一種硝化細菌的半固體培菌方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及硝化細菌的半固體培菌方法。
【背景技術(shù)】
[0002]由于過度使用氮肥和高密度養(yǎng)殖，我國各種水體氮污染問題愈來愈嚴(yán)重，氨氮和亞硝酸鹽氮是導(dǎo)致魚、蝦、蟹等各種水生動物致病的直接或間接因素；硝化細菌對水體中氨和亞硝酸鹽具有較強的去除能力，在污水處理、水產(chǎn)養(yǎng)殖、觀賞魚行業(yè)中的應(yīng)用越來越廣泛。
[0003]但因為硝化細菌是自養(yǎng)型細菌，生長和繁殖極其緩慢，生產(chǎn)周期長，穩(wěn)定性差，生產(chǎn)效率低下，生產(chǎn)成本高，價格昂貴，制約了其使用，現(xiàn)在市場上的產(chǎn)品主要是幾家美國公司生產(chǎn)的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生產(chǎn)成本低、穩(wěn)定性高的硝化細菌的半固體培菌方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種硝化細菌的半固體培菌方法，包括以下步驟:
[0006]步驟一、將純化后的氨氧化菌和亞硝酸鹽氧化菌分別接種到已滅菌的裝有對應(yīng)培養(yǎng)液的三角瓶中，搖床保溫培養(yǎng)12天，期間溫度維持在28°C?30°C之間；
[0007]步驟二、將上述菌種分別接種到各自的種子罐內(nèi)，充氣攪拌培養(yǎng)12天，期間溫度維持在28°C?30°C之間；
[0008]步驟三、將上述菌種以百分之一的比例分別與各自的培養(yǎng)液混合，再分別和載體按1: 3的比例混合成半固體，裝入容器中上培養(yǎng)室鐵架上保溫保濕培養(yǎng)20天，期間溫度維持在28°C?30°C之間，濕度維持在95%以上，每隔5天翻料一次；
[0009]步驟四、室內(nèi)加溫至35°C?40°C并用排風(fēng)扇吹干容器中半固體中的水分，最后進行粉碎；
[0010]步驟五、將兩類菌的半成品按1:1的比例混合均勾，制得成品。
[0011]氨氧化菌的培養(yǎng)液主要組分及重量為=(NH4)2SO4 0.5g、NaCl0.3g、FeSO4.7H20
0.03g、K2HPO4 lg、MgSO4.7H20 0.3g、CaCl2 7.5g、蒸餾水 100mL0
[0012]亞硝酸鹽氧化菌的培養(yǎng)液主要組分及重量為:(NaNO2 lg、MgSO4.7H20 0.03g、MnSO4.4H20 0.0lg、K2HPO4 0.75g、Na2CO3 lg、NaH2PO4 0.25g、蒸餾水 100mL0
[0013]所述的載體由沸石粉土或膨潤土原礦經(jīng)300°C?500°C高溫烘焙干燥粉碎而成。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明簡單易行，生產(chǎn)成本低、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、制得的成品含菌量尚達2億每克以上，易于保減和運輸。
[0015]以高溫烘焙過的沸石粉或膨潤土作載體進行自養(yǎng)型細菌的培養(yǎng)生產(chǎn)還具備如下優(yōu)點:
[0016](I)沒有有機物，排除了異養(yǎng)菌的干擾，從而使硝化細菌獲得了穩(wěn)定的生長繁殖介質(zhì)；
[0017](2)載體是很好的緩沖劑，能吸附生長繁殖期間不斷產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，很大程度上排除了其對自身生長繁殖的抑制作用；
[0018](3)半固體培養(yǎng)既保證了水分又能確保氧氣的供給；
[0019](4)能提供部分的礦物營養(yǎng)；
[0020](5)使菌體能著床生長從而大大促進了硝化細菌的生長繁殖。
【具體實施方式】
[0021]下面通過實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步具體的說明。
[0022]本發(fā)明中的硝化細菌實質(zhì)上是由氨氧化菌和亞硝酸鹽氧化菌兩類菌組成，氨氧化菌的培養(yǎng)液主要組分及重量為:(藥品用分析純)(NH4)2SO4 0.5g、NaCl 0.3g、FeSO4.7H20
0.03g、K2HPO4 lg、MgSO4.7H200.3g、CaCl2 7.5g、蒸餾水 lOOOmL，亞硝酸鹽氧化菌的培養(yǎng)液主要組分及重量為:(藥品用分析純)NaNO2 lg、MgSO4.7H20 0.03g、MnSO4.4Η200.0lg、K2HPO4 0.75g、Na2C03(無水)lg、NaH2P04 0.25g、蒸餾水lOOOmL，載體由沸石粉土或膨潤土原礦經(jīng)300°C?500°C高溫烘焙干燥粉碎而成。
[0023]培養(yǎng)時，分別將純化的氨氧化菌和亞硝酸鹽氧化菌從試管斜面種接種到已滅好菌的裝有對應(yīng)培養(yǎng)液的三角瓶中，搖床培養(yǎng)，28°C?30°C保溫培養(yǎng)12天，鏡檢合格后分別接種到種子罐中，28°C?30°C充氣攪拌培養(yǎng)12天，鏡檢合格后備用。
[0024]將上述菌種以百分之一的比例分別與各自的培養(yǎng)液混合，再分別和載體按1: 3的比例混合成半固體，裝入洗干凈的塑料淺盒中，上培養(yǎng)室鐵架上保溫保濕培養(yǎng)，期間溫度維持在28°C?30°C之間，濕度維持在95%以上，每隔5天翻料一次；培養(yǎng)20天后室內(nèi)加溫至35°C到40°C，用排風(fēng)扇吹干至能粉碎即可，期間需翻動數(shù)次，然后粉碎；用平板法檢測菌數(shù)，合格后將兩類菌的半成品按1:1的比例混合均勻即可包裝入庫。
【主權(quán)項】
1.一種硝化細菌的半固體培菌方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、將純化后的氨氧化菌和亞硝酸鹽氧化菌分別接種到已滅菌的裝有對應(yīng)培養(yǎng)液的三角瓶中，搖床保溫培養(yǎng)12天，期間溫度維持在28°C?30°C之間； 步驟二、將上述菌種分別接種到各自的種子罐內(nèi)，充氣攪拌培養(yǎng)12天，期間溫度維持在28°C?30°C之間； 步驟三、將上述菌種以百分之一的比例分別與各自的培養(yǎng)液混合，再分別和載體按I: 3的比例混合成半固體，裝入容器中上培養(yǎng)室鐵架上保溫保濕培養(yǎng)20天，期間溫度維持在28°C?30°C之間，濕度維持在95%以上，每隔5天翻料一次； 步驟四、室內(nèi)加溫至35°C?40°C并用排風(fēng)扇吹干容器中半固體中的水分，最后進行粉碎； 步驟五、將兩類菌的半成品按1:1的比例混合均勻，制得成品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種硝化細菌的半固體培菌方法，其特征在于，氨氧化菌的培養(yǎng)液主要組分及重量為:(NH4)2SO4 0.5g、NaCl 0.3g、FeSO4.7H20 0.03g、K2HPO4 lg、MgSO4.7H20 0.3g、CaCl2 7.5g、蒸餾水 100mL03.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種硝化細菌的半固體培菌方法，其特征在于，亞硝酸鹽氧化菌的培養(yǎng)液主要組分及重量為=NaNO2 lg、MgSO4.7H20 0.03g、MnSO4.4H20 0.0lg、K2HPO40.75g、Na2CO3 lg、NaH2PO4 0.25g、蒸餾水 100mL04.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種硝化細菌的半固體培菌方法，其特征在于:所述的載體由沸石粉土或膨潤土原礦經(jīng)300°C?500°C高溫烘焙干燥粉碎而成。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種硝化細菌的半固體培菌方法，包括以下步驟：步驟一、將純化后的氨氧化菌和亞硝酸鹽氧化菌分別接種到三角瓶中并搖床保溫培養(yǎng)12天；步驟二、將上述菌種分別接種到各自的種子罐內(nèi)充氣攪拌培養(yǎng)12天；步驟三、將上述菌種以百分之一的比例與各自的培養(yǎng)液混合，再和載體按1∶3的比例混合成半固體裝入容器保溫保濕培養(yǎng)20天；步驟四、升溫并用排風(fēng)扇吹干容器中半固體中的水分，進行粉碎；步驟五、將兩類菌的半成品按1∶1的比例混合均勻，制得成品，本發(fā)明簡單易行，生產(chǎn)成本低、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、制得的成品含菌量高達2億每克以上，易于保藏和運輸。
【IPC分類】C12R1/01, C12N1/20
【公開號】CN105002119
【申請?zhí)枴緾N201510502004
【發(fā)明人】徐桃龍, 謝維宣
【申請人】海南卓越生物有限公司
【公開日】2015年10月28日
【申請日】2015年8月17日