一種降血糖益生菌制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，具體涉及一種降血糖益生菌制劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是一種全身代謝性疾病，其特征是血糖水平的慢性增高，是由多種環(huán)境因 素和遺傳因素聯(lián)合作用導(dǎo)致的胰島素分泌不足或胰島素抵抗引起的疾病。糖尿病不積極治 療隨時間的延長會引發(fā)一系列的并發(fā)癥，如心腦血管疾病、視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、神經(jīng) 病變、肢端壞死等。隨著經(jīng)濟的發(fā)展、飲食結(jié)構(gòu)的改變，糖尿病發(fā)病率逐年上升，現(xiàn)在已經(jīng)成 為嚴重威脅人類健康的世界公共衛(wèi)生問題。中國糖尿病患者已經(jīng)達到9200萬，位居世界 第一，79. 4%的人45歲以后有糖尿病，給社會和經(jīng)濟帶來沉重的負擔(dān)。糖尿病分為1型和 2型，1型發(fā)病人群主要是青少年，因體內(nèi)不產(chǎn)胰島素需終身體外補充胰島素，2型發(fā)病人群 主要為中、老年人，發(fā)病原因主要是機體對胰島素敏感性下降或自身胰島素分泌相對不足， 95%以上的糖尿病患者屬于2型糖尿病。目前，糖尿病仍是一種無法完全治愈的疾病。對糖 尿病的預(yù)防采取四級預(yù)防措施，一級預(yù)防最重要，目的是減少糖尿病的發(fā)病率。國際糖尿病 聯(lián)盟（IDF)提出了糖尿病現(xiàn)代治療的5個要點，分別是：飲食控制，運動療法，血糖檢測，藥 物治療和糖尿病教育。臨床上雖然認識到采用飲食療法、運動療法和藥物治療等相結(jié)合的 方式治療糖尿病，但總體上還是以藥物治療為主，主要是胰島素和口服降糖藥，大致分為磺 脲類、雙胍類、中藥制劑、其他降糖藥及輔助用藥類，以控制血糖升高，減輕糖尿病的癥狀， 延緩糖尿病進一步惡化及并發(fā)癥的出現(xiàn)。
[0003] 有研究表明，腸道菌群在健康者、肥胖者和2型糖尿病者之間的組成存在差異性， 提示腸道菌群是影響機體代謝性疾病病理生理的可能因素，因此通過對腸道菌群的有效調(diào) 節(jié)來預(yù)防或治療由高脂飲食所引起的代謝性疾病是一行之有效的方法。"益生菌"是機體補 充攝入的具有活性的微生物，可以有效改善腸道菌群的平衡，對宿主產(chǎn)生良好的健康效應(yīng)。 大量研究表明，益生菌株具有調(diào)節(jié)體內(nèi)菌群平衡、提高機體免疫力、降低血清膽固醇、血壓、 血糖、抗癌等生理功能。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的之一是為提供一種具有降血糖功能的益生菌制劑及其制備方法，通 過調(diào)節(jié)腸道菌群來預(yù)防或治療由高脂飲食所引起的代謝性疾病，減少因服用藥物而帶來的 副作用。
[0005] 本發(fā)明提供一種降血糖益生菌制劑，包括嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus)BLCC2-0024,干酷乳桿菌（Lactobacilluscasei)BLCC2_0003 和嬰兒雙歧桿 菌（Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002,所述嗜酸乳桿菌BLCC2-0024 已于 2015 年 3月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCN0:M2015129;所述干酪乳桿 菌BLCC2-0003,已于2015年3月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC N0:M2015125;所述嬰兒雙歧桿菌BLCC3-0002,已于2015年3月18日保藏于中國典型培養(yǎng) 物保藏中心，保藏編號CCTCCN0:M2015124。
[0006] 進一步的，所述降血糖益生菌制劑包括粉劑、片劑和膠囊。
[0007] 進一步的，所述降血糖益生菌制劑在預(yù)防及輔助降血糖的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明還提供一種上述降血糖益生菌制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0009] 取菌株，經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化后，將活化后的菌株轉(zhuǎn)接到一級種子培養(yǎng)基中，制得一 級種子液；然后再將所述一級種子液轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng)基進行高密度培養(yǎng)；
[0010] 待所述發(fā)酵培養(yǎng)基中菌體密度達到10scfu/mL，收集發(fā)酵液；
[0011] 將所述發(fā)酵液離心，收集獲得菌體，加入保護劑，凍干成菌粉；
[0012] 將凍干菌粉按照一定的比例復(fù)配，加入低聚糖混合物，混合均勻即得到所述降血 糖益生菌制劑。
[0013] 進一步的，所述菌株包括嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024， 已于2015年3月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCN0:M2015129;干 酷乳桿菌（Lactobacilluscasei)BLCC2_0003,已于2015年3月18日保藏于中國典型培 養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCN0:M2015125 ;嬰兒雙歧桿菌（Bifidobacteriuminfantis) BLCC3-0002,已于2015年3月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC N0:M2015124〇
[0014] 進一步的，所述活化嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024 和干 酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)BLCC2-0003的斜面培養(yǎng)基均為MRS固體培養(yǎng)基，所述 MRS固體培養(yǎng)基以質(zhì)量分數(shù)計包括：葡萄糖2. 0%、檸檬酸銨0. 2%、乙酸鈉0. 5%、磷酸氫 二鉀0. 5%、硫酸錳0. 02%、硫酸鎂0. 05%、蛋白胨1. 0%、牛肉膏1. 0%、酵母膏0. 5%、土 溫-800. 1 %和瓊脂粉1. 5%，調(diào)pH5. 8~6. 0 ;所述一級種子培養(yǎng)基和所述發(fā)酵培養(yǎng)基均 為不含瓊脂的上述MRS液體培養(yǎng)基；所述MRS固體培養(yǎng)基活化培養(yǎng)條件為：25~40°C培養(yǎng) 22~26h;所述一級種子培養(yǎng)基培養(yǎng)條件為：25~40°C條件下，靜置培養(yǎng)12~24h;所述 發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)條件為：25~40°C條件下，間歇攪拌培養(yǎng)48~96h，攪拌速度為間歇攪拌 100 ~200r/min，5 ~20min/2h。
[0015] 進一步的，所述活化嬰兒雙歧桿菌（Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002 的 斜面培養(yǎng)基為TPY固體培養(yǎng)基，所述TPY固體培養(yǎng)基以質(zhì)量分數(shù)計包括：酪蛋白胨1%、大 豆蛋白胨0.5%、酵母粉0.25%、磷酸氫二鉀0.2%、MgCl2 ? 6H20 0.05%、氯化鈣0.015%、 ZnS04, 7H20 0.025 %、氯化鐵0.01%、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.005 %、葡萄糖1.5%、吐 溫-800. 1 %和瓊脂粉1. 5%，調(diào)節(jié)pH至6. 3~6. 6,115°C條件下滅菌20min;所述一級種子 培養(yǎng)基和上述發(fā)酵培養(yǎng)基均為不含瓊脂的上述TPY液體培養(yǎng)基；所述TPY固體培養(yǎng)基活化 培養(yǎng)條件為：32~40°C厭氧培養(yǎng)20~28h;-級種子培養(yǎng)液培養(yǎng)條件為：32~40°C條件下 靜置培養(yǎng)16~30h;發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)條件為：28~40 °C，初始pH值為6. 0~7. 0,發(fā)酵時間 為48~96h。
[0016] 進一步的，所述一級種子液轉(zhuǎn)接發(fā)酵培養(yǎng)基的接種量為卜5%。
[0017] 進一步的，所述保護劑以質(zhì)量百分比分計，包括：90_98 %的10 %脫脂奶粉和 2-10 %的丙三醇。
[0018] 進一步的，所述凍干菌粉的復(fù)配比例為干酪乳桿菌BLCC2-0003 :嗜酸乳桿菌 BLCC2-0024 :嬰兒雙歧桿菌BLCC3-0002 = 2-4 :2-5 :3-5,所述降血糖益生菌制劑產(chǎn)品中3 株菌菌落總數(shù)不少于2X109cfu/g。
[0019] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的降血糖益生菌制劑，其有效成分由嗜酸乳桿菌、 干酪乳桿菌和嬰兒雙歧桿菌復(fù)配組成，經(jīng)初步研究結(jié)果顯示，該降血糖益生菌制劑對糖尿 病及糖尿病并發(fā)癥中的心腦血管疾病具有預(yù)防和輔助治療的作用，具有廣闊的市場前景。 本發(fā)明的降血糖益生菌制劑的制備方法，操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0020] 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024 已于2015年3月 18日保藏于中國武漢，武漢大學(xué)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCN0:M2015129 ; 干酷乳桿菌（Lactobacilluscasei)BLCC2_0003，已于2015年3月18日保藏于中國武 漢，武漢大學(xué)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCN0:M2015125 ;嬰兒雙歧桿菌 (Bifidobacteriuminfantis)BLCC3_0002,已于2015年3月18日保藏于中國武漢，武漢大 學(xué)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCN0:M2015124。
【附圖說明】
[0021] 圖1本發(fā)明的降血糖益生菌制劑預(yù)防糖尿病發(fā)病動物實驗造模后各組血糖情況 圖；
[0022] 圖2本發(fā)明的降血糖益生菌制劑預(yù)防糖尿病發(fā)病動物實驗造模后各組肝糖原情 況圖；
[0023] 圖3本發(fā)明的降血糖益生菌制劑預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的動物實驗樣品保護下血糖 升尚情況；
[0024] 圖4本發(fā)明的降血糖益生菌制劑預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的動物實驗樣品對高血糖小 鼠體重的影響；
[0025] 圖5本發(fā)明的降血糖益生菌制劑預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的動物實驗灌胃樣品30d對高 血糖小鼠血液指標的影響。
【具體實施方式】
[0026] 下文將結(jié)合具體附圖詳細描述本發(fā)明具體實施例。應(yīng)當(dāng)注意的是，下述實施例中 描述的技術(shù)特征或者技術(shù)特征的組合不應(yīng)當(dāng)被認為是孤立的，它們可以被相互組合從而達 到更好的技術(shù)效果。
[0027] 實施例1 3株益生菌耐受人工胃液和人工腸液能力測定
[0028] 1. 1菌株耐受人工胃液能力的測定
[0029] 人工胃液的配制：準確量取20ml的lmol/L鹽酸加蒸餾水調(diào)節(jié)pH值為2. 5,加入 胃蛋白酶（lg/l〇〇ml)，充分溶解后，用孔徑為0. 22微米濾膜過濾除菌即可。
[0030] 耐受能力測定：菌液按2% (v/v)接種于模擬胃液中，在37°C條件下培養(yǎng)2h，取樣 進行平板菌落計數(shù)，以〇h活菌數(shù)為對照，計算菌株存活率。
[0031] 1. 2菌株耐受人工腸液能力的測定
[0032] 人