一種丙二?；藚⒃碥誖e及其制備方法
【專利說明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域： 本發(fā)明公開一種丙二酰基人參皂苷Re及其制備方法，從人參鮮花蕾中提取和分離丙 二酰基人參皂苷Re (M-Re)，屬于中藥單體提取技術(shù)領(lǐng)域。
[0002]
【背景技術(shù)】： 人參皂苷是人參中重要的活性成分，現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)的人參皂苷的種類有180余種，其中 丙二酰基人參皂苷是在葡萄糖的6"位鏈接一個(gè)丙二?；且活悩O性大、親水性強(qiáng)、極易 溶于水的酸性皂苷。但是該分子中酰基鍵極不穩(wěn)定，很容易發(fā)生水解或脫羧反應(yīng)，成為相應(yīng) 的中性人參皂苷或乙酰化人參皂苷。
[0003] 現(xiàn)已分離得到的丙二?；藚⒃碥罩饕蠱-Rbl，M-Rb2, M-Rc，M-Rd及M-NR4,已 通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)儀等手段檢測分析了丙二酰基人參皂苷Re的存在，尚未有人分離得 到其單體。
[0004] 中國專利（申請(qǐng)?zhí)?00510016845. 0,201310046482. X)先后公開了兩種分離制備 丙二?；藚⒃碥仗崛∥锏姆椒?，尚未有對(duì)于丙二酰基人參皂苷單體分離制備的專利報(bào) 道。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明提供了一種丙二?；藚⒃碥誖e及其制備方法，能夠簡單、高效、快速提純丙 二?；藚⒃碥誖e。
[0006] 本發(fā)明所述的一種丙二?；藚⒃碥誖e，具有以下結(jié)構(gòu)式：
分子式：C51HS4021;分子量：1032。
[0007] 本發(fā)明所述的一種丙二?；藚⒃碥誖e的制備方法，其特征在于包括如下步驟 1)提?。簩⑷藚Ⅴr花蕾干燥裝柱，用80%~100%甲醇或乙醇進(jìn)行提取，濃縮提取液后 低溫放置沉降葉綠素； 2) 萃?。喝饪s提取液的上清液通過石油醚萃取去除葉綠素； 3) 富集：將步驟B的萃取液的下層加入到大孔吸附樹脂柱上吸附，先以水洗脫掉提取 液中的糖和無機(jī)鹽類，再以30%乙醇洗脫得丙二?；藚⒃碥誖e富集液； 4) 中壓硅膠柱層析：將步驟C的富集液經(jīng)硅膠柱層析進(jìn)行分離純化，用二氯甲烷：甲 醇：水進(jìn)行洗脫，根據(jù)TLC檢查圖合并丙二?；藚⒃碥障疵撘海?5) 制備：將步驟D的洗脫液濃縮后上制備液相，以乙腈水溶液進(jìn)行洗脫，根據(jù)紫外檢測 器譜圖接收洗脫液，洗脫液冷凍干燥，即得丙二?；藚⒃碥諉误wRe。
[0008] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟1中的甲醇用量為20~25倍的柱體積，濃縮溫 度為40°C，所述提取為滲漉提取，所述低溫為-KTC下。
[0009] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟2中萃取次數(shù)為3~4次，萃取次數(shù)少于3次， 葉綠素去除不完全，萃取次數(shù)多于4次，浪費(fèi)溶劑，增加成本。
[0010] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟3中所用的大孔樹脂型號(hào)為AB-8、D101B、 HPD-300等弱極性大孔樹脂中，所用的洗脫溶劑為30%乙醇。
[0011] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟4中采用體積比為4:1:0. 1-3:1:0. 1-2:1:0. 1 的二氯甲烷：甲醇：水進(jìn)行梯度洗脫，流速為4~8mL/min。
[0012] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟5中采用以20%乙腈水溶液進(jìn)行恒梯度洗脫。
[0013] 本發(fā)明的積極效果在于： 提供了一種丙二?；藚⒃碥誖e分離方法，將鮮人參花蕾提取液經(jīng)大孔樹脂柱層析、 中壓柱層析和制備液相分離純化得到了高純度的丙二酰基人參皂苷Re，提取純化中的濃縮 溫度控制在40°C以下，最后制備液相得到的洗脫液冷凍干燥，保證M-Re不發(fā)生降解；提供 的一步富集、兩步純化制得的單體M-Re純度在99%以上，提取工藝簡化，操作時(shí)間縮短，保 證M-Re不因操作繁瑣而大量損失，適合放大進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。具有分離工藝簡便、快速、經(jīng) 濟(jì)、高效的特點(diǎn)，為進(jìn)一步探究M-Re的藥理活性奠定了基礎(chǔ)。
[0014]
【附圖說明】： 圖1本發(fā)明所得到的M-Re質(zhì)譜圖；
【具體實(shí)施方式】： 下面將結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局 限于下列實(shí)施方式。實(shí)施例中未詳述的事項(xiàng)參見中藥化學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)工藝。
[0015] 實(shí)施例1: 將人參鮮花蕾低溫干燥后裝柱，以甲醇浸泡過夜，次日以20倍柱體積純甲醇進(jìn)行滲漉 提取，合并提取液，減壓濃縮至無醇味后放入-l〇°C冰箱中沉降大部分葉綠素，取上清液加 石油醚（I: I V/V)萃取3次，下層水溶液上大孔樹脂AB-8進(jìn)行吸附，先以8倍柱體積的水洗 脫除去提取液中少部分的糖和無機(jī)鹽類，再以7倍量柱體積的30%乙醇洗脫富集M-Re，富集 液濃縮后上Yamazen中壓硅膠柱層析，以二氯甲燒：甲醇：水（4:1:0. 1-3:1:0. 1-2:1:0. 1) 進(jìn)行洗脫，洗脫流速為4 mL/min，洗脫液40°C下減壓濃縮后上Varian制備液相以20%乙腈 進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)紫外檢測器譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫液低溫干燥，即得丙二酰基人參 皂苷Re，圖1為得到的M-Re的質(zhì)譜圖。
[0016] 實(shí)施例2: 將人參鮮花蕾低溫干燥后裝柱，以80%甲醇浸泡過夜，次日以25倍柱體積80%甲醇 進(jìn)行滲漉提取，合并提取液，減壓濃縮至無醇味后放入-l〇°C冰箱中沉降大部分葉綠素， 取上清液加石油醚（I: I V/V)萃取4次，下層水溶液上大孔樹脂HPD-300進(jìn)行吸附，先 以10倍柱體積的水洗脫除去提取液中少部分的糖和無機(jī)鹽類，再以8倍量柱體積的30% 乙醇洗脫富集M-Re，富集液濃縮后上Yamazen中壓硅膠柱層析，以二氯甲烷：甲醇：水 (4:1:0. 1-3:1:0. 1-2:1:0. 1)進(jìn)行洗脫，洗脫流速為5 mL/min，洗脫液40°C下減壓濃縮后 上Varian制備液相以20%乙腈進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)紫外檢測器譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫 液低溫干燥，即得丙二?；藚⒃碥誖e，其質(zhì)譜圖見圖1。
[0017] 實(shí)施例3: 將人參鮮花蕾低溫干燥后裝柱，以乙醇浸泡過夜，次日以24倍柱體積乙醇進(jìn)行滲漉提 取，合并提取液，減壓濃縮至無醇味后放入-l〇°C冰箱中沉降大部分葉綠素，取上清液加石 油醚（I: I V/V)萃取3次，下層水溶液上大孔樹脂DlOlB進(jìn)行吸附，先以11倍柱體積的水洗 脫除去提取液中少部分的糖和無機(jī)鹽類，再以9倍量柱體積的30%乙醇洗脫富集M-Re，富集 液濃縮后上Yamazen中壓硅膠柱層析，以二氯甲燒：甲醇：水（4:1:0. 1-3:1:0. 1-2:1:0. 1) 進(jìn)行洗脫，洗脫流速為6 mL/min，洗脫液40°C下減壓濃縮后上Varian制備液相以20%乙腈 進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)紫外檢測器譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫液低溫干燥，即得即得丙二?；?人參皂苷Re，其質(zhì)譜圖見圖1。
[0018] 實(shí)施例4: 將人參鮮花蕾低溫干燥后裝柱，以80%乙醇浸泡過夜，次日以22倍柱體積80%乙醇 進(jìn)行滲漉提取，合并提取液，減壓濃縮至無醇味后放入-l〇°C冰箱中沉降大部分葉綠素， 取上清液加石油醚（I: I V/V)萃取4次，下層水溶液上大孔樹脂AB-8進(jìn)行吸附，先以12 倍柱體積的水洗脫除去提取液中少部分的糖和無機(jī)鹽類，再以10倍量柱體積的30%乙 醇洗脫富集M-Re，富集液濃縮后上Yamazen中壓硅膠柱層析，以二氯甲烷：甲醇：水 (4:1:0. 1-3:1:0. 1-2:1:0. 1)進(jìn)行洗脫，洗脫流速為8 mL/min，洗脫液40°C下減壓濃縮后 上Varian制備液相以20%乙腈進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)紫外檢測器譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫 液低溫干燥，即得即得丙二?；藚⒃碥誖e，其質(zhì)譜圖見圖1。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種丙二酰基人參皂苷Re，其特征在于具有以下結(jié)構(gòu)式：分子式：C51HS4021;分子量：1032。2. 權(quán)利要求1所述的丙二?；藚⒃碥誖e的制備方法，其特征在于包括如下步驟： 1) 提?。簩⑷藚Ⅴr花蕾低溫干燥，用20~25倍量柱體積的80%~100%甲醇或乙醇進(jìn) 行滲漉提取，提取液合并，40°C下減壓濃縮到無醇味后放入冰箱-KTC下低溫沉降大部分葉 綠素； 2) 萃?。簩⑸鲜龀两岛蟮纳锨逡和ㄟ^石油醚萃取3~4次以去除殘留葉綠素； 3) 富集：將上述萃取液的下層加入到大孔吸附樹脂柱上吸附，先以水洗脫掉提取液中 少部分的糖和無機(jī)鹽類，再以30%乙醇洗脫富集M-Re ; 4) 中壓硅膠柱層析：將上述所得富集液經(jīng)中壓硅膠柱層析進(jìn)行分離純化，用二氯甲 烷：甲醇：水（4:1:0. 1-3:1:0. 1-2:1:0. 1)進(jìn)行洗脫，流速4~8mL/min，根據(jù)TLC檢查合并 丙二酰基人參皂苷洗脫液； 5) 上述洗脫液減壓濃縮后上制備液相，以20%乙腈水進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)液相色譜 圖接收目標(biāo)組分，洗脫液低溫干燥，即得丙二酰基人參皂苷單體Re。3. 如權(quán)利要求1所述的一種提取制備丙二?；藚⒃碥誖e的方法，其特征在于所述步 驟3)中所用大孔樹脂類型可以為AB-8、DlOlB或HPD-300等弱極性樹脂，以30%乙醇洗脫 進(jìn)行富集。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種丙二?；藚⒃碥誖e及其制備方法，將鮮人參花蕾提取液經(jīng)大孔樹脂柱層析、中壓柱層析和制備液相分離純化得到了高純度的丙二?；藚⒃碥誖e，提取純化中的濃縮溫度控制在40℃以下，最后制備液相得到的洗脫液冷凍干燥，保證M-Re不發(fā)生降解；提供的一步富集、兩步純化制得的單體M-Re純度在99%以上，提取工藝簡化，操作時(shí)間縮短，保證M-Re不因操作繁瑣而大量損失，適合放大進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。具有分離工藝簡便、快速、經(jīng)濟(jì)、高效的特點(diǎn)，為進(jìn)一步探究M-Re的藥理活性奠定了基礎(chǔ)。
【IPC分類】C07J17/00
【公開號(hào)】CN105061542
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510469832
【發(fā)明人】王玉帥, 王英平, 金銀萍, 高薇, 王佳, 鄭培和, 劉俊霞, 孫成賀, 曲正義, 趙景輝
【申請(qǐng)人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年8月4日