一種防治黃瓜霜霉病的菌株tdjn1及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)作物防治技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種防治黃瓜霜霉病的菌株TDJN1及 其應(yīng)用，專用于黃瓜霜霉病的有機(jī)綠色防治。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃瓜霜霉病是由古己假霜霉菌[Pseudoperonosporacubensis]引起的一種氣傳 病害，是世界黃瓜生產(chǎn)區(qū)的重要葉部病害之一，也是保護(hù)地黃瓜上的一種毀滅性病害，有70 多個(gè)國家先后發(fā)生過運(yùn)種病害。近年來，隨著保護(hù)地黃瓜種植面積的不斷增加，黃瓜霜霉 病的危害逐年加重，現(xiàn)已成為制約溫室大棚黃瓜產(chǎn)量的重要因子。
[0003] 目前，防治黃瓜霜霉病主要依靠選育抗性品種，其次是選用化學(xué)藥劑防治，如百菌 清、乙憐侶、甲霜靈、代森儘鋒、霜霉威?甲霜靈等；但是，抗病育種工作周期長，化學(xué)農(nóng)藥的 反復(fù)使用易產(chǎn)生抗藥性且污染環(huán)境。該病害一旦流行，使用化學(xué)藥劑的間隔期會(huì)縮短至3-4 天，農(nóng)藥殘留問題異常突出。因此，利用生物防治策略防治黃瓜霜霉病日益受到關(guān)注，生物 防治策略成為運(yùn)種病害防治研究的新方向。
[0004] 近幾年，用于防治黃瓜霜霉病的生防產(chǎn)品也日益興盛，主要有：植物提取物、微生 物類、生物蛋白類、揮發(fā)性有機(jī)物等，它們的生防機(jī)理主要是通過競爭、抗生及誘導(dǎo)抗病性 等方面進(jìn)行病害的防治；已有大量研究報(bào)道了將生防菌引入植物可提高植物的抗病、抗逆 性。由于生防菌在抑制植物病害方面的廣譜性、高效性W及安全性，目前成為農(nóng)藥市場發(fā)展 的趨勢，被稱為是最有潛力的發(fā)展方向。 陽〇化]因?yàn)槠駷橹股腥狈硐氲母呖关S產(chǎn)產(chǎn)品種和有效藥劑，且化學(xué)防治對(duì)環(huán)境污染 的問題日益突出，所W在注重發(fā)展無公害生產(chǎn)技術(shù)的今天，生物防治作為防治黃瓜霜霉病 的一種新思路，將得到進(jìn)一步的重視與發(fā)展。因此，開發(fā)新的、更為高效和安全的微生物制 劑控制黃瓜霜霉病的發(fā)生是提高社會(huì)生產(chǎn)總量的需要，同時(shí)更是農(nóng)業(yè)安全及可持續(xù)發(fā)展的 需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明目的：針對(duì)黃瓜霜霉病沒有較高防效的生防菌株制劑現(xiàn)狀，本發(fā)明的第一個(gè) 目的是提供開發(fā)一種防治黃瓜霜霉病的單一菌株。
[0007] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供防治黃瓜霜霉病的菌株TDJN1在防治溫室黃瓜霜霉 病方面的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明的第=個(gè)目的是提供生防菌劑，專用于防治黃瓜霜霉病，菌株的防效高，并 且有較好的增產(chǎn)功能。
[0009] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供上述生防菌劑的制備方法。
[0010] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供上述的生防菌劑在防治黃瓜霜霉病方面的應(yīng)用。
[0011] 技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種防治黃瓜 霜霉病的菌株TDJN1，其分類命名為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia)， 該菌株已于2015年5月19號(hào)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、，地 址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101，保藏編號(hào) 為CGMCCNo. 10827。
[0012] 上述的防治黃瓜霜霉病的菌株TDJN1在防治溫室黃瓜霜霉病方面的應(yīng)用。
[0013] 一種生防菌劑，上述的生防菌劑是由防治黃瓜霜霉病的菌株TDJN1制備而成。
[0014] 上述的生防菌劑的制備方法，包括W下步驟：將菌株TDJN1在LB平板上劃線，28°C 生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14-1化，待長出單菌落后，挑取單菌落接入含有5mL的LB培養(yǎng)液的試管 中，置于28°C、2(K)r/min的搖床中培養(yǎng)，制成種子液；W1%的接種量將種子液接種于裝有 500血的LB培養(yǎng)液的S角瓶里，置于28°C、200r/min的搖床中培養(yǎng)48h，待菌液濃度達(dá)到 l〇9CFU/mL時(shí)稀釋待用，即為所制備的TDJN1生防菌劑。
[0015] 上述的生防菌劑在防治黃瓜霜霉病方面的應(yīng)用。
[0016] 其應(yīng)用方法為，菌株制劑在作物移栽前噴霧使用，也可W做成堆肥使用，或稀釋后 在移栽時(shí)灌根使用。
[0017] 有益效果：本發(fā)明與現(xiàn)有黃瓜霜霉病防治技術(shù)相比，其優(yōu)點(diǎn)和積極效果表現(xiàn)在： 本發(fā)明是?？卺槍?duì)黃瓜霜霉病開發(fā)的生防菌株，因而在防治黃瓜霜霉病方面與目前其他廣 譜生物殺菌劑相比防治效果顯著提高。由于是生防微生物制劑，完全沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使 用而帶來一系列問題，因而有利于作物的無公害生產(chǎn)，農(nóng)民可W不用或減少其他防治黃瓜 霜霉病化學(xué)農(nóng)藥的用量，運(yùn)不僅可為農(nóng)民節(jié)省開支，而且有利于作物的出口。同時(shí)，生防菌 株制劑還有增產(chǎn)功能，可為農(nóng)民增加收入。
[0018]TDJN1菌株制劑可W在溫室移栽前，噴在肥料中或葉片上，然后隨肥料在整地過程 中埋到上里，也可W在栽苗時(shí)灌根使用。栽苗后，菌株通過多種生防機(jī)制起作用，從而達(dá)到 防治黃瓜霜霉病的效果。試驗(yàn)表明，在溫室中使用TDJN1菌株制劑對(duì)黃瓜霜霉病有一定程 度的防治效果，溫室防效達(dá)到69. 04%，田間防效達(dá)到42. 38%，TDJN1菌株制劑可W提高 黃瓜維生素C、可溶性蛋白、可溶性糖等的含量，還有一定程度的增產(chǎn)效果，其增產(chǎn)效果達(dá)到 34. 73%。
【附圖說明】
[0019] 圖1為大田試驗(yàn)中生防菌劑TDJN1在播種55天后對(duì)黃瓜霜霉病的防治效果；
[0020] 注：左一CK，右一TDJN1。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可W做出若干變型和改進(jìn)，運(yùn)些也應(yīng)視為屬于 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0022] 實(shí)施例1菌株的篩選與鑒定
[0023] 于2012年11月，在江蘇省太倉市溫室大棚發(fā)病嚴(yán)重的地塊采集樣品。采用五點(diǎn) 采樣法，每點(diǎn)間隔至少10m。每點(diǎn)=株健康植株與發(fā)病重的植株連同根圍±-并收集。采集 后的樣品迅速裝入寫好編號(hào)的塑料袋中帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離。 陽024] 菌株TDJN1是從發(fā)病的植株莖內(nèi)分離得到。其分離方法為：分別剪去根莖葉各3g， 用1 %的次氯酸鋼1血浸5min，70%酒精浸2min，無菌水清洗3次。（取最后一次清洗的溶 液0.1血涂R2A平板，或取0. 1血最后一次清洗液加入R2A培養(yǎng)液，30°C振蕩培養(yǎng)，若48h 后無菌生長則認(rèn)為表面消毒干凈）。用滅菌的研林分別研碎表面消毒好的根莖葉，加3mL無 菌水，無菌棉布過濾，用無菌水稀釋10倍，取0.ImL涂LB平板，每個(gè)點(diǎn)重復(fù)3次，28°C培養(yǎng) 48h，計(jì)數(shù)，挑取平板上所有的菌落分離純化，-70°C、40%甘油保存?zhèn)溆谩?陽0巧]通過形態(tài)特征，生理生化實(shí)驗(yàn)和leSrDNA基因序列分析對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定。
[0026] leSrDNA基因擴(kuò)增和序列分析： W27] 菌株TDJN1在RzA培養(yǎng)基中28 °C培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，W12000r/min離屯、5min收集菌體，采用上海賽百盛基因技術(shù)有限公司的基因組DM快速提取試劑盒，提 取細(xì)菌的基因組DNA，W提取的DNA產(chǎn)物為模板，用細(xì)菌leSrDNA基因擴(kuò)增通用 引物U8-27 (5, -AGAGTTTGATC(AC)TGGCTCAG-3,）、11494-1514(5, -CTACGG(AG) TACCTTGTTACGAC-3,）
[0028] 從基因組DM中擴(kuò)增出16SrDNA基因片段。PCR產(chǎn)物送上海生工生物工程有限公 司進(jìn)行測序。通過BLAST軟件對(duì)測定16SrDNA基因序列進(jìn)行同源性比較，結(jié)果將該菌株鑒 定為寡養(yǎng)單胞菌屬（Stenotrophomonassp.)。
[0029] 將該菌株TDJN1保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、，保藏編 號(hào)為CGMCCNo. 10827。
[0030] 實(shí)施例2:生防菌劑的制備
[0031] 將菌株TDJN1在LB平板上劃線，28°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14-1化，待長出單菌落后， 挑取單菌落接入含有5mL的LB培養(yǎng)液的試管中，置于28°C、200r/min的搖床中培養(yǎng)，制成 種子液；W1%的接種量將種子液接種于裝有50