處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1順次處理的 脫膠油中具有2.lppm的殘留磷。
[0152] 實施例23
[0153] 使用分離混合器將2002. 0克含747. 3ppm磷的粗制大豆油在正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為60°C，然后添加1. 8毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為4. 5的弱緩沖液。將 溫度維持在60°C，添加2. 2194克Diversa的Purifine? (PLC脂肪酶，批號90BU002A1)，然 后添加60克去離子水，并將全部混合物剪切混合120秒。將該油混合物在正常速度下攪拌 15分鐘。將溫度維持在60°C，添加0? 2198克Novozymes的Leeitase?Ultra(PLAl脂肪 酶，批號LYN05007)，并將全部混合物剪切混合120秒。在60°C的溫度下將油混合物以正常 速度攪拌15分鐘。然后離心該酶處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1順次處理的 脫膠油中具有4. 6ppm的殘留磷。
[0154] 實施例24
[0155] 使用分離混合器將2000.8克含747.3ppm磷的粗制大豆油在正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為50°C，然后添加1. 8毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為4. 5的弱緩沖液。將 溫度維持在50°C，添加2. 2500克Diversa的Purifine?(PLC脂肪酶，批號90BU002A1)和 0? 2216 克Novozymes的Lecitase?Ultra(PLA1 脂肪酶，批號LYN05007)，然后添加 90 克去 離子水，并將全部混合物剪切混合45秒。在50°C的溫度下將油混合物以正常速度攪拌120 分鐘。然后離心該酶處理的油；收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1組合酶混合物生成具有 1.8ppm的殘留磷的脫膠油。
[0156] 實施例25
[0157] 將1998. 9克含747.3ppm磷的粗制大豆油在使用分離混合器正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為50°C，然后添加2. 4毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為5. 0的弱緩沖液。將 溫度維持在50°C，添加0? 7445克Diversa的Purifine?(PLC脂肪酶，批號90BU002A1)和 0? 2042 克Novozymes的Leci丨:ase?Ultra(PLA1 脂肪酶，批號LYN05007)，然后添加 60 克去 離子水，并將全部混合物剪切混合60秒。在50°C的溫度下將油混合物以正常速度攪拌60 分鐘。然后離心該酶處理的油；收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1組合酶混合物生成具有 7.2ppm的殘留磷的脫膠油。
[0158] 實施例26
[0159]將1997. 3克含810. 8ppm磷的粗制大豆油在使用分離混合器正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為60°C，然后添加1. 8毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為4. 5的弱緩沖液。將 溫度維持在60°C，添加1. 5189克Diversa的Purifine? (PLC脂肪酶，批號90BU002A1)，然 后添加90克去離子水，并將全部混合物剪切混合60秒。將該油混合物在正常速度下攪拌 30分鐘。將溫度維持在60°C，添加0? 1119克Novozymes的Lecitase?Ultra(PLAl脂肪 酶，批號LYN05007)，并將全部混合物剪切混合60秒。在60°C的溫度下將油混合物以正常 速度攪拌30分鐘。然后離心該酶處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1順次處理的 脫膠油中具有2.2ppm的殘留磷。
[0160] 實施例27
[0161] 使用分離混合器將2010. 0克含810.8ppm磷的粗制大豆油在正常攪拌下冷卻 至50 °C。將溫度維持在50 °C，添加2. 2608克Diversa的Purifine? (PLC脂肪酶，批號 90BU002A1)，然后添加30克去離子水，并將全部混合物剪切混合60秒。將該油混合物在 正常速度下攪拌60分鐘。將溫度維持在50°C，添加0. 1172克Novozymes的Leeitase? Ultra(PLA1脂肪酶，批號LYN05007)，并將全部混合物剪切混合60秒。在50°C的溫度下將 油混合物以正常速度攪拌60分鐘。然后離心該酶處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和 PLA1順次在中性pH下處理的脫膠油中具有72.6ppm的殘留磷。
[0162] 實施例28
[0163] 使用分離混合器將2005. 1克含810. 8ppm磷的粗制大豆油在正常攪拌下加熱 至40 °C。將溫度維持在40 °C，添加2. 2622克Diversa的Purif ine? (PLC脂肪酶，批號 90BU002A1)和 0? 1031 克 Novozymes 的Lecitase? Ultra (PLA1 脂肪酶，批號LYN05007)，然 后添加60克去離子水，并將全部混合物剪切混合120秒。在40°C的溫度下將油混合物以正 常速度攪拌60分鐘。然后離心該酶處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1組合酶混 合物在中性pH下生成具有61. 5ppm的殘留磷的脫膠油。
[0164] 實施例29
[0165] 使用分離混合器將2006. 3克含795. 3ppm磷的粗制大豆油在正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為50°C，然后添加2. 4毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為5. 0的弱緩沖液。將 溫度維持在50°C，添加1. 5373克Diversa的Purifine?(PLC脂肪酶，批號90BU002A1)和 0? 1168 克Novozymes的Lecitase?Ultra(PLA1 脂肪酶，批號LYN05007)，然后添加 90 克去 離子水，并將全部混合物剪切混合120秒。在50°C的溫度下將油混合物以正常速度攪拌30 分鐘。然后離心該酶處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1組合酶混合物在pH5. 0 下生成具有1. 9ppm的殘留磷的脫膠油。
[0166] 實施例30
[0167] 分離混合器將2006. 1克含795. 3ppm磷的粗制大豆油在使用正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為40°C，然后添加1. 8毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為4. 5的弱緩沖液。將 溫度維持在40°C，添加0? 7736克Diversa的Purifine?(PLC脂肪酶，批號90BU002A1)和 0? 1072 克Novozymes的Lecitase?Ultra(PLA1 脂肪酶，批號LYN05007)，然后添加 30 克去 離子水，并將全部混合物剪切混合45秒。在40°C的溫度下將油混合物以正常速度攪拌30 分鐘。然后離心該酶處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1組合酶混合物在pH4. 5 下生成具有13. 7ppm的殘留磷的脫膠油。
[0168] 實施例13-30的磷含量結(jié)果顯示于下文的表5中。
[0169]表 5
[0170]
[0172] 對上述實驗的總結(jié)顯示于圖6中，該圖為每個因素的每個水平下的最終平均含磷 量的圖。
[0173] 在對PLC酶最佳的中性pH下，兩種酶的組合未能生成具有允許油進行物理精煉的 可接受磷值的油。然而，在對PLA酶最佳的酸性pH下，順次或同時添加的酶組合在油中生成 了允許其被物理精煉的可接受的殘留磷水平。當采用酸性pH時，僅一個實驗未能生成具有 少于lOppm殘留磷的油。實施例30具有大于10(13. 7ppm)的殘留磷水平，并且是在以兩種 酶的最低水平、最低溫度、最低含水量、最短的混合和攪拌時間以及最酸性的pH下生成的。
[0174] 在酶組合之間發(fā)現(xiàn)了協(xié)同效應，允許反應在少于30分鐘內(nèi)完成，而PLC酶需要1 小時，PLA酶需要4小時。完成了附加測試以驗證短反應時間的影響；結(jié)果顯示于下表6中。 在這些附加測試中，考慮到在上文中發(fā)現(xiàn)較低的pH可比中性pH生成明顯更有利的結(jié)果，pH 被維持在4. 5。PLA1的量同樣被保持在恒定的0. 5ppm，因為從上文得出PLA量高于這一水 平時未導致更有效的脫膠。此外，考慮到由上文得出同時添加酶比順次添加酶生成了更好 的脫膠效果，在這些實施例中的酶均為同時添加，而非順次添加。另外，在工業(yè)工藝中，限制 總的處理時間、總的設備以及專用資產(chǎn)是有利的。
[0175]表6
[0176]
[0177] 實施例31
[0178] 使用分離混合器將2003. 6克含784. 8ppm磷的粗制大豆油在正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為40°C，然后添加1. 8毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為4. 5的弱緩沖液。將 溫度維持在40°C，添加1. 4603克Diversa的Purifine?(PLC脂肪酶，批號90BU002A1)和 0? 1021 克 Novozymes 的Lecitase? Ultra (PLA1 脂肪酶，批號 LYN05007)，然后添加 40 克去 離子水，并將全部混合物剪切混合120秒。在40 °C的溫度下將油混合物以正常速度攪拌120 分鐘。然后離心該酶處理的油；收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1組合酶混合物在pH4. 5 下生成具有10. 7ppm的殘留磷的脫膠油。
[0179] 實施例32
[0180] 使用分離混合器將2004. 8克含784. 8ppm磷的粗制大豆油在正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為60°C，然后添加1. 8毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為4. 5的弱緩沖液。將 溫度維持在60°C，添加0? 7509克Diversa的Purifine?(PLC脂肪酶，批號90BU002A1)和 0? 1105 克Novozymes的Lecitase?Ultra(PLA1 脂肪酶，批號LYN05007)，然后添加 90 克去 離子水，并將全部混合物剪切混合45秒。在60°C的溫度下將油混合物以正常速度攪拌120 分鐘。然后離心該酶處理的油，收集分離的油和濕膠。PLC和PLA1組合酶混合物在pH4. 5 下生成具有6. 7ppm的殘留磷的脫膠油。
[0181] 實施例33
[0182] 將2000. 4克含697. 7ppm磷的粗制大豆油在使用分離混合器正常攪拌下加熱至 75-80°C。添加2. 0克的50%w/w檸檬酸溶液，剪切1分鐘。使用分離混合器對油進行1小 時的正常攪拌。在正常速度的攪拌下冷卻該油，直至油溫為40°C，然后添加1. 8毫升4摩爾 氫氧化鈉溶液，將混合物剪切混合10秒。檸檬酸和苛性堿形成pH為4. 5的弱緩沖液。將 溫度維持在40°C，添加0? 7530克Diversa的Purifine?(PLC脂肪酶