一種粉質(zhì)棒束孢ifyj141025及其應用
【技術領域】：
[0001] 本發(fā)明屬于微生物技術領域，尤其涉及一種粉質(zhì)棒束孢[Isaria farinosa(Holmskiold)Fries]IFYJ141025 及其應用。
【背景技術】：
[0002] 鹿根鋸天牛[Dorysthenesgranulosus(Thomson)]隸屬鞘翅目天?？?，為一種多 食性鉆蛀害蟲，主要分布在廣東、海南、云南、廣西等甘蔗種植區(qū)，該蟲以幼蟲蛀食蔗篼，嚴 重影響甘蔗生產(chǎn)，是危害甘蔗的重要害蟲。由于該蟲以幼蟲在蔗根取食危害和存活，目前， 對該蟲的防治較難?；瘜W殺蟲劑雖然具有見效快、成本低的優(yōu)點，但用藥防治次數(shù)過多，不 僅會引起甘蔗農(nóng)藥殘留，而且還會造成嚴重的環(huán)境污染，同時還可殺死鋸天牛的天敵，并使 目標害蟲產(chǎn)生抗藥性。這些負面影響使人們在防治中更加關注起生物防治。生物防治對 人、畜、植物安全，害蟲極少或不產(chǎn)生抗性，有利于環(huán)境保護。因此，研究蔗根鋸天牛的生物 防治，避免或減少因不合理使用化學農(nóng)藥所帶來的抗藥性問題，已成為蔗根鋸天?？茖W治 理和可持續(xù)控制的重要課題。
[0003] 粉質(zhì)棒束孢[Isariafarinosa(Holmskiold)Fries]屬于半知菌亞門絲孢綱棒束 孢屬。據(jù)記載，粉質(zhì)棒束孢在自然界能寄生于多種鱗翅目、雙翅目、同翅目、鞘翅目和膜翅目 的昆蟲，其中明確記載的寄主為一種小刺蛾蛹和幼蟲，而對蔗根鋸天牛的侵染還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種粉質(zhì)棒束孢IFYJ141025及其應用，旨在克服現(xiàn)有粉 質(zhì)棒束孢未發(fā)現(xiàn)能寄生蔗根鋸天牛的不足，通過生物技術手段防治蔗根鋸天牛，避免或減 少因不合理使用化學農(nóng)藥所帶來的抗藥性問題。
[0005] 本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種粉質(zhì)棒束孢[Isariafarinosa(Holmskiold)] IFYJ141025,于2014年12月4日保藏于中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心，保藏 號為CGMCCNo. 10138,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。
[0006] 本發(fā)明的進一步的目的在于提供上述粉質(zhì)棒束孢IFYJ141025在蔗根鋸天牛防治 方面的應用。本發(fā)明于2014年10月，在云南省元江縣甘蔗田間調(diào)查時發(fā)現(xiàn)粉質(zhì)棒束孢在 蔗根鋸天牛中大量發(fā)生流行，引起大量蔗根鋸天牛感染死亡。因此，該菌株是目前國內(nèi)首次 發(fā)現(xiàn)的寄生蔗根鋸天牛、流行性很強的蟲生真菌，在防治蔗根鋸天牛中具有很大的開發(fā)應 用前景。
[0007] 本發(fā)明從罹病蔗根鋸天牛幼蟲上分離獲得粉質(zhì)棒束孢野生菌株，將野生菌株回 接于蔗根鋸天牛幼蟲上復壯得到粉質(zhì)棒束孢菌株，對該菌株采用按常規(guī)方法進行單孢分 離、培養(yǎng)得到純的、致病力強的粉質(zhì)棒束孢菌。在查氏培養(yǎng)基上，25°C條件下培養(yǎng)至第12 天時，菌落直徑達35mm，呈稀疏絨毛狀，平展，中部淡鴨黃色，邊緣白色，背面中部橙黃色， 邊緣白色。分生孢子梗主要從基質(zhì)菌絲上長出，100-300X1. 0-2. 5ym;不規(guī)則分枝，其 上著生有由2-4個瓶梗組成的輪生體，瓶?；繑M橢圓形膨大，向上變細成明顯的頸部， 5-15X1. 2-2. 5ym，分生孢子橢圓形至梭形，光滑，透明，2. 0-3.OX1. 0-1. 8ym。
[0008] 相比于現(xiàn)有技術的缺點和不足，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明是初次從粉質(zhì) 棒束孢體上分離得到的菌株，培養(yǎng)比較簡單，生長快速，產(chǎn)孢量大。其分生孢子對蔗根鋸天 牛幼蟲致病力強，環(huán)保無污染、不易產(chǎn)生抗藥性，可以廣泛地用于蔗根鋸天牛的防治。
【附圖說明】：
[0009]圖1是粉質(zhì)棒束孢感染的蔗根鋸天牛及病原真菌的形態(tài)特征圖；其中，a圖為粉質(zhì) 棒束孢IFYJ141025在SDAY培養(yǎng)基上的培養(yǎng)癥狀；b圖為粉質(zhì)棒束孢IFYJ141025的分生孢 子。
【具體實施方式】：
[0010] 為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對 本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發(fā)明，并不 用于限定本發(fā)明。
[0011] 實施例一、病原菌的分離、鑒定
[0012] 1.1材料與方法
[0013] 1.1.1材料
[0014] 在云南省元江縣采集到被一種蟲生真菌侵染后的罹病蔗根鋸天牛幼蟲。
[0015] 查氏培養(yǎng)基（SDAY) :1 %蛋白胨+1 %酵母粉+4 %葡萄糖+1.5~2%瓊脂粉 +1OOOmT,水。
[0016] 無菌操作條件：所有的器皿和用具均經(jīng)高溫滅菌鍋（12rc，30min)，接種等操作 均在超凈工作臺內(nèi)進行。
[0017] 培養(yǎng)條件：置于25°C光照（12L:12D)恒溫箱中培養(yǎng)，待菌落形成后，轉(zhuǎn)移到試管 SDAY斜面，培養(yǎng)2~3天，轉(zhuǎn)入4°C冰箱儲存。
[0018] LL2病原菌的分離和純化
[0019] 分離：從罹病蔗根鋸天牛幼蟲尸體上分離病原菌。將罹病死亡的蔗根鋸天牛幼蟲 蟲體帶回實驗室，用5%次氯酸鉀溶液進行表面消毒。在溫度為25°C條件下培養(yǎng)，長出菌 絲和分生孢子后按常規(guī)方法進行單孢分離、培養(yǎng)得到純的、產(chǎn)孢能力強的菌株粉質(zhì)棒束孢 [Isariafarinosa(Holmskiold)Fries]，轉(zhuǎn)移到SDAY斜面上生長 3 ~4 天，在 4°C冰箱儲 存。
[0020] 復壯：將分離到的菌株在SDAY上培養(yǎng)5~7天后，產(chǎn)生大量分生孢子，再將該分生 孢子挑入含1%吐溫-80的無菌水，用玻璃棒攪拌均勻，得到適當濃度（10s孢子/mL)的孢 子懸浮液，用小型噴霧器均勻噴于蔗根鋸天牛幼蟲體表（以蟲體表面濕潤為度），保持相對 濕度80%以上。待蔗根鋸天牛幼蟲死亡后，收集死蟲于滅菌培養(yǎng)皿中并保濕，得到的幼蟲 蟲尸再按以上方法分離得到致病力更強的菌株。
[0021] 純化：挑取培養(yǎng)基上分生孢子粉，再次接種在新的培養(yǎng)基上。如此培養(yǎng)2~3代， 菌株就被純化。
[0022] 1.1. 3病原菌的鑒定
[0023]根據(jù)病原菌的培養(yǎng)性狀、菌絲和分生孢子的形態(tài)進行鑒定。利用40X10倍顯光學 微鏡，鏡檢菌絲、分生孢子的形態(tài)。
[0024] 1. 2 結(jié)果
[0025] 從被蟲生真菌自然侵染的蔗根鋸天牛幼蟲蟲體上分離獲得粉質(zhì)棒束孢野生菌株， 在薩氏瓊脂培養(yǎng)基（SDAY)上培養(yǎng)，并回接于蔗根鋸天牛幼蟲復壯獲得一菌株，對該菌株 進行單菌絲分離獲得純化的菌株，即粉質(zhì)棒束孢[Isariafarinose(Holmskiold)Fries] IFYJ141025〇
[0026] 在光學顯微鏡（400倍）下，如圖1所示，可以看到分生孢子梗主要從基質(zhì)菌絲上 長出，100-300X1. 0-2. 5ym;不規(guī)則分枝，其上著生有由2-4個瓶梗組成的輪生體，瓶梗基 部擬橢圓形膨大，向上變細成明顯的頸部，5-15X1. 2-2. 5ym，分生孢子橢圓形至梭形，光 滑，透明，2. 0-3.OX1. 0-1. 8ym。
[0027] 根據(jù)田間感染癥狀、采集罹病蟲體室內(nèi)分離觀察，并根據(jù)