一種從梔子中提取京尼平甙的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術領域的提取方法，具體說是一種從梔子中提取京尼平甙的方法。
【背景技術】
[0002]桅子是茜草科(Rubiaceae)植物桅子(Gardeniajasminoides Ellis)的果實，長橢圓形或橢圓形，呈深紅色或黃紅色，桅子屬衛(wèi)生部頒布的首批藥食兩用資源，是傳統(tǒng)中藥。桅子具有瀉火除煩，清熱利濕，涼血解毒，利膽保肝，降壓，滅菌消炎，外用消腫止痛的功效。中醫(yī)臨床上主要用于治療熱病，黃疽型肝炎，扭挫傷，高血壓，糖尿病等。桅子中的化學成分很多，其中主要有藏花素，藏花酸(Ichietal)和京尼平式(Geniposide)等環(huán)稀醚蔽類化合物，其中京尼平甙是其主要有效成分。
[0003]京尼平甙是一種環(huán)烯醚萜葡萄糖甙，易溶于水。京尼平甙可被R-葡萄糖甙酶水解為京尼平。現(xiàn)代研究表明，京尼平甙對消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和中概神經(jīng)系統(tǒng)疾病均有顯著療效，此外，京尼平甙還有一定的抗炎和治療軟組織損傷的作用。京尼平甙除了藥用以外，在其它領域也得到廣泛的應用，如可用作植物增產(chǎn)劑、生物檢測劑等，是一種重要的生物活性物質。在醫(yī)療、保健品領域應用廣泛。
[0004]京尼平甙主要存在于桅子、杜仲等天然植物中，是提取京尼平甙的理想原料，國內現(xiàn)有提取工藝方案中存在著提取率不高、產(chǎn)品純度低、能源消耗大、大量使用有機溶劑、廢水量大等問題。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種從梔子中提取京尼平甙的方法，具有工藝簡單，適合生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低等優(yōu)點。
[0006]本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)，具體包括如下步驟:
[0007]I)浸泡處理:將梔子裝入編織袋，扎好口，放在水池里，水池加滿水，并在水池上面壓上重物，浸泡；
[0008]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎或破碎，加入相當于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至50-60°C維持5-10分鐘，得到膏狀漿液；
[0009]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調pH為4-5，加入膏狀漿液0.05-0.1 %重量份的果膠-纖維素復合酶和0.001重量份的甘露醇進行酶解40-60分鐘，得到第一次酶解液；
[0010]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2-3倍重量的純凈水，加熱至60-70°C浸提60-120分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0011]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調pH為4.5，加入相當于混合物0.1-0.2%重量份的纖維素酶進行酶解40-60分鐘，得到第二次酶解液，重復兩次；
[0012]6)柱層析:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，通過柱層析，用大孔吸附樹脂進行吸附，用去離子水清洗樹脂至流出液體為無色，再用濃度為15-20%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；
[0013]7)干燥:將洗脫液濃縮，得到膏狀的京尼平甙，再通過干燥得到京尼平甙。
[0014]本發(fā)明步驟I)所述的浸泡，時間優(yōu)選15-24小時。
[0015]步驟3)所述的果膠-纖維素復合酶，優(yōu)選活性是1-3萬活性單位/克(毫升)的固態(tài)或液態(tài)果膠-纖維復合酶。
[0016]步驟6)所述的大孔吸附樹脂型號優(yōu)選DlOl型、DA201型。
[0017]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點:
[0018]1、梔子的植物細胞內含有大量的油脂，主要由成分為甘油三酯的化合物組成的混合物，這些油脂以油粒和油體原生質體形式、呈不連續(xù)顆粒狀、與顆粒蛋白體一起無規(guī)則地分散在細胞內等存在形式存在。現(xiàn)有的提取方法，都是直接對梔子等原料打碎或粉碎后通過水提/醇提、酶解、或者微波提取等方式直接提取，在提取的時候，細胞中的油脂會同時分離出，含有油脂的基團和京尼平甙、京尼平酸、色素等成分混在一起，從而影響后續(xù)有效成分的分離，增加了工序的處理難度。本發(fā)明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分對油和水的親和力差異及油水比重不同而將油和非油成分分離，增加了產(chǎn)品收率和提高了提取率。
[0019]2、本發(fā)明采用梔子水池浸泡，梔子浸泡在水里，梔子逐漸軟化，水分自然進入到內部，利于植物油脂的分離，利于后續(xù)酶解、去油；同時，梔子浸泡在水里，厭氧細菌大量繁殖，特別是夏天的時候，會變酸，PH值會降到4左右，方便后面工序的調整pH。
[0020]3、本發(fā)明先采用果膠-纖維素復合酶去除細胞壁，釋放植物細胞中的油脂，加入甘露醇，可以保持滲透壓，利于油脂的釋放。
[0021]4、本發(fā)明得到的京尼平甙，經(jīng)HPLC檢測，含量在98.5%以上，得率比現(xiàn)有技術提尚 25 % ο
【具體實施方式】
[0022]下面以實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。
[0023]實施例1:
[0024]一種從梔子中提取京尼平甙的方法，具體包括如下步驟:
[0025]I)浸泡處理:將梔子裝入編織袋，扎好口，放在水池里，水池加滿水，并在水池上面壓上重物，浸泡15小時；
[0026]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎，加入相當于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至50°C維持5分鐘，得到膏狀漿液；
[0027]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調pH為4，加入膏狀漿液0.05%重量份活性是I萬活性單位/克的果膠-纖維素復合酶和0.001重量份的甘露醇進行酶解40分鐘，得到第一次酶解液；
[0028]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2倍重量的純凈水，加熱至60°C浸提120分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0029]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調pH為4.5，加入相當于混合物0.1 %重量份的纖維素酶進行酶解60分鐘，得到第二次酶解液，重復兩次；
[0030]6)柱層析:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，通過柱層析，用DlOl型大孔吸附樹脂進行吸附，用去離子水清洗樹脂至流出液體為無色，再用濃度為20%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；
[0031]7)干燥:將洗脫液濃縮，得到膏狀的京尼平甙，再通過干燥得到京尼平甙，經(jīng)HPLC檢測，含量99.1%。
[0032]實施例2:
[0033]—種從梔子中提取京尼平甙的方法，具體包括如下步驟:
[0034]I)浸泡處理:將梔子裝入編織袋，扎好口，放在水池里，水池加滿水，并在水池上面壓上重物，浸泡24小時；
[0035]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子破碎，加入相當于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至60°C維持8分鐘，得到膏狀漿液；
[0036]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調pH為4.5，加入膏狀漿液0.1%重量份活性是2萬活性單位/毫升的果膠-纖維素復合酶和0.001重量份的甘露醇進行酶解50分鐘，得到第一次酶解液；
[0037]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入3倍重量的純凈水，加熱至70°C浸提60分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0038]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調pH為4.5，加入相當于混合物0.15%重量份的纖維素酶進行酶解50分鐘，得到第二次酶解液，重復兩次；
[0039]6)柱層析:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，通過柱層析，用DA201型大孔吸附樹脂進行吸附，用去離子水清洗樹脂至流出液體為無色，再用濃度為15%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；
[0040]7)干燥:將洗脫液濃縮，得到膏狀的京尼平甙，再通過干燥得到京尼平甙，經(jīng)HPLC檢測，含量99.3%。
[0041]實施例3:
[0042]I)浸泡處理:將梔子裝入編織袋，扎好口，放在水池里，水池加滿水，并在水池上面壓上重物，浸泡18小時；
[0043]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎，加入相當于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至55°C維持10分鐘，得到膏狀漿液；
[0044]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調pH為5，加入膏狀漿液0.08%重量份活性是3萬活性單位/克的果膠-纖維素復合酶和0.001重量份的甘露醇進行酶解60分鐘，得到第一次酶解液；
[0045]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2倍重量的純凈水，加熱至65°C浸提100分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0046]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調pH為4.5，加入相當于混合物0.2%重量份的纖維素酶進行酶解40分鐘，得到第二次酶解液，重復兩次；
[0047]6)柱層析:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，通過柱層析，用DlOl型大孔吸附樹脂進行吸附，用去離子水清洗樹脂至流出液體為無色，再用濃度為20%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；
[0048]7)干燥:將洗脫液濃縮，得到膏狀的京尼平甙，再通過干燥得到京尼平甙，經(jīng)HPLC y
Q Γ\ / r>.r、r> '?±=.til L f；S/fl*77Tl.
【主權項】
1.一種從梔子中提取京尼平甙的方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)浸泡處理:將梔子裝入編織袋，扎好口，放在水池里，水池加滿水，并在水池上面壓上重物，浸泡； 2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎或破碎，加入相當于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至50-60°C維持5-10分鐘，得到膏狀漿液； 3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調pH為4-5，加入膏狀漿液0.05-0.1%重量份的果膠-纖維素復合酶和0.001重量份的甘露醇進行酶解40-60分鐘，得到第一次酶解液； 4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2-3倍重量的純凈水，加熱至60-70°C浸提60-120分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離； 5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調pH為4.5，加入相當于混合物0.1-0.2%重量份的纖維素酶進行酶解40-60分鐘，得到第二次酶解液，重復兩次； 6)柱層析:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，通過柱層析，用大孔吸附樹脂進行吸附，用去離子水清洗樹脂至流出液體為無色，再用濃度為15-20%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液； 7)干燥:將洗脫液濃縮，得到膏狀的京尼平甙，再通過干燥得到京尼平甙。2.根據(jù)權利要求1所述的一種從梔子中提取京尼平甙的方法，其特征在于:步驟I)所述的浸泡，時間為15-24小時。3.根據(jù)權利要求1所述的一種從梔子中提取京尼平甙的方法，其特征在于:步驟3)所述的果膠-纖維素復合酶，為活性是1-3萬活性單位/克的固態(tài)或1-3萬活性單位/毫升的液態(tài)果膠-纖維復合酶。4.根據(jù)權利要求1所述的一種從梔子中提取京尼平甙的方法，其特征在于:步驟6)所述的大孔吸附樹脂型號為DlOl型、DA201型。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從梔子中提取京尼平甙的方法，包括下述步驟:浸泡處理、原料處理、第一次酶解、去油、第二次酶解、柱層析、干燥。本發(fā)明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分對油和水的親和力差異及油水比重不同而將油和非油成分分離，增加了產(chǎn)品收率和提高了提取率。
【IPC分類】C07H1/08, C07H17/04
【公開號】CN105037463
【申請?zhí)枴緾N201510541584
【發(fā)明人】鐘德品, 謝冬養(yǎng), 陸美珍, 趙明東, 應啟實, 盧樺香, 盤秋梅
【申請人】桂林三寶生物科技有限公司
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年8月31日