;配制 固體培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0021] 培養(yǎng)液成份為：葡萄糖44 g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12 g/L，酵母提取物5 g/L， (NH4) 2H P04 15 g/L, KH2P0 4 7.5 g/L. MgS04 . 7H20 0.8 g/L, NaCl 0.1 g/L; pH7. l〇
[0022] 濕酵母細(xì)胞制備過程如下：近平滑假絲酵母ATCC 96142經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到 種子液。5L發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至27°C，將近平滑假絲酵母 種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為6. 5%，通氣比為1VAV分鐘），27°C培養(yǎng)45小時(shí)，用過濾 式離心機(jī)離心得到濕酵母細(xì)胞，用作生物催化反應(yīng)催化劑。
[0023] 生物催化轉(zhuǎn)化：5L底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為7. 4,加入 底物2-氟苯乙酮，使?jié)舛葹?0 g/L，麥芽浸膏22 g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚 15. 5g/L，葡萄糖21g/L、麥芽糖33g/L、異丙醇5. 5%V/V (體積濃度），121°C高壓滅菌30分 鐘；冷卻至28°C時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?2g/L，通氣比為0. 16V/ (V分鐘)，進(jìn)行生物 催化反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為64小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸 乙酯，得到產(chǎn)物（S) -2-氟苯乙醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98%，產(chǎn)品收率96%，對(duì)映體過量率99%。
[0024] 實(shí)施例3 種子培養(yǎng)基成份為：酵母提取物10 g/L，葡萄糖20 g/L，蛋白胨20 g/L，pH7. 1;配制 固體培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0025] 培養(yǎng)液成份為：葡萄糖40 g/L，木糖7. 5g/L，玉米胚芽粉11 g/L，酵母提取物 4. 5 g/L, (NH4) 2H P04 13 g/L, KH2P0 4 7 g/L. MgS04 . 7H20 0. 75 g/L, NaCl 0. 09 g/ L; pH7. l〇
[0026] 濕酵母細(xì)胞制備過程如下：近平滑假絲酵母ATCC 96142經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到 種子液。10L發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至28°C，將近平滑假絲酵母 種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為6. 3 %，通氣比為0. 8VA V分鐘），28 °C培養(yǎng)41小時(shí)，用過 濾式離心機(jī)離心得到濕酵母細(xì)胞，用作生物催化反應(yīng)催化劑。
[0027] 生物催化轉(zhuǎn)化：10L底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為7. 4,加入底 物2-氟苯乙酮，使?jié)舛葹?5g/L，麥芽浸膏22 g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚15g/ L，葡萄糖20g/L、麥芽糖36g/L、異丙醇5%V/V (體積濃度），121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至 28°C時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?1g/L，通氣比為0. 16V/(V分鐘），進(jìn)行生物催化反應(yīng)，反 應(yīng)時(shí)間為62小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸乙酯，得到產(chǎn) 物（S)-2-氟苯乙醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98. 5%，產(chǎn)品收率96. 5%，對(duì)映體過量率99%。
[0028] 實(shí)施例4 種子培養(yǎng)基成份為：酵母提取物10 g/L，葡萄糖20 g/L，蛋白胨20 g/L，pH7. 1;配制 固體培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0029] 培養(yǎng)液成份為：葡萄糖42 g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12 g/L，酵母提取物5 g/ L, (NH4) 2H P04 15 g/L, KH2P0 4 7.5 g/L. MgS04 . 7H20 0.75 g/L, NaCl 0.1 g/L; pH7. l〇
[0030] 濕酵母細(xì)胞制備過程如下：近平滑假絲酵母ATCC 96142經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到 種子液。10L發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至27°C，將近平滑假絲酵母 種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為6. 5%，通氣比為0. 9VAV分鐘），27°C培養(yǎng)44小時(shí)，用過 濾式離心機(jī)離心得到濕酵母細(xì)胞，用作生物催化反應(yīng)催化劑。
[0031] 生物催化轉(zhuǎn)化：20L底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為7. 4,加入底 物2-氟苯乙酮，使?jié)舛葹?8g/L，麥芽浸膏22 g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚16g/ L，葡萄糖23g/L、麥芽糖30g/L、異丙醇6%V/V (體積濃度），121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至 27°C時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?9g/L，通氣比為0. 15V/(V分鐘)，進(jìn)行生物催化反應(yīng)，反 應(yīng)時(shí)間為61小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸乙酯，得到產(chǎn) 物（S) -2-氟苯乙醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率99%，產(chǎn)品收率96. 5%，對(duì)映體過量率99%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種近平滑假絲酵母細(xì)胞生物催化制備（S)-2-氟苯乙醇的方法，其特征在于反 應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，pH為7. 4,加入底物2-氟苯乙酮，使底物2-氟苯乙酮添加 量為80-90 g/L，麥芽浸膏22-26 g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚15-16g/L，葡萄 糖20-23g/L、麥芽糖30-36g/L、異丙醇5-6%V/V，121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至27-28°C 時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?8-82g/L，通氣比為0. 15-0. 16V/ (V分鐘），進(jìn)行生物催化 反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為59-64小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸 乙酯，得到產(chǎn)物（S) -2-氟苯乙醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98-99%，產(chǎn)品收率96-97%，對(duì)映體過量率 98.5-99 %〇2. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于濕酵母細(xì)胞制備過程如下：近平滑假絲酵母 ATCC 96142,經(jīng)斜面、搖瓶、種子罐培養(yǎng)得到種子液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌 30分鐘，冷卻至27-28°C，將近平滑假絲酵母種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為6-6. 5%，通 氣比為0. 5-1V/ (V分鐘），27-28°C培養(yǎng)42-45小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心得到濕酵母細(xì)胞， 用作生物催化反應(yīng)催化劑；發(fā)酵罐中培養(yǎng)液成份為：葡萄糖37-44 g/L，木糖7-8g/L，玉 米胚芽粉 10-12 g/L，酵母提取物 4-5 g/L，（NH4) 2H PO4 12-15 g/L，KH2PO4 6.5-7.5 g/ L. MgSO4 .7H20 0.7-0.8 g/L，NaCl 0.08-0.1 g/L; pH7. 1。
【專利摘要】一種近平滑假絲酵母細(xì)胞生物催化制備？(S)-2-氟苯乙醇的方法，反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，用近平滑假絲酵母細(xì)胞進(jìn)行生物催化反應(yīng)，產(chǎn)品收率高，對(duì)映體過量率高，解決了現(xiàn)有方法生產(chǎn)的困難。
【IPC分類】C12P7/22, C12R1/72
【公開號(hào)】CN105039430
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510560626
【發(fā)明人】梁方方, 劉均洪
【申請(qǐng)人】青島科技大學(xué)
【公開日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年9月7日