一種新型二萜醇、其制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種新型二萜醇、其制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀粉背蕨WeyriiojDteri1? (Gmel. ) Fee，為中國蕨科粉背蕨屬植物，又 稱通經(jīng)草，具有活血調(diào)經(jīng)，止咳等功效，用于治療月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉腹痛，赤白帶下，肺癆咳嗽。 天然產(chǎn)物具有結(jié)構(gòu)多樣的特點(diǎn)，然而尚未報道從通經(jīng)草內(nèi)提取分離到生物活性良好的單體 化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明提供了一種全新結(jié)構(gòu)的二萜醇化合物，命名為粉背蕨素 B，同時提供其從銀 粉背蕨中提取的方法和在抗腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的二萜醇化合物結(jié)構(gòu)為式一所示，化學(xué)式C2qH32O 3。
[0005] 式一
本發(fā)明同時提供所述化合物的藥用鹽。
[0006] 本發(fā)明的化合物的制備方法為，從銀粉背蕨中提取，具體方法為： 步驟（1)浸提：稱取通經(jīng)草的干燥全草，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的乙醇回流提取，提取液用 16層紗布濾過，合并濾液，減壓濃縮至藥材量的2-5倍體積，以4000rpm離心5-10分鐘，上 層液依次用等倍體積的環(huán)己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分配提取，回收溶劑，分別得到環(huán)己 烷、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物； 步驟（2)初級分離：以氯仿-甲醇（V/V=l:l)的混合溶劑溶解步驟（1)所得氯 仿提取物，加入相對于氯仿提取物1-2倍質(zhì)量份的硅膠拌勻，揮去溶劑，得到上樣樣 品，所述上樣樣品上硅膠色譜柱，所述硅膠色譜柱選用200-300目硅膠，所述硅膠色 譜柱內(nèi)硅膠的質(zhì)量為上樣量的50-100倍，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫 (5:1 - 4:1 - 3:1 - 2:1 - 1:1 - 0:1，V/V)，通過薄層色譜跟蹤檢識，收集各梯度組分；所 述上樣量為氯仿提取物和上樣硅膠的總量。
[0007] 步驟（3)次級分離：取步驟（2)石油醚-乙酸乙酯（I: 1)混合溶劑洗脫部分，減壓 回收溶劑濃縮樣品，所得樣品拌入1-2質(zhì)量份硅膠，拌樣，揮干溶劑，上次級硅膠柱，所述次 級硅膠柱內(nèi)硅膠質(zhì)量為拌樣后樣品質(zhì)量的50-100倍，用環(huán)己烷-氯仿一環(huán)己烷-氯仿-甲 醇（10:1 - 10:2 - 10:3:0. 5 - 10:4:1，V/V)的混合溶劑洗脫，收集環(huán)己烷-氯仿-甲醇 (10:3:0. 5 )洗脫部分，減壓回收溶劑，得到浸膏； 步驟（4)反相分離：步驟（3)所得浸膏加質(zhì)量濃度為50%的乙醇，形成混懸液，所述混 懸液加至反相硅膠柱，所述反相硅膠柱內(nèi)反相硅膠質(zhì)量為所述浸膏質(zhì)量的100-150倍，用 30%-60%的乙醇梯度洗脫（30%-40%-50%-60%)，收集40%乙醇洗脫部分，減壓濃縮，得到粗 晶； 步驟（5)重結(jié)晶：步驟（4)所得粗晶用甲醇溶解，進(jìn)行重結(jié)晶，干燥，得到白色結(jié)晶狀的 單體化合物，即為式一結(jié)構(gòu)的化合物。
[0008] 優(yōu)選的，步驟（1)中回流提取為兩次，分別為15倍于通經(jīng)草樣品體積回流2h和10 倍體積回流Ih。
[0009] 優(yōu)選的，其特征在于，步驟（1)以超聲提取代替乙醇回流提取，超聲提取時間為40 min〇
[0010] 經(jīng)現(xiàn)代波譜技術(shù)鑒定，由上述方法所得化合物的結(jié)構(gòu)為式一所示，經(jīng)結(jié)構(gòu)查新鑒 定該化合物為新結(jié)構(gòu)化合物，命名為粉背蕨素 B。
[0011] 本發(fā)明還提供了該化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的有益效果在于： (1) 貝殼杉烷型二萜類化合物具有良好的生物活性，本發(fā)明提供了一種新結(jié)構(gòu)的二萜 類化合物，豐富了二萜化合物的結(jié)構(gòu)類型； (2) 本發(fā)明從銀粉背蕨中利用天然產(chǎn)物化學(xué)手段對其化學(xué)成分進(jìn)行分離提純，操作簡 單可控，以此方法獲得的貝殼杉烷型二萜類化合物純度高，利用本制備方法得到的新型二 萜類化合物為從未在通經(jīng)草化學(xué)成分中報道過的化合物類型，對銀粉背蕨今后的化學(xué)成分 研究提供了新的研究方向和思路； (3) 本發(fā)明對所述新結(jié)構(gòu)的貝殼杉烷型二萜類化合物進(jìn)行抗腫瘤細(xì)胞活性檢測，其對 HL-60和H0-8910細(xì)胞表現(xiàn)出良好的抑制活性，該化合物具有良好的抗腫瘤活性，為抗腫瘤 藥物的研發(fā)提供了一種新的先導(dǎo)化合物，對抗腫瘤的研究具有一定的推動作用，具有廣闊 的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0013] 圖1為本發(fā)明化合物的1H-NMR譜； 圖2為本發(fā)明化合物的13C-NMR譜； 圖3為本發(fā)明化合物的1H-1H COSY譜； 圖4為本發(fā)明化合物的HMBC譜； 圖5為本發(fā)明化合物的HMQC譜； 圖6為本發(fā)明化合物的NOESY譜。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1化合物的制備 稱取通經(jīng)草干燥全草I. 5kg，用80%乙醇回流提取2h，80%乙醇與通經(jīng)草的體積比 15:1，收集提取液，剩余樣品加入10倍體積的80%乙醇回流提取lh，收集提取液；合并兩次 提取液，濾過，合并濾液，減壓濃縮至2-5倍體積（v/w)，4000rpm離心5分鐘，上層液依次用 等倍體積的環(huán)己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分配提取，回收溶劑，同時得到環(huán)己烷、氯仿、乙 酸乙酯、正丁醇部分的提取物。
[0015] 所得氯仿提取物20. 6g，加入氯仿-甲醇（1:1，V/V)的混合溶劑使提取物溶解，加 入30g硅膠拌勻，上硅膠色譜柱，所述硅膠色譜柱規(guī)格為內(nèi)徑100mm，使用200目硅膠5Kg， 用石油醚-乙酸乙酯（5:1 - 4:1 - 3:1 - 2:1 - 1:1 - 0:1)混合溶劑洗脫，通過薄層色 譜跟蹤檢識，分份收集。
[0016] 取上述石油醚-乙酸乙酯（1:1)混合溶劑洗脫部分的樣品（4倍柱體積)，減壓回收 溶劑，濃縮至近干得浸膏5. 2g，拌入硅膠10g，揮干溶劑。另取硅膠3kg，裝入硅膠柱，所述硅 膠柱的規(guī)格為80mmX 1000mm，樣品上柱。用環(huán)己烷-氯仿一環(huán)己烷-氯仿-甲醇（2:1 - 1: 1 -1:1:0. 1 - 1:2:0. 2-1:2:0. 5)的混合溶劑洗脫，收集環(huán)己烷-氯仿-甲醇（1:2:0. 2)洗 脫部分（2-4倍柱體積)，減壓回收溶劑，得到浸膏0. 87g。
[0017] 上述浸膏加50%乙醇使成混懸液，加至100倍質(zhì)量份的反相硅膠柱上，用30%-60% 的乙醇梯度洗脫，收集40%乙醇洗脫部分，減壓回收溶劑，得到粗的結(jié)晶183mg。
[0018] 粗晶用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，干燥，得到白色結(jié)晶狀的單體化合物144mg。
[0019] 白色針狀或片狀結(jié)晶溶于氯仿、甲醇，硫酸乙醇顯色為紫紅色。UV在198nm處有最 大吸收，ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 287 [M-20H]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)，推斷該 化合物分子式為QwH32O3。
[0020] 13C-NMR (DMSO)譜中，在d 7. 6-154. 4的范圍內(nèi)共出現(xiàn)20個碳信號峰，其中d 23. 8、30· 5、34· 1、41· 6、45· 3、65· 1、106· 4 為二級碳，d 39. 2、43· 7、50· 9、73· 9、80· 9、132· 4 為三級碳，d 41. 1、44. 8、135. 7、154. 4