多級(jí)雙水相同步分離梔子苷和梔子黃的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物活性成分提取的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從梔子果粉中高收率及純度提取梔子苷和梔子黃的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]梔子苷是梔子果實(shí)中的一種有效成分，具有抗氧化、抗炎等作用，在醫(yī)藥、保健、生物檢測(cè)等方面有著廣泛應(yīng)用。梔子苷為環(huán)烯醚萜類化合物，異名京尼平苷。在食品工業(yè)主要可以制成天然食用著色劑梔子藍(lán)和梔子紅。梔子黃是一種混合物，其中主要的成分包括藏紅花素，藏花酸和梔子苷。梔子黃色素除可以著色外，又含有一定的活血、祛痰、止痛、降壓等醫(yī)療作用，但是當(dāng)梔子黃的OD值大于0.4時(shí)，梔子黃容易轉(zhuǎn)變成綠色或褪色，其中售價(jià)昂貴的藏紅花酸，可應(yīng)用到藥品行業(yè)。目前關(guān)于梔子苷和梔子黃的提取分離有CO2-SFE,色譜和大孔樹脂吸附的方法。但是這些方法不僅耗時(shí)，而且經(jīng)濟(jì)成本也很高。由于梔子苷的極性和梔子黃相似，在吸附法分離梔子黃時(shí)極易隨梔子黃一同洗脫出來，從而影響梔子黃的色價(jià)和OD值。已有關(guān)于連續(xù)提取梔子苷和梔子黃的專利都是采用不同極性的乙醇對(duì)大孔樹脂進(jìn)行梯度洗脫，達(dá)到將二者分離的目的。因此積極開發(fā)高效提取分離梔子苷和梔子黃技術(shù)，必將具有極大的現(xiàn)實(shí)意義和可觀的市場(chǎng)前景。雙水相體系(ATPE)以其具有操作方便，分離效率高，對(duì)分離物質(zhì)零破壞等特性，已被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化工和天然產(chǎn)物的提取等領(lǐng)域的產(chǎn)品分離和純化。我們采用異丙醇-鹽雙水相體系萃取梔子果原料生產(chǎn)梔子黃廢液得到純度為98.5%以上的梔子苷結(jié)晶，并申請(qǐng)專利(專利號(hào)201410721860.4)，目前已進(jìn)入實(shí)審階段，但是目前已報(bào)道的采用雙水相萃取梔子苷的方法都沒有涉及到梔子黃的同步提取。為此，我們通過對(duì)低分子醇/無機(jī)鹽的雙水相體系的組成進(jìn)行研究，建立多級(jí)雙水相同步分離純化梔子苷和梔子黃的方法。該方法操作簡(jiǎn)單、綠色高效、經(jīng)濟(jì)省時(shí)、易于放大。它不僅開創(chuàng)了雙水相萃取技術(shù)在同步分離梔子黃和梔子苷中的應(yīng)用，同時(shí)提高了梔子苷和梔子黃的分離純化效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種利用雙水相得到高收率及高純度的梔子苷和梔子黃的方法。利用梔子果粉得到梔子粗提取液，將其經(jīng)過多級(jí)異丙醇/鹽雙水相體系提取分離、濃縮干燥得到梔子苷和梔子黃結(jié)晶初品，再經(jīng)過重結(jié)晶后，得到高純度的梔子苷和梔子黃結(jié)晶。
[0004]所述的一種分離純化梔子苷的方法，其特征在于:室溫下配制低分子醇與鹽雙水相體系并繪制相圖，根據(jù)成相穩(wěn)定性確定適宜的雙水相體系。
[0005]所述是一種分離純化梔子苷和梔子黃的方法，其特征在于:繪制雙水相圖所用的低分子醇類為C1-C5的直鏈或支鏈的烷基醇。特別優(yōu)選為乙醇、異丙醇或丙醇，所述的鹽類為堿土金屬鹽、堿金屬鹽或銨鹽?？梢赃x自鉀鹽、鈉鹽和銨鹽。具體而言，所述鉀鹽可以為:碳酸鉀、磷酸氫二鉀；鈉鹽為檸檬酸三鈉、碳酸鈉、硫酸鈉；銨鹽為硫酸銨、碳酸銨。
[0006]所述的是一種分離純化梔子苷和梔子黃的方法，其特征在于:室溫下配制低分子醇/鹽雙水相體系，將梔子粗提取液加入到該雙水相體系中，在20-50°C條件下，300r/min條件下恒溫磁力攪拌30-60min，使梔子苷和梔子黃富集在上相。靜置60-100min，經(jīng)1000-2000rpm離心20-40min，分離出梔子苷和梔子黃的富集相。將此相加入到相同雙水相體系的下相中，在20-50 °C條件下，300r/min條件下恒溫磁力攪拌30_60min，加入助劑，使梔子苷和梔子黃分別富集在下相和上相中，分離出梔子苷和梔子黃的富集相。含有梔子黃的上相，在-0.04-0.09MPa，45°C條件下經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)濃縮干燥得到梔子黃結(jié)晶粗品；含有梔子苷的下相采用95%的乙醇反復(fù)萃取，在將醇萃取液放置過夜，經(jīng)2000rpm離心30min，除去鹽，在-0.04-0.09MPa，35°C條件下經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)濃縮干燥得到梔子苷結(jié)晶粗品。用有機(jī)溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，得到高純度的梔子苷和梔子黃結(jié)晶。
[0007]所述的一種分離純化梔子苷和梔子黃的方法，其特征在于所述助劑為鹽酸、硫酸、硝酸、乙酸、檸檬酸中的一種或幾種混合物。
[0008]所述的一種分離純化梔子苷的方法，其特征在于所述重結(jié)晶的溶劑具體可為丙酮、乙酸乙酯或石油醚中的任意一種，所述重結(jié)晶溶劑的體積為梔子苷和梔子黃初品質(zhì)量的4-10倍。
[0009]本發(fā)明利用低分子醇-鹽多級(jí)雙水相萃取技術(shù)分離純化梔子粗提取液，經(jīng)重結(jié)晶以高收率得到高純度的梔子苷和梔子黃晶體。該方法操作簡(jiǎn)單，綠色高效，經(jīng)濟(jì)省時(shí)，易于放大。它不僅開創(chuàng)了雙水相萃取技術(shù)在同步分離梔子黃和梔子苷中的應(yīng)用，提高了梔子苷和梔子黃的分離純化效率，而且該工藝還可以應(yīng)用到其它天然色素的分離純化中。
[0010]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)分離梔子苷和梔子黃，取得了如下效果:
1.本發(fā)明開發(fā)出了一種多級(jí)低分子醇-鹽雙水相技術(shù)同步分離純化梔子苷和梔子黃，現(xiàn)有技術(shù)中沒有相關(guān)報(bào)道。
[0011]在本發(fā)明條件下，能夠得到純度為95.9%、收率為85%的梔子苷和梔子黃晶體，相比于現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)了很好的效果。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。
[0013]下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0014]實(shí)施例1
室溫下按硫酸銨與乙醇質(zhì)量百分比為10%配制雙水相體系10g，取濃縮后的梔子粗提取液1ml，加入到該雙水相體系中，恒溫磁力攪拌(20°C，300r/min) 40min，將梔子黃和梔子苷富集在上相。靜置60min，經(jīng)2000rpm離心30min，分離出梔子苷和梔子黃的富集相。再將此相加入到相同雙水相體系的下相中，在室溫條件下，恒溫磁力攪拌(20°C，300r/min) 40min，同時(shí)加入1w.%鹽酸，使梔子苷和梔子黃分別富集在下相和上相中，分離出梔子苷和梔子黃的富集相，含有梔子黃的上相，在-0.04-0.09MPa，45°C條件下經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)濃縮干燥得到梔子黃結(jié)晶粗品，再經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶得梔子黃。含有梔子苷的下相采用95%的乙醇反復(fù)萃取