一鍋法從發(fā)酵液中提取利普司他汀的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種利普斯他汀的純化方法。
【背景技術】
[0002]利普斯他汀(Lipstatin)是毒三素鏈霉菌(Streptomyces toxytricini)的代謝產(chǎn)物，是人體胃腸道胰腺脂肪酶抑制劑，減少人體對是高脂食物的分解和吸收，本身可以作為減肥藥物，但是由于利普斯他汀是不飽和脂肪酸，在空氣中易氧化，不穩(wěn)定，羅氏公司通過加氫反應將利普斯他汀合成四氫衍生物，即是著名減肥藥奧利司他。
[0003]目前，奧利司他的生產(chǎn)工藝有兩種:一種是全化學合成法，工藝路線長、收率低、成本較高；第二種是微生物半合成法，即先利用毒三素鏈霉菌發(fā)酵生成利普斯他汀，再通過化學加氫反應生成奧利司他。在微生物半合成法中，利普斯他汀的分離純化成本幾乎占整個純化成本的一半，而且純化后利普斯他汀的質(zhì)量對奧利司他的合成成本和質(zhì)量有重要影響。
[0004]專利CN102993134A公開了一種利普斯他汀的提純方法。該方法通過萃取、濃縮、溶解、過濾、柱層析和結晶等步驟分離純化利普斯他汀，得到的利普斯他汀重量含量75-85%，HPLC純度>97%，收率72%。該方法雖然純化效果較好，但步驟較多，工藝復雜，需要多種設備投入，生產(chǎn)成本較高。專利CN102558104A公開了一種利用超臨界COf流體萃取，并通過短程蒸餾獲得純度為94%的利普斯他汀，收率為50%。該方法不適宜工業(yè)化大規(guī)模應用，設備投入大，生產(chǎn)成本高。另外，胡為民等描述了一種利普斯他汀提取工藝，包括萃取、超聲細胞破碎、乙酸乙酯萃取、正相色譜層析以及制備柱色譜制備，獲得純度94%的利普斯他汀。該方法步驟冗長，且未說明含量和收率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明公開的利普斯他汀提取工藝可以在一個多功能提取罐中實現(xiàn)，減少了提取純化步驟，提高了提取收率，并減少了設備投資，降低了生產(chǎn)成本；同時純化后的利普斯他汀質(zhì)量能滿足下游奧利司他的制備要求。
[0006]本發(fā)明的技術方案主要是毒三素鏈霉菌發(fā)酵利普司他汀結束后，將發(fā)酵液轉移至多功能罐中，加入無機酸調(diào)節(jié)pH至1.5-3.0，加熱至45-65° C，保持30_60min，冷卻至常溫；加入1/3-1/2體積庚烷，萃取15-30 min,靜置分相，得庚烷相；加入I倍體積1_5%氯化鈉水溶液，洗滌多次，靜置分層，得庚烷相；減壓濃縮至1/2-1/3體積，減壓濃縮溫度45-55° C，加入I倍體積純凈水，洗滌多次，繼續(xù)減壓濃縮至1/4-1/6，降溫結晶，低溫壓濾得到利普斯他汀，含量不低于80%。
【具體實施方式】
[0007]本發(fā)明由下述實施例進一步說明，但本發(fā)明的技術方案并不限于如下實施例。
[0008]實施例1 (I)毒三素鏈霉菌發(fā)酵利普司他汀結束后，將15L發(fā)酵液轉移至50L多功能玻璃罐中，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.5，加熱至45° C，保持30min，冷卻至常溫。
[0009](2)向玻璃罐中加入1/2體積庚烷，攪拌轉速150rpm，萃取30 min，靜置分相，從底閥排除萃余相，得庚烷相。
[0010](3)加入I倍體積2.5%氯化鈉溶液，攪拌洗滌5min，靜置分層，排除下層水相，重復多次，直至下層澄清透亮，得上層庚烷相。
[0011](4)將庚烷相減壓濃縮至1/3體積，減壓濃縮溫度50° C，濃縮結束后加入I倍體積純凈水，重復洗滌，直至下層澄清透亮，得上層庚烷相。
[0012](5)將庚烷相繼續(xù)減壓濃縮至原體積1/6，緩慢降溫結晶，結晶溫度為-12° C，低溫壓濾得到利普斯他汀熔融晶體，經(jīng)HPLC測定利普斯他汀含量為81.5%，收率85%。
[0013]實施例2
(I)毒三素鏈霉菌發(fā)酵利普司他汀結束后，將15L發(fā)酵液轉移至50L多功能玻璃罐中，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.0，加熱至65° C，保持30min，冷卻至常溫。
[0014](2)向玻璃罐中加入1/2體積庚烷，攪拌轉速200rpm，萃取30 min，靜置分相，從底閥排除萃余相，得庚烷相。
[0015](3)加入I倍體積5%氯化鈉溶液，攪拌洗滌lOmin，靜置分層，排除下層水相，重復多次，直至下層澄清透亮，得上層庚烷相。
[0016](4)將庚烷相減壓濃縮至1/3體積，減壓濃縮溫度50° C，濃縮結束后加入I倍體積純凈水，重復洗滌，直至下層澄清透亮，得上層庚烷相。
[0017](5)將庚烷相繼續(xù)減壓濃縮至原體積1/4，緩慢降溫結晶，結晶溫度為-18° C，低溫壓濾得到利普斯他汀熔融晶體，經(jīng)HPLC測定利普斯他汀含量為83.3%，收率82.6%。
[0018]實施例3
(I)毒三素鏈霉菌發(fā)酵利普司他汀結束后，將15L發(fā)酵液轉移至50L多功能玻璃罐中，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0，加熱至55° C，保持30min，冷卻至常溫。
[0019](2)向玻璃罐中加入1/2體積庚烷，攪拌轉速200rpm，萃取30 min，靜置分相，從底閥排除萃余相，得庚烷相。
[0020](3)加入I倍體積3%氯化鈉溶液，攪拌洗滌lOmin，靜置分層，排除下層水相，重復多次，直至下層澄清透亮，得上層庚烷相。
[0021](4)將庚烷相減壓濃縮至1/2體積，減壓濃縮溫度55° C，濃縮結束后加入I倍體積純凈水，重復洗滌，直至下層澄清透亮，得上層庚烷相。
[0022](5)將庚烷相繼續(xù)減壓濃縮至原體積1/5，緩慢降溫結晶，結晶溫度為-9° C，低溫壓濾得到利普斯他汀熔融晶體，經(jīng)HPLC測定利普斯他汀含量為82.3%，收率84.6%。
【主權項】
1.一種一鍋法從發(fā)酵液中提取利普斯他汀的方法，其特征在于:毒三素鏈霉菌發(fā)酵利普司他汀結束后，將發(fā)酵液轉移至多功能罐中，加入無機酸調(diào)節(jié)PH至1.5-3.0，加熱至45-65° C，保持30-60min，冷卻至常溫；加入1/3-1/2體積庚烷，萃取15-30 min，靜置分相，得庚烷相；加入I倍體積1-5%氯化鈉水溶液，洗滌多次，靜置分層，得庚烷相；減壓濃縮至1/2-1/3體積，減壓濃縮溫度45-55° C，加入I倍體積純凈水，洗滌多次，繼續(xù)減壓濃縮至1/4-1/6，降溫結晶，低溫壓濾得到利普斯他汀，含量不低于80%。2.按照權利要求1所述的一鍋法從發(fā)酵液中提取利普斯他汀的方法，其特征在于:調(diào)節(jié)PH所用無機酸可以是稀鹽酸、稀硫酸、草酸中的一種，或多種。3.按照權利要求1所述的一鍋法從發(fā)酵液中提取利普斯他汀的方法，其特征在于:發(fā)酵液預處理溫度45-65° C，優(yōu)選50-58° C。4.按照權利要求1所述的一鍋法從發(fā)酵液中提取利普斯他汀的方法，其特征在于:氯化鈉溶液濃度為1_5%，優(yōu)選2.5-3%。5.按照權利要求1所述的一鍋法從發(fā)酵液中提取利普斯他汀的方法，其特征在于:結晶溫度為-3至-15° C，優(yōu)選-4至-8° C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種一鍋法從發(fā)酵液中提取利普司他汀的方法。毒三素鏈霉菌發(fā)酵利普司他汀結束后，將發(fā)酵液轉移至多功能提取罐中，加入無機酸調(diào)節(jié)pH至酸性并加熱處理，冷卻至常溫；加入庚烷萃取，靜置分相，得庚烷相；加入1倍體積氯化鈉溶液洗滌，靜置分層，得庚烷相；減壓濃縮至1/2-1/3體積，加入純凈水洗滌多次，繼續(xù)減壓濃縮至原體積1/4-1/6，降溫結晶，低溫壓濾得到利普斯他汀，含量不低于80%。
【IPC分類】C07D305/12
【公開號】CN105061365
【申請?zhí)枴緾N201510422042
【發(fā)明人】董惠鈞, 李榮榮, 王素珍
【申請人】聊城大學, 董惠鈞
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年7月20日