一種戴氏綠僵菌mtyj141025及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種戴氏綠僵菌（Metarhiziumtaii Liang&Liu)MTYJ141025 及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 鹿根據(jù)天牛[Dorysthenesgranulosus(Thomson)]隸屬于鞘翅目（Coleoptera) 天?？疲–erambycidae)，廣泛分布于廣西、廣東、海南及云南等主要甘鹿產(chǎn)區(qū)，是危害甘鹿 的重要害蟲，主要以幼蟲咬食甘蔗根莖部及主根，導(dǎo)致甘蔗整株死亡，嚴(yán)重影響甘蔗生產(chǎn)。 由于甘蔗多為宿根蔗，再加上隨著甘蔗大面積的連作種植，蔗根鋸天牛的發(fā)生危害日趨嚴(yán) 重，目前主要采取以農(nóng)藥防治為主的防治措施?；瘜W(xué)農(nóng)藥雖然具有見效快，但化學(xué)農(nóng)藥的施 用不僅會造成甘蔗農(nóng)藥殘留及嚴(yán)重的環(huán)境污染，而且易殺死蔗根鋸天牛的自然天敵，并使 目標(biāo)害蟲產(chǎn)生抗藥性，因而不符合害蟲治理的可持續(xù)性及生態(tài)控制的要求。而生物防治措 施具有生態(tài)、持續(xù)控制的特點(diǎn)，因而生物防治則是蔗根鋸天牛生態(tài)、持續(xù)控制的重要途徑。 昆蟲病原真菌因其具有自然流行性強(qiáng)、不染污環(huán)境、對人、畜、植物安全，害蟲極少或不產(chǎn)生 抗性，有利于環(huán)境保護(hù)的特點(diǎn)，成為害蟲生物防治的重要措施。因此，研究蔗根鋸天牛的生 防真菌，為蔗根鋸天牛的生物防治提供依據(jù)，也為減少化學(xué)防治所帶來的抗藥性及環(huán)境污 染提供保障。
[0003] 戴氏綠僵菌（MetarhiziumtaiiLiang&Liu)屬于接合菌亞門絲孢綱絲孢目綠僵 菌屬。據(jù)記載，戴氏綠僵菌的寄主為一種鱗翅目夜蛾幼蟲，而對蔗根鋸天牛的侵染還未見報(bào) 道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種戴氏綠僵菌MTYJ141025及其應(yīng)用，旨在克服現(xiàn)有戴 氏綠僵菌未發(fā)現(xiàn)能寄生蔗根鋸天牛的不足，通過生物技術(shù)手段防治蔗根鋸天牛，避免或減 少因不合理使用化學(xué)農(nóng)藥所帶來的抗藥性問題。
[0005] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種戴氏綠僵菌（MetarhiziumtaiiLiang&Liu) MTYJ141025,于2014年12月4日保藏于中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心，保藏 號為CGMCCNo. 10140,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。
[0006] 本發(fā)明的進(jìn)一步的目的在于提供上述戴氏綠僵菌MTYJ141025在蔗根鋸天牛防治 方面的應(yīng)用。本發(fā)明于2013年8月，在云南省元江縣甘蔗田間調(diào)查時發(fā)現(xiàn)戴氏綠僵菌在蔗 根鋸天牛中大量發(fā)生流行，引起大量蔗根鋸天牛感染死亡。因此，該菌株是目前國內(nèi)首次發(fā) 現(xiàn)的寄生蔗根鋸天牛、流行性很強(qiáng)的蟲生真菌，在防治蔗根鋸天牛中具有很大的開發(fā)應(yīng)用 前景。
[0007] 本發(fā)明從罹病蔗根鋸天牛幼蟲上分離獲得戴氏綠僵菌野生菌株，將野生菌株回接 于蔗根鋸天牛幼蟲上復(fù)壯得到戴氏綠僵菌菌株，對該菌株采用按常規(guī)方法進(jìn)行單孢分離、 培養(yǎng)得到純的、致病力強(qiáng)的戴氏綠僵菌。在SDAY培養(yǎng)基上菌落平展，絨毛狀，中部白色其外 為墨綠色產(chǎn)孢輪帶，邊緣綠豆汁黃，背面芥黃輪帶。瓶梗柱狀，具短尖8. 4 - 20X1-1. 5ym， 單生于氣生菌絲或緊密地輪生于分生孢子梗及原瓶梗上，也可通過微循環(huán)產(chǎn)孢子從 次生子囊孢子產(chǎn)生。分生孢子柱狀，中部稍縊縮，兩端圓或一端變細(xì)尖（4. 8-)7. 8~ 9. 6 (-14)X2. 5~3ym，偶有雙細(xì)胞分生孢子13X3ym。由微循環(huán)產(chǎn)孢形成的分生孢子，其 形狀和大小基本與前者相同，7. 2-9X2. 5ym。
[0008] 相比于現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明是初次從戴氏 綠僵菌體上分離得到的菌株，培養(yǎng)比較簡單，生長快速，產(chǎn)孢量大。其分生孢子對蔗根鋸天 牛幼蟲致病力強(qiáng)，環(huán)保無污染、不易產(chǎn)生抗藥性，可以廣泛地用于蔗根鋸天牛的防治。
【具體實(shí)施方式】：
[0009] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明 進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于 限定本發(fā)明。
[0010] 實(shí)施例一、病原菌的分離、鑒定
[0011] 1.1材料與方法
[0012] 1. 1. 1 材料
[0013] 在云南省元江縣采集到被一種蟲生真菌侵染后的罹病蔗根鋸天牛幼蟲。
[0014] 薩氏培養(yǎng)基（SDAY) :1%蛋白胨+1%酵母粉+4%葡萄糖+1. 5-2%瓊脂粉+1000ml 水。
[0015] 無菌操作條件：所有的器皿和用具均經(jīng)高溫滅菌鍋（12rC，30min)，接種等操作 均在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行。
[0016] 培養(yǎng)條件：置于28°C光照（12L:12D)恒溫箱中培養(yǎng)，待菌落形成后，轉(zhuǎn)移到試管 SDAY斜面，培養(yǎng)2-3天，轉(zhuǎn)入4 °C冰箱儲存。
[0017] LL2病原菌的分離和純化
[0018] 分離：從罹病蔗根鋸天牛幼蟲尸體上分離病原菌。將蔗根鋸天牛幼蟲罹病蟲體帶 回實(shí)驗(yàn)室，將罹病蔗根鋸天牛幼蟲尸按順序依次經(jīng)過70%酒精浸泡30秒、再經(jīng)過0. 1 %升 汞溶液浸泡3分鐘（徹底消毒）、最后用無菌水沖洗三次，再用接種針取處理好的蔗根鋸天 牛幼蟲組織接種于SDAY培養(yǎng)基上。在溫度為28°C條件下培養(yǎng)，長出菌絲后按常規(guī)方法進(jìn)行 單孢分離、培養(yǎng)得到純的、產(chǎn)孢能力強(qiáng)的菌株戴氏綠僵菌MetarhiziumtaiiLiang&Liu，轉(zhuǎn) 移到SDAY斜面上生長3-4天，在4°C冰箱儲存。
[0019] 復(fù)壯：將分離到的菌株在SDAY上培養(yǎng)2-3天后，產(chǎn)生大量分生孢子，再將該分生孢 子挑入含1%吐溫-80的無菌水，用玻璃棒攪拌均勻，得到適當(dāng)濃度（10s孢子/ml)的孢子 懸浮液，用小型噴霧器均勻噴于家蠅成蟲體表（以蟲體表面濕潤為度），保持相對濕度80% 以上。收集死蟲并保濕，得到的幼蟲蟲尸再按以上方法分離得到致病力更強(qiáng)的菌株。
[0020] 純化：挑取培養(yǎng)基上分生孢子粉，再次接種在新的培養(yǎng)基上。如此培養(yǎng)2~3代， 菌株就被純化。
[0021] 1.1. 3病原菌的鑒定
[0022] 根據(jù)病原菌的培養(yǎng)性狀、菌絲和分生孢子的形態(tài)進(jìn)行鑒定。利用40X10倍顯光學(xué) 微鏡，鏡檢菌絲、分生孢子和分生孢子梗的形態(tài)。
[0023] 1. 2 結(jié)果
[0024] 從被蟲生真菌自然侵染的蔗根鋸天牛幼蟲體上分離獲得野生菌株，在薩氏瓊脂培 養(yǎng)基（SDAY)上培養(yǎng)，并回接于蔗根鋸天牛幼蟲復(fù)壯獲得一菌株，對該菌株進(jìn)行單菌絲分離 獲得純化的菌株，即戴氏綠僵菌MetarhiziumtaiiLiang&LiuMTYJ141025。
[0025] 在SDAY培養(yǎng)基上菌落平展，絨毛狀，中部白色其外為墨綠色產(chǎn)孢輪帶，邊緣綠 豆汁黃，背面芥黃輪帶。瓶梗柱狀，具短尖8. 4 - 20