451、凝結(jié)芽孢桿菌CCTCC No.M2015273、枯草芽孢桿菌CCTCC No.M 2011443、地衣芽孢桿菌CCTCC No.M 2012458。本發(fā)明既能快速解決仔豬拉稀、下痢等問(wèn)題，又能在長(zhǎng)期使用過(guò)程中提升保育仔豬的健康水平。CCTCC NO. M201545120150713
【IPC分類】C12R1/07, C12N1/20, A23K1/16
【公開(kāi)號(hào)】CN104974967
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510436127
【發(fā)明人】張梁, 張君勝
【申請(qǐng)人】江南大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年10月14日
【申請(qǐng)日】2015年7月22日