一種從虎杖中提取、分離純化大黃素及大黃素甲醚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從虎杖中提取、分離純化大黃素及大黃素 甲醚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 虎杖為寥科寥屬植物虎杖ciAspii/aiiM? Sieb. et Zucc.的干燥根莖， 性寒、味苦，歸肝、肺、膽經(jīng)，有祛風(fēng)利濕、祛痰止咳、清熱解毒、活血化瘀的功效，中醫(yī)臨床用 于治療濕熱黃疸、肺熱咳嗽、瘡癰腫毒、關(guān)節(jié)痹痛、經(jīng)閉經(jīng)痛、水火燙傷、跌打損傷等癥。藥理 研究表明虎杖具有強心、保肝、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗炎等多種藥理作用?；瘜W(xué) 成分研究表明其主要成分有白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、大黃素、大黃素甲醚等。大黃素和大黃 素甲醚等蒽醌類化合物具有抗炎、抑菌、抗病毒及抗腫瘤作用。據(jù)文獻報道，分離純化虎杖 中蒽醌類化合物的方法主要有反復(fù)硅膠柱層析法及高速逆流色譜法，硅膠柱層析法的操作 過程繁瑣，回收率較低，經(jīng)常使用氯仿、苯等毒性較強的有機溶劑；在高速逆流色譜法中溶 劑系統(tǒng)的選擇比較困難，缺乏理論指導(dǎo)。因此，建立一種高效快速的提取、分離純化虎杖中 蒽醌類化合物的方法對于深化虎杖的藥理作用研究及完善質(zhì)量控制體系均具有重要的意 義。本發(fā)明提供了一種高效、快速、簡便的從虎杖中提取、分離純化大黃素及大黃素甲醚的 方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種高效、快速、簡便的從虎杖中提取、分離純化大黃素及 大黃素甲醚的方法。
[0004] 本發(fā)明的方案如下： 從虎杖中提取、分離純化大黃素及大黃素甲醚的方法，其步驟為： (1)提?。簩⒒⒄人幉姆鬯椋糜袡C溶劑進行提取，過濾，提取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物。
[0005] (2)萃?。簩⒒⒄却痔嵛锓峙湓谑兔?乙酸乙酯-甲醇-水（2:5:6:10，V/V) 中，振搖，達分配平衡后將有機相與水相分離，有機相與水相分別減壓濃縮得樣品1和樣品 2〇
[0006] (3)高效液相色譜分離分析：用分析型高效液相色譜儀對樣品1的組成進行分離 分析，色譜柱為C18柱（250 mmX4.6 mm I.D·，5 μπι)，流動相為甲醇-水（90:10，V/V)，流 速為I. 0 mL/min，檢測波長為254 nm，柱溫為室溫。
[0007] (4)半制備型分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對樣品1中的成分進行分離 純化，色譜柱為C18柱（250 mmX25.4mmI.D·，10 μπι)，流動相為甲醇-水（85:15，V/V)， 檢測波長為254 nm，柱溫為室溫。根據(jù)色譜圖手動收集目標組分餾分，減壓濃縮除去溶劑。
[0008] (5)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標組分餾分經(jīng)減壓濃縮后用甲醇 溶解，其純度用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件見步驟（3)，分析結(jié)果表明2種化合物 的純度都達到了 98%以上。經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是大黃素和大黃素甲醚。
[0009] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（I)提取方法為冷浸、超聲和加熱回流(優(yōu)選 超聲)。
[0010] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取溶劑為水、乙醇、乙醚和石油醚(優(yōu) 選乙醇)。
[0011] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取用乙醇-水溶液的濃度為50~95% (優(yōu)選95%)。
[0012] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取時溶劑的用量為6-15倍量(優(yōu)選8 倍量)。
[0013] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取次數(shù)為2-5次(優(yōu)選4次)。
[0014] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取時間為15-60分鐘(優(yōu)選30分鐘）。
[0015] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（2)對蒽醌進行萃取富集過程中所使用的溶 劑系統(tǒng)(石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水）中各種溶劑的體積比為2:5:1:9、2:5:4:6、2:5:6:4 和 2:5:6:10 (優(yōu)選 2:5:6:10)。
[0016] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（3 )高效液相色譜分離分析所用甲醇的濃度 為 85%-95% (優(yōu)選 90%)。
[0017] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（4)半制備型高效液相色譜分離純化所用甲 醇的濃度分別為90%-80% (優(yōu)選85%)。
[0018] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（4)分離純化用甲醇-水溶液進行洗脫，洗 脫液的流速為20-30 mL/min (優(yōu)選25 mL/min)。
[0019] 本發(fā)明涉及一種從虎杖中提取、分離純化大黃素和大黃素甲醚的方法，步驟為： (1)提?。簩⒒⒄人幉姆鬯椋糜袡C溶劑進行提取，過濾，提取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物。（2) 萃?。簩⒋痔嵛锓峙湓谑兔?乙酸乙酯-甲醇-水（2:5:6:10，V/V)中，振搖，達分配平 衡后將有機相與水相分離，有機相與水相分別減壓濃縮得樣品1和樣品2。（3)高效液相色 譜分離分析：用分析型高效液相色譜儀對樣品1的組成進行分離分析，色譜柱為C18柱（250 mmX4.6 mm I.D·，5 μπι)，流動相為甲醇-水（90:10，V/V);流速為LO mL/min，檢測波長 為254 nm，柱溫為室溫。（4)半制備型分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對粗提物中的 成分進行分離純化，色譜柱為(^柱（25〇1111]1\25.4 1111]11.0.，10以1]1)，流動相為甲醇-水 (85 :15，V/V)，檢測波長為254 nm，柱溫為室溫。根據(jù)色譜圖手動收集目標組分餾分，減壓 濃縮除去溶劑。（5)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標組分餾分減壓濃縮后用 甲醇溶解，其純度用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件見步驟（3)，分析結(jié)果表明2種化 合物的純度都達到了 98%以上。經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是大黃素和大黃素甲 醚。該工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴重危害，綜合成本低。
[0020] 本發(fā)明從虎杖中提取、分離純化大黃素和大黃素甲醚，首先用95%乙醇超聲提取 將蒽醌類成分提取出來，可以使強極性成分不被溶出；將粗提物分配在石油醚-乙酸乙 酯-甲醇-水體系中，振搖，大黃素和大黃素甲醚主要分布在有機相中；接下來，用分析型高 效液相色譜儀對有機相中的組成進行分離分析；然后，用半制備型高效液相色譜儀對有機 相的成分進行分離純化就可以得到2種化合物；最后，用高效液相色譜法對化合物的純度 進行測定，根據(jù)核磁共振波譜分析對化合物的結(jié)構(gòu)進行鑒定。該方法所得目標化合物純度 高，雜質(zhì)含量極低，這一點可從圖3至圖4中看出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢： (1)用95%乙醇超聲提取虎杖中的化學(xué)成分具有提取效率高、速度快及操作簡單等優(yōu) 點?；⒄戎休祯膫鹘y(tǒng)提取方法是采用硫酸水解，苯、氯仿或乙醚萃取的方法，這種提取方 法的效率高，但是使用了毒性較強的有機溶劑，對環(huán)境和人體均不友好。
[0021 ] (2)將粗提物分配在石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（2:5:6:10，V/V)體系中對大 黃素和大黃素甲醚進行富集是利用了 "相似相溶"的原理。大黃素和大黃素甲醚的極性較 小，主要分布在有機相中，而白藜蘆醇、白藜蘆醇苷及大黃素-8-0-β-D-葡萄糖苷的極性 較大，主要分布在水相中。這樣，通過簡單的萃取操作就可以按照物質(zhì)的極性將粗提物分成 樣品1和樣品2兩部分，樣品1主要含有大黃素和大黃素甲醚，其組成較粗提物簡單得多， 最大限度降低了制備型C18柱被污染的程度。
[0022] (3)用高效液相色譜法對虎杖粗提物的組成進行分離分析，用甲醇-水作流動相 等度洗脫可以在短時間內(nèi)對2種目標化合物實現(xiàn)基線分離。
[0023] (4)用半制備型高效液相色譜法對化合物進行分離純化，可以得到2種高純度單 體化合物，方法操作簡單，效率高，工藝周期短，節(jié)省試劑，降低了生產(chǎn)成本。
[0024] (5)用高效液相色譜法對制備所得化合物的純度進行測定，該方法準確、快速。
[0025] (6)提取、分離、純化過程中僅用到乙醇、石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水，不使用對環(huán) 境和人體危害大的氯仿、苯等有機溶劑，甲醇-水洗脫液經(jīng)減壓蒸餾回收后可以重復(fù)使用 多次，綠色環(huán)保。
[0026] (7)優(yōu)化了層析方法的條件(洗脫液的組成和流速)，使化合物的純度和純化效率 都大為提尚。
【附圖說明】
[0027] 圖1是虎杖粗提物的分析型高效液相色譜圖。
[0028] 圖2是虎杖粗提物的半制備型高效液相色譜圖。
[0029] 圖3是大黃素的高效液相色譜圖及紫外光譜圖。
[0030] 圖4是大黃素甲醚的高效液相色譜圖及紫外光譜圖。
[0031] 在圖1-4中，I :大黃素 ；II :大黃素甲醚。
【具體實施方式】
[0032] 下面結(jié)合實施例和附圖詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護范圍不被此限制。實