氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株用于重組產(chǎn)生多肽的用圖
【專利說明】氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株用于重組產(chǎn)生多化的用 途
[0001] 本發(fā)明是重組多膚產(chǎn)生的領(lǐng)域。本文更精確地報(bào)道了使用營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核 菌株在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中重組產(chǎn)生非糖基化多膚的方法。
[0002] 發(fā)巧背景
[0003] 近年來，治療性多膚的生產(chǎn)穩(wěn)步增加并且很可能的是在不久的將來治療性多膚將 成為可用于治療多種疾病的最大治療組。治療性多膚的影響來自其特異性，如特定的祀標(biāo) 識(shí)別和/或結(jié)合功能。
[0004] 細(xì)胞培養(yǎng)用于發(fā)酵過程中W產(chǎn)生物質(zhì)，特別是多膚。在其中細(xì)胞培養(yǎng)物未被遺傳 修飾并且形成其自身的代謝產(chǎn)物的過程與其中生物W它們產(chǎn)生更大量的其自身物質(zhì)如多 膚或產(chǎn)生外源物質(zhì)的運(yùn)種方式被遺傳修飾的過程之間進(jìn)行區(qū)分。利用保證生物存活并使得 能夠產(chǎn)生想要的祀標(biāo)化合物的營養(yǎng)培養(yǎng)基供應(yīng)產(chǎn)生物質(zhì)的生物。許多培養(yǎng)基因使得能夠最 優(yōu)培養(yǎng)特定宿主的運(yùn)些目的而聞名。
[0005] 化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基在培養(yǎng)重組細(xì)胞中用于重組產(chǎn)生治療性多膚中 的使用是有利的。其使得能夠?yàn)樗a(chǎn)生的治療性多膚容易地開發(fā)下游加工和純化，由于最 小化的原材料差異提供最穩(wěn)健的生產(chǎn)過程并降低產(chǎn)品成本。
[0006] 化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基不包含游離氨基酸，并且其需要使用原養(yǎng)型的細(xì) 胞系，其具有完整的代謝途徑W從化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基的可用成分產(chǎn)生所需的 氨基酸。
[0007] 例如，當(dāng)大腸桿菌巧.coli)用作宿主細(xì)胞系時(shí)，一般使用野生型菌株，如MG1655、 W3110或化21。運(yùn)些菌株顯示良好的生長特性，但是較次等的產(chǎn)品效價(jià)。
[0008] 當(dāng)與野生型菌株相比時(shí)，通過非定點(diǎn)誘變和選擇已獲得的突變體原核菌株在其基 因組DNA中顯示明顯差異。已經(jīng)基于可W獲得的最大產(chǎn)物效價(jià)選擇了突變株。因?yàn)橥蛔冎?攜帶許多營養(yǎng)缺陷型，所W它們不能用于在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)。突變 株需要氨基酸的補(bǔ)料W補(bǔ)償其營養(yǎng)缺陷型，導(dǎo)致增加的培養(yǎng)成本。
[0009] US5, 932, 439報(bào)道了大腸桿菌巧scherichiacoli)K-12菌株用于產(chǎn)生重組蛋白 質(zhì)。
[0010] 發(fā)巧概沐
[0011] 通過恢復(fù)營養(yǎng)缺陷型原核菌株其一種或多種營養(yǎng)缺陷型，所述營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的 菌株可W在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基上生長，其中不再需要向所述化學(xué)成分明確的 基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中加入對(duì)應(yīng)于已經(jīng)恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的物質(zhì)。在昂貴物質(zhì)的情況下，可W 實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品成本的降低并且可W更經(jīng)濟(jì)地產(chǎn)生重組多膚。
[0012] 除了在缺少對(duì)應(yīng)于已經(jīng)恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的物質(zhì)的情況下恢復(fù)在化學(xué)成分明確 的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基上生長的能力外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與未恢復(fù)的菌株相比，可W維持或甚至增加 可獲得的產(chǎn)物效價(jià)。此外已經(jīng)發(fā)現(xiàn)使用營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株可獲得的產(chǎn)物效價(jià)高于 利用對(duì)應(yīng)的原養(yǎng)型野生型菌株可獲得的產(chǎn)物效價(jià)。
[0013] 不希望受該理論束縛，當(dāng)與對(duì)應(yīng)的原養(yǎng)型野生型菌株（其中未曾進(jìn)行該缺失和恢 復(fù)）相比時(shí)，假定本文報(bào)道的氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株具有不同的代謝和代謝 流。因此，原核菌株內(nèi)某些酶的失活和再激活對(duì)菌株的完整代謝具有可檢測(cè)的/顯著的影 響，其例如可W在與對(duì)應(yīng)的原養(yǎng)型野生型菌株相比該菌株的增加的生產(chǎn)力中看到。
[0014] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株，其特征在于
[0015] -已經(jīng)恢復(fù)了必需氨基酸代謝途徑中的至少一種缺陷，和
[0016] -菌株可W在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中生長，所述化學(xué)成分明確的基礎(chǔ) 生長培養(yǎng)基不含對(duì)應(yīng)于已經(jīng)在營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株中恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的氨基酸。
[0017] 在一個(gè)實(shí)施方案中，營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株是營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的大腸桿菌菌 株。
[0018] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株，其特征在于
[0019] -已經(jīng)恢復(fù)了必需氨基酸代謝途徑中的至少一種缺陷，和
[0020] -細(xì)胞可W在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中生長，所述化學(xué)成分明確的基礎(chǔ) 生長培養(yǎng)基不含對(duì)應(yīng)于已經(jīng)在營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞中恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的氨基酸。
[0021] 在一個(gè)實(shí)施方案中，營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞是營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的大腸桿菌細(xì) 胞。
[0022] 本文報(bào)道的營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株/細(xì)胞可W用于重組產(chǎn)生治療性多膚的 方法中，其中與非營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株/細(xì)胞相比，不需要補(bǔ)充至少一種氨基酸殘 基。
[0023] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是用于在（重組）原核細(xì)胞中產(chǎn)生多膚的方法，其包括W下 步驟：
[0024] -在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)（重組）原核細(xì)胞從原核細(xì)胞或原核 細(xì)胞的細(xì)胞周質(zhì)或從培養(yǎng)基中回收多膚，所述（重組）原核細(xì)胞已經(jīng)通過將恢復(fù)親本原核 細(xì)胞的氨基酸營養(yǎng)缺陷型的核酸引入到親本原核細(xì)胞的基因組中而被獲得，所述（重組） 原核細(xì)胞包含編碼多膚的一種或多種核酸。
[00巧]本文報(bào)道的一個(gè)方面是用于在（重組）原核細(xì)胞中產(chǎn)生多膚的方法，其包括W下 步驟：
[0026] -恢復(fù)對(duì)至少一種氨基酸營養(yǎng)缺陷的原核細(xì)胞的至少一種氨基酸營養(yǎng)缺陷型，
[0027] -在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的（重組）原 核細(xì)胞，，并從原核細(xì)胞或原核細(xì)胞的細(xì)胞周質(zhì)或從培養(yǎng)基中回收多膚，所述（重組）原核 細(xì)胞包含編碼多膚的一種或多種核酸。
[0028] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是用于在（重組）原核細(xì)胞中產(chǎn)生多膚的方法，其包括W下 步驟：
[0029] -在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)（重組）原核細(xì)胞，其包含編碼多膚的 一種或多種核酸，并從原核細(xì)胞或原核細(xì)胞的細(xì)胞周質(zhì)或從培養(yǎng)基中回收多膚，
[0030] 其中所述（重組）原核細(xì)胞是氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞。
[0031] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞具有 至少一種其他（未恢復(fù)的）氨基酸營養(yǎng)缺陷型。該營養(yǎng)缺陷型可W用于在引入編碼目的多 膚（所述多膚）的一種或多種核酸后選擇重組體/轉(zhuǎn)化體。
[0032] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，相比于在相同培養(yǎng)條件下和相同 生長培養(yǎng)基中未恢復(fù)的原核細(xì)胞（親本細(xì)胞），氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞的生長 需要向生長培養(yǎng)基中補(bǔ)充較少的氨基酸。
[0033] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培 養(yǎng)基不含對(duì)應(yīng)于已經(jīng)在營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞中恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的氨基酸。
[0034] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，相比于非營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核 細(xì)胞（親本/親本細(xì)胞）的培養(yǎng)所需，營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞的培養(yǎng)需要向生長培養(yǎng) 基中補(bǔ)充較少的一種或兩種或=種或四種氨基酸。
[0035] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在培養(yǎng)過程中不添加對(duì)應(yīng)于已經(jīng) 在營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞中恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的氨基酸。
[0036] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在缺少對(duì)應(yīng)于已經(jīng)在營養(yǎng)缺陷型 恢復(fù)的原核細(xì)胞中恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的氨基酸的情況下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0037] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，原核細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞。
[0038] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，多膚是全長抗體鏈、單鏈抗體、單 結(jié)構(gòu)域抗體、scFv、scF油、或上述之一與非抗體多膚的綴合物。
[0039] 在用于產(chǎn)生多膚的所有方法的一個(gè)實(shí)施方案中，多膚是scFv或scF油與細(xì)胞毒性 劑的綴合物。
[0040] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株用于（重組）產(chǎn)生多膚 的用途。
[0041] 在一個(gè)實(shí)施方案中，
[0042] -在氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株中，已經(jīng)恢復(fù)了必需氨基酸代謝途徑中的 至少一種缺陷，和
[0043] -氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的菌株可W在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中生長， 所述化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基不含對(duì)應(yīng)于已經(jīng)在營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株中恢 復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的氨基酸。
[0044] 在一個(gè)實(shí)施方案中，營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株是營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的大腸桿菌菌 株。
[0045] 在一個(gè)實(shí)施方案中，多膚是全長抗體鏈、單鏈抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、scFv、scF油、或 上述之一與非抗體多膚的綴合物。
[0046] 在一個(gè)實(shí)施方案中，多膚是scFv或scF油與細(xì)胞毒性劑的綴合物。
[0047] 在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株是非溶源性菌株。溶 源性菌株被暫時(shí)性隧菌體感染，即非溶源性菌株沒有隧菌體。
[0048] 在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，恢復(fù)是定向恢復(fù)，其僅祀向氨基酸營養(yǎng)缺陷型。
[0049] 在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，恢復(fù)是引入合成營養(yǎng)缺陷型氨基酸所需的一種或 多種酶。
[0050] 在所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，原核菌株具有基因型thi-1、AompT、ApyrF。
[00引]發(fā)巧詳沐
[0052] 開發(fā)大規(guī)模重組多膚產(chǎn)生方法的一個(gè)目標(biāo)是在培養(yǎng)過程中降低培養(yǎng)基組分的需 求量，即消耗。尤其是降低昂貴的培養(yǎng)基組分，如氨基酸的消耗在產(chǎn)品成本方面是有利的。
[0053] 已經(jīng)通過恢復(fù)氨基酸營養(yǎng)缺陷型菌株其至少一種、一些或所有的氨基酸營養(yǎng)缺陷 型完成了該目標(biāo)，w避免補(bǔ)料昂貴的氨基酸，于是降低重組產(chǎn)生目的多膚的成本。此外，可W使用化學(xué)成分明確的培養(yǎng)基，其導(dǎo)致提高的方法穩(wěn)定性并促進(jìn)下游加工值SP)。
[0054] 因此，本文報(bào)道的是在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中使用營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的 原核菌株重組產(chǎn)生非糖基化多膚的方法。
[00巧]已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過恢復(fù)營養(yǎng)缺陷型原核菌株其一種或多種營養(yǎng)缺陷型，所述營養(yǎng)缺陷 型恢復(fù)的菌株可W在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中生長，不再需要向所述化學(xué)成分明 確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中添加對(duì)應(yīng)于已經(jīng)恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的物質(zhì)。在昂貴物質(zhì)，如例如氨 基酸的情況下，可W實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品成本的降低并且可W更經(jīng)濟(jì)地產(chǎn)生重組多膚。
[0056] 除了在缺少對(duì)應(yīng)于已經(jīng)恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的物質(zhì)的情況下恢復(fù)在化學(xué)成分明確 的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基上生長的能力外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可W維持或甚至增加可獲得的產(chǎn)物效價(jià)。此 外已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，使用營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核菌株的可獲得產(chǎn)物效價(jià)高于利用對(duì)應(yīng)的原養(yǎng)型野 生型菌株可獲得的產(chǎn)物效價(jià)。
[0057] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是用于在原核細(xì)胞中產(chǎn)生多膚的方法，其包括W下步驟：
[0058] -在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)原核細(xì)胞，并從所述原核細(xì)胞或所述 原核細(xì)胞的細(xì)胞周質(zhì)或從培養(yǎng)基中回收多膚，所述原核細(xì)胞已經(jīng)通過將恢復(fù)親本原核細(xì)胞 的氨基酸營養(yǎng)缺陷型的核酸引入到親本原核細(xì)胞的基因組內(nèi)獲得，其包含編碼多膚的一種 或多種核酸。
[0059] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是用于在原核細(xì)胞中產(chǎn)生多膚的方法，其包括W下步驟：
[0060] -恢復(fù)對(duì)至少一種氨基酸營養(yǎng)缺陷的原核細(xì)胞的至少一種氨基酸營養(yǎng)缺陷型，
[0061] -在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞， 并從所述原核細(xì)胞或所述原核細(xì)胞的細(xì)胞周質(zhì)或從培養(yǎng)基中回收多膚，所述原核包含編碼 多膚的一種或多種核酸。
[0062] 本文報(bào)道的一個(gè)方面是用于在（重組）原核細(xì)胞中產(chǎn)生多膚的方法，其包括W下 步驟：
[0063] -在化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)（重組）原核細(xì)胞，并從所述原核細(xì)胞 或所述原核細(xì)胞的細(xì)胞周質(zhì)或從培養(yǎng)基中回收多膚，所述（重組）原核細(xì)胞包含編碼多膚 的一種或多種核酸，
[0064] 其中所述（重組）原核細(xì)胞是氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞，
[0065] 其中相比于在相同培養(yǎng)條件下和相同生長培養(yǎng)基中未恢復(fù)的原核細(xì)胞（親本細(xì) 胞），氨基酸營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的原核細(xì)胞的生長需要向生長培養(yǎng)基中補(bǔ)充較少的氨基酸，并 且
[0066] 其中所述化學(xué)成分明確的基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基不含對(duì)應(yīng)于已經(jīng)在營養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的 原核細(xì)胞中恢復(fù)的營養(yǎng)缺陷型的氨基酸。
[0067] "氨基酸營養(yǎng)缺陷型原核細(xì)胞"是運(yùn)樣的原核細(xì)胞，其不能合成必需氨基酸，例如 由于包含編碼對(duì)應(yīng)的生物合成途徑的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因的基因座內(nèi)的突變或缺失。不向培 養(yǎng)基中添加各氨基酸，細(xì)胞則不增殖。營養(yǎng)缺陷型可W是對(duì)任何氨基酸的。原核細(xì)胞也可 W是對(duì)多于一種氨基酸營養(yǎng)缺陷。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，氨基酸營養(yǎng)缺陷型原核細(xì)胞是 對(duì)至少兩種氨基酸營養(yǎng)缺陷。在另一實(shí)施方案中，氨基酸營養(yǎng)缺陷型原核細(xì)胞是對(duì)至少兩 種、至少=種、至少四種、至少五種氨基酸營養(yǎng)缺陷。在其他實(shí)施方案中，氨基酸營養(yǎng)缺陷型 原核細(xì)胞是對(duì)至少2種至高達(dá)5種、或高達(dá)10種、或高達(dá)15種氨基酸營養(yǎng)缺陷。在另一實(shí) 施方案中，氨基酸營養(yǎng)缺陷型原核細(xì)胞是對(duì)兩種至五種氨基酸、或兩種至=種氨基酸、或?qū)?兩種氨基酸、或?qū)?種氨基酸、或?qū)λ姆N氨基酸營養(yǎng)缺陷。在一個(gè)實(shí)施方案中，（氨基酸）營 養(yǎng)缺陷型恢復(fù)的細(xì)胞具有至少一種氨基酸營養(yǎng)缺陷型、或至少兩種氨基酸營養(yǎng)缺陷型、或 至少=種氨基酸營養(yǎng)缺陷型、或一種至=種氨基酸營養(yǎng)缺陷型、或兩種氨基酸營養(yǎng)缺陷型。
[0068] 在一個(gè)實(shí)施方案中，氨基酸營養(yǎng)缺陷型原核細(xì)胞是細(xì)菌細(xì)胞。
[0069] 在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞是大腸桿菌屬（Escherichia)細(xì)胞，或芽抱桿菌屬 度acillus)細(xì)胞，或乳桿菌屬（Xactobacillus)細(xì)胞，或棒狀桿菌屬（Corynebacterium) 細(xì)胞，或酵母細(xì)胞（酵母屬（Saccharomyces)、假絲酵母屬（Candida)或畢赤酵母 屬（Pichia))。在其他實(shí)施方案中，細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞，或枯草芽胞桿菌度acillus subtilis)細(xì)胞，或嗜酸乳桿菌（Xactobacillusacidophilus)細(xì)胞，或谷氨酸棒狀桿菌 (Corynebacteriumglutami州m)細(xì)胞，或己斯德畢赤酵母（Pichiapastoris)酵母細(xì)胞。
[0070] 可W用于本文報(bào)道的方法中的原核細(xì)胞可W包含一種或多種氨基酸營養(yǎng)缺陷型。 例如，在亮氨酸生物合成途徑中缺陷的大腸桿菌細(xì)胞可W選自LeuB6缺陷的細(xì)胞13-6，
[0071] X148，X156，X2224，X462，X463，X474，X478，X515，X65，X697，X760， 2000kMSE248, 342-167, 342MG，679-680,A586,A592,A593,AA100,AA7852,AA787,AB1102， AB1111，AB1115,AB1122,AB1129,AB113,AB1132,AB1133,AB114,AB1157,AB1157-D， AB1314,AB1330,AB1331，AB1881，AB1884,AB1885,AB188,CP78,CP79,CR34Thy-，CR：M Thy-SR，CR34/308,CR34/313,CR34/399,CR：M/43,CR34/454,CR34/500,CR：M/7a，CS130， CS312,CS419,CS425,CS426,CS460,CS471，CS472,CS50,CS81，CS85,CSR06,CSR603,CSR603/ PDR1996,CT28-3b，DAIO,DAll，DB1161，DB1257,DE1878,DE1882,DE2：M5,DF225,DF41， JRG94，JS10C600r-m-，T6R，P678SSRpr〇-，PA20SR，PA200SR，PA201SR，PA214SRT6R，PA265 SR，PA309,PDE70,PA340,PA340/T6,PA360,PA414,PAM161，PAM162,PAM163,PAM164,PAM660， PAT84，PB：M9，PB69，PCI，PC2，PC3，PC5，PC6，PCS，PJ1，PJ2，PJ3，PJ4，P巧，PJC600 ( =CRSR)， W208SRAzR,W2660,LAM-,W945his,WA2127,WA2379,WA2548,WA2552,WA2574,WA2899, WA921，WA946,WA960,YIO,Y46,Y53,Y70,YYClOO。
[0072] 在一個(gè)實(shí)施方案中，原核細(xì)胞是大腸桿菌K12細(xì)胞或大腸桿菌B細(xì)胞。
[0073] 術(shù)語"生長"指培養(yǎng)中活力細(xì)胞密度的改變。該改變可W是隨時(shí)間的改變。可W 通過測(cè)定578nm處的光密度來測(cè)定活力細(xì)胞密度。
[0074] 在一個(gè)實(shí)施方案中，生長是時(shí)期內(nèi)活力細(xì)胞密度的增加。在一個(gè)實(shí)施方案中，時(shí)期 是接種后培養(yǎng)的0-30小時(shí)的時(shí)期。
[00巧]術(shù)語"相同的"表示第二個(gè)值在第一個(gè)值的+/-20%之內(nèi)。關(guān)于培養(yǎng)條件，術(shù)語"相 同的"指培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)體積、培養(yǎng)溫度、接種細(xì)胞密度、通氣速率、pH值、攬拌器速度、補(bǔ)料 速度（如果可應(yīng)用）等。關(guān)于培養(yǎng)基，術(shù)語"相同的"表示第二種培養(yǎng)基相比于第一種培養(yǎng) 基在至多5種組分上不同（不同=存在或缺失）。
[0076] 在一個(gè)實(shí)施方案中，相同的培養(yǎng)條件是同一的培養(yǎng)條件。在一個(gè)實(shí)施方案中，相 同的培養(yǎng)基是同一的培養(yǎng)基。
[0077] 用于培養(yǎng)原核細(xì)胞并也用于培養(yǎng)氨基酸營養(yǎng)缺陷型原核細(xì)胞的方法為本領(lǐng)域技 術(shù)人員所知（參見例如Riesenberg,D.,等，Qirr.Opin.Biotechnol. 2 (1991) 380-384)。
[0078] 可W利用任何方法