一種黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，屬于黃酒釀造的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 米曲不僅是黃酒釀造中的糖化劑，小部分發(fā)酵劑，同時(shí)還賦予黃酒獨(dú)特的風(fēng)味。由 于米曲在黃酒釀造中占有極其重要的地位，其質(zhì)量的優(yōu)劣，直接影響到黃酒的質(zhì)量和產(chǎn)量， 因此被形象地喻為"酒之骨"。因此，測定米曲的蛋白酶活力是十分必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對現(xiàn)有技術(shù)的上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種黃酒米曲的蛋白酶活力 測定方法，準(zhǔn)確測定黃酒米曲的蛋白酶活力，為釀造優(yōu)質(zhì)的黃酒奠定了基礎(chǔ)。
[0004] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，包括W下步驟： (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；0.Ig/L標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液稀釋，從各稀釋液中吸取ImL于另外的試 管中，準(zhǔn)確加入5mL0. 4mol/LNa2C〇3溶液，ImL福林試劑稀釋液，于40°C恒溫水浴顯色20分 鐘，然后在680nm波長下測定各管吸光度； (2 )繪制酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線，線性表達(dá)式為y=0. 0099X-0. 0022，R2=0. 9999,X為酪氨酸濃度，單位為ug/mL，y為吸光度； (3)測定蛋白酶活力： a、 樣品前處理：吸取米曲浸出液5mU蒸饋水稀釋2倍，分別吸取ImL稀釋酶液于3支 離屯、管中，40°C恒溫水浴鍋中水浴預(yù)熱5分鐘，保溫比，每15min攬拌一次，用干濾紙或脫脂 棉過濾，去除濾液，用抑=3的緩沖液進(jìn)行稀釋，W使吸光度的值在0. 2-0. 4之間為宜； b、 酪蛋白的水解：先將適量的2%酪素液和制備好的酶液放入40 + 0. 2°C的恒溫水浴鍋 中保溫3-55min，然后吸入2份保溫后的酶液1. 0血，各加入保溫后的酪素液1. 0血，搖勻， 40 + 0. 2°C恒溫水浴中水解15min，加入0.Amol/LCClsCOOH液2. 0血，搖勻，使蛋白質(zhì)沉淀， 終止酶水解反應(yīng)，并過濾備用； C、空白管中加入0.4mol/LS氯醋酸2mL，2%酪素溶液ImL，樣品管中加入2%酪素溶 液山以在40°C水浴中水解10分鐘后，樣品管中各加入S氯醋酸2mU搖勻，停止酶作用； 4000巧m離屯、5分鐘后，分別吸取ImL上清液于S只試管中，各加入0. 4mol/LNasCOs溶液 5血W及福林試劑ImL，于40°C水浴顯色20分鐘，在680皿波長下測定吸光度； 所述吸光度的計(jì)算公式為；蛋白酶活力；Ig絕干曲在40°C每分鐘分解酪蛋白為酪氨酸 的微克數(shù)， 酶活=(1/K)XAe8〇XVX4Xn/(wX10) K;標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率Aew;680nm波長下的吸光度 V冰曲浸出液的體積，單位為血 4 ;反應(yīng)液體積，單位為mL n;稀釋倍數(shù) W;絕干曲質(zhì)量，單位為g10 ;酶反應(yīng)時(shí)間，單位為min。
[0005] 本發(fā)明的有益效果如下： 本發(fā)明黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，能夠準(zhǔn)確、有效地測定黃酒米曲的蛋白酶活 力，為釀造優(yōu)質(zhì)的黃酒奠定了基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0006] 圖1為酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0007] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于 此。
[000引本發(fā)明黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，包括W下步驟： (1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；0.Ig/L標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液按下表1稀釋，從各稀釋液中吸取ImL于 另外的試管中，準(zhǔn)確加入5mL0. 4mol/LNa2C03溶液，ImL福林試劑稀釋液，于40°C恒溫水浴顯 色20分鐘，然后在680nm波長下測定各管吸光度；
(2) 繪制如圖1所示的酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線，線性表達(dá)式為 y=0. 0099X-0. 0022,R2=0. 9999,X為酪氨酸濃度，單位為ug/mL，y為吸光度； (3) 測定蛋白酶活力： a、 樣品前處理：吸取米曲浸出液5mU蒸饋水稀釋2倍，分別吸取ImL稀釋酶液于3支 離屯、管中，40°C恒溫水浴鍋中水浴預(yù)熱5分鐘，保溫比，每15min攬拌一次，用干濾紙或脫脂 棉過濾，去除濾液，用抑=3的緩沖液進(jìn)行稀釋，W使吸光度的值在0. 2-0. 4之間為宜； b、 酪蛋白的水解：先將適量的2%酪素液和制備好的酶液放入40 + 0. 2°C的恒溫水浴鍋 中保溫3-55min，然后吸入2份保溫后的酶液1. 0血，各加入保溫后的酪素液1. 0血，搖勻， 40 + 0. 2°C恒溫水浴中水解15min，加入0.Amol/LCClsCOOH液2.OmL，搖勻，使蛋白質(zhì)沉淀， 終止酶水解反應(yīng)，并過濾備用； C、空白管中加入0.4mol/LS氯醋酸2血，2%酪素溶液1血，樣品管中加入2%酪素溶 液ImU在40°C水浴中水解10分鐘后，樣品管中各加入S氯醋酸2mU搖勻，停止酶作用； 4000巧m離屯、5分鐘后，分別吸取ImL上清液于S只試管中，各加入0. 4mol/LNasCOs溶液 5血W及福林試劑1血，于40°C水浴顯色20分鐘，在680皿波長下測定吸光度； 所述吸光度的計(jì)算公式為；蛋白酶活力；Ig絕干曲在40°C每分鐘分解酪蛋白為酪氨酸 的微克數(shù)， 酶活=(1/K)XAe80XVX4Xn/(wX10) K;標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率Ae8c;680nm波長下的吸光度 V冰曲浸出液的體積，單位為mL 4 ;反應(yīng)液體積，單位為mL n;稀釋倍數(shù) W;絕干曲質(zhì)量，單位為g10 ;酶反應(yīng)時(shí)間，單位為min。
[0009] 本發(fā)明黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，能夠準(zhǔn)確、有效地測定黃酒米曲的蛋白 酶活力，為釀造優(yōu)質(zhì)的黃酒奠定了基礎(chǔ)。
[0010] 上述實(shí)施例僅用于解釋說明本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思，而非對本發(fā)明權(quán)利保護(hù)的限定， 凡利用此構(gòu)思對本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，其特征在于包括以下步驟： (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：0. lg/L標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液稀釋，從各稀釋液中吸取ImL于另外的試 管中，準(zhǔn)確加入5mL0. 4mol/LNa2C03溶液，ImL福林試劑稀釋液，于40°C恒溫水浴顯色20分 鐘，然后在680nm波長下測定各管吸光度； (2 )繪制酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線，線性表達(dá)式為y=0. 0099X-0. 0022， R2=O. 9999, X為酪氨酸濃度，單位為ug/mL，y為吸光度； (3)測定蛋白酶活力： a、 樣品前處理：吸取米曲浸出液5mL，蒸餾水稀釋2倍，分別吸取ImL稀釋酶液于3支 離心管中，40°C恒溫水浴鍋中水浴預(yù)熱5分鐘，保溫lh，每15min攪拌一次，用干濾紙或脫脂 棉過濾，去除濾液，用pH=3的緩沖液進(jìn)行稀釋，以使吸光度的值在0. 2-0. 4之間為宜； b、 酪蛋白的水解：先將適量的2%酪素液和制備好的酶液放入40±0. 2°C的恒溫水浴鍋 中保溫3-55min，然后吸入2份保溫后的酶液1.0 mL，各加入保溫后的酪素液1.0 mL，搖勻， 40±0. 2°C恒溫水浴中水解15min，加入0. 4mol/LCCl3C00H液2. OmL，搖勻，使蛋白質(zhì)沉淀， 終止酶水解反應(yīng)，并過濾備用； c、 空白管中加入0. 4mol/L三氯醋酸2mL，2%酪素溶液lmL，樣品管中加入2%酪素溶 液lmL，在40°C水浴中水解10分鐘后，樣品管中各加入三氯醋酸2mL，搖勻，停止酶作用； 4000rpm離心5分鐘后，分別吸取ImL上清液于三只試管中，各加入0. 4mol/L Na2C03溶液 5mL以及福林試劑lmL，于40°C水浴顯色20分鐘，在680nm波長下測定吸光度； 所述吸光度的計(jì)算公式為：蛋白酶活力：Ig絕干曲在40°C每分鐘分解酪蛋白為酪氨酸 的微克數(shù)， 酶活=(IA) XA68tlXVXdXnAwX 10) K :標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率 A68(l:680nm波長下的吸光度 V :米曲浸出液的體積，單位為mL 4 :反應(yīng)液體積，單位為mL n :稀釋倍數(shù) w :絕干曲質(zhì)量，單位為g 10:酶反應(yīng)時(shí)間，單位為min。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，包括以下步驟：（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；（2）繪制酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線；（3）測定蛋白酶活力：吸取米曲浸出液，蒸餾水稀釋2倍，分別吸取稀釋酶液于離心管中，水浴預(yù)熱，空白管中加入三氯醋酸，酪素溶液，樣品管中加入酪素溶液，水浴中水解，樣品管中各加入三氯醋酸，搖勻，停止酶作用；離心后吸取上清液于三只試管中，加入Na2C03溶液以及福林試劑，水浴顯色，測定吸光度。本發(fā)明黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，能夠準(zhǔn)確、有效地測定黃酒米曲的蛋白酶活力，為釀造優(yōu)質(zhì)的黃酒奠定了基礎(chǔ)。
【IPC分類】C12Q1/37
【公開號】CN104988210
【申請?zhí)枴緾N201510354151
【發(fā)明人】張?zhí)K敏, 張新華, 何紹木, 魯志康
【申請人】紹興文理學(xué)院
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年6月25日