一種高效抑制禽源致病性大腸桿菌的乳酸桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一株新菌種及其在生物防控技術(shù)中的應(yīng)用，具體涉及一種高效抑制禽 源致病性大腸桿菌的乳酸桿菌及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 益生菌是可直接作為食物添加劑，并有益宿主健康的一類活的微生物。乳酸桿菌 是最常使用的一種益生菌，動(dòng)物若長期攝入足量的乳酸菌，乳酸菌可在動(dòng)物腸道內(nèi)穩(wěn)定定 植，改善腸道微生物生態(tài)平衡并抑制病原菌的入侵，保障動(dòng)物的免受疾病侵害，同時(shí)，一些 乳酸菌還有促進(jìn)消化，提高動(dòng)物增重的功效。乳酸菌在人類食品中應(yīng)用已經(jīng)非常廣泛，近些 年也不斷有乳酸菌制品用于禽類的飼養(yǎng)，為禽類養(yǎng)殖業(yè)帶來了更多的經(jīng)濟(jì)效益。
[0003]乳酸桿菌的種類有很多，例如Lactobacillussalivarius，Lactobacillus bulgaricus，Lactobacillusingluviei等，Lactobacillusingluviei是在合鳥子和鳥它鳥的 胃腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種乳桿菌，有研究發(fā)現(xiàn)，Lactobacillusingluviei可以影響體重的增 長，若提高Lactobacillusingluviei在腸道微生物中的含量，能夠顯著提高動(dòng)物的增重并 導(dǎo)致新陳代謝的改變。將Lactobacillusingluviei制成益生菌制劑，將有利于動(dòng)物的生 長和健康。
[0004] 大腸桿菌是一類兼性厭氧的革蘭氏陰性菌，大小為0.4~0.7ymX2~3ym，菌體 一般呈直桿狀，兩端鈍圓，散在或成對(duì)，不產(chǎn)生芽孢，是一種條件致病菌。大多數(shù)大腸桿菌在 正常條件下是人和動(dòng)物腸道內(nèi)的共棲菌，在正常條件下是不致病的，但少數(shù)大腸桿菌有致 病性，與人和動(dòng)物的大腸桿菌病密切相關(guān)。被致病性大腸桿菌感染的病雞精神沉郁，食欲下 降，羽毛粗亂，消瘦，可導(dǎo)致急性敗血癥，腹瀉，氣囊炎，腹膜炎等癥狀，經(jīng)被糞便污染的雞胚 傳播后還會(huì)引起雛雞的大批死亡，因此大腸桿菌病對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成巨大危害和嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損 失。被感染的禽類會(huì)通過蛋和肉等將大腸桿菌傳染給人，人感染大腸桿菌后的臨診癥狀主 要是腹瀉，并伴有惡心，嘔吐，腹痛，畏寒發(fā)熱，里急后重，咳嗽等表現(xiàn)，感染小兒還會(huì)引起溶 血性尿毒綜合征。現(xiàn)今細(xì)菌性疾病對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害嚴(yán)重，尤其是大腸桿菌病，造成的損失不亞 于病毒性疾病。隨著細(xì)菌耐藥性增加、抗生素濫用等情況，國家法律法規(guī)對(duì)抗生素的限制會(huì) 更加嚴(yán)格，抗生素的使用將會(huì)越來越少。因此，必須采用新的方法來預(yù)防和減少禽類的大腸 桿菌病，提高養(yǎng)殖業(yè)效益，進(jìn)一步保障食品安全和人類健康，而益生菌制品將成為防治禽類 細(xì)菌性疾病的新途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種高效抑制禽源 致病性大腸桿菌的乳酸桿菌。該乳酸桿菌不僅能高效抑制禽源致病性大腸桿菌，并能在禽 類消化道內(nèi)穩(wěn)定存在。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述高效抑制禽源致病性大腸桿菌的乳酸桿菌的應(yīng) 用。
[0007] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0008] -種高效抑制禽源致病性大腸桿菌的乳酸桿菌，是從健康雞群中分離得到，命名 為LactobacillusingluvieiSCGZ-9。
[0009]申請人將菌株保藏在位于武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中 心，保藏中心于2015年5月28日收到申請人提供的菌株。保藏中心給予該培養(yǎng)物的保藏 號(hào)為CCTCCNO:M2015337,提議的分類命名為LactobacillusingluvieiSCGZ-9。
[0010] LactobacillusingluvieiSCGZ-9在制備預(yù)防和/或治療禽類致病性大腸桿菌病 的制劑中的應(yīng)用。
[0011] LactobacillusingluvieiSCGZ-9在制備改善禽類腸道菌群生態(tài)平衡制劑中的 應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：
[0013] (1)本發(fā)明乳酸桿菌LactobacillusingluvieiSCGZ-9是一種高效抑制禽源大腸 桿菌的益生菌，能夠預(yù)防和/或治療家禽的大腸桿菌病，保護(hù)食品安全和人類健康。
[0014] (2)本發(fā)明菌株是從健康母雞體內(nèi)分離而來，并且經(jīng)過多重嚴(yán)格的篩選，安全可靠 性高，穩(wěn)定性好。
[0015] (3)本發(fā)明的菌株LactobacillusingluvieiSCGZ-9具有良好的耐酸和耐膽鹽能 力，可以有效通過家禽的上消化道后黏附在腸道細(xì)胞，并抑制禽源致病性大腸桿菌對(duì)細(xì)胞 的黏附?？蓱?yīng)用于防治和/或治療禽類大腸桿菌病和改善禽類腸道生態(tài)平衡，促進(jìn)家禽生 長。
【附圖說明】
[0016] 圖1是乳酸桿菌SCGZ-9的光學(xué)顯微鏡圖。
[0017] 圖2是乳酸桿菌SCGZ-9的生長曲線。
[0018] 圖3是乳酸桿菌SCGZ-9在不同pH環(huán)境下的生長情況。
[0019] 圖4是乳酸桿菌SCGZ-9在不同膽鹽濃度環(huán)境下的生長情況。
[0020] 圖5是乳酸桿菌SCGZ-9對(duì)雞致病性大腸桿菌078的瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。
[0021] 圖6是實(shí)施例4中實(shí)驗(yàn)雞的增重試驗(yàn)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。
[0023] 實(shí)施例中所述的乳酸桿菌，命名為LactobacillusingluvieiSCGZ-9 ;所述菌株 保藏單位：中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)，保藏日期：2015年5月28日，保藏地址：中 國?武漢?武漢大學(xué)，保藏編號(hào)：CCTCCN0:M2015337。
[0024] 下列實(shí)施例中未注明具體實(shí)驗(yàn)條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件或按照制 造廠商所建議的實(shí)驗(yàn)條件。
[0025] 實(shí)施例1
[0026] -、乳酸桿菌SCGZ-9的來源
[0027]該乳酸桿菌為本發(fā)明人于2013年中從廣東養(yǎng)殖場的健康雞群中分離得到，現(xiàn)由 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院禽病研究室保存和提供。
[0028] 二、乳酸桿菌SCGZ-9的鑒定和分類
[0029] (1)生化鑒定
[0030] 根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》，做如下生化試驗(yàn)：過氧化氫酶試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、 明膠液化試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)和動(dòng)力試驗(yàn)。該七項(xiàng)生化試驗(yàn)均為陰性。判 定所篩選出的SCGZ-9菌株屬于乳酸菌屬（Lactobacillus)。
[0031] (2) 16SrRNA基因測序
[0032]設(shè)計(jì)引物序列：fDl:5'-AGAGTITGATCCTGGCTCAG-3'，rDl:5'-AAGGAGGTGATCC AGCC-3'，PCR反應(yīng)參照寶生物公司rTaqDNA聚合酶的使用說明書進(jìn)行，PCR反應(yīng)體 系（50yL)為：ddH20 21yL、rTaq(PremixTaq)25yL、引物 ^)1(20以111〇1/1)11^、引物 rDl(20ymol/L) 1yL，模板DNA2yL。PCR反應(yīng)條件為：94°C預(yù)變性 5min;94°C，45s，55°C， 45s，72°C，90s，35個(gè)循環(huán)；72°C延伸lOmin。反應(yīng)結(jié)束后取6yLPCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝 膠（0.5yg/mLEB)電泳檢測。將目的產(chǎn)物送上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行DNA雙 向測序。將測序結(jié)果與Genbank數(shù)據(jù)庫中不同菌株16SrRNA基因序列進(jìn)行同源性比較， 比較結(jié)果顯示所篩選出的SCGZ-9菌株與乳酸桿菌屬的菌種相似度最高，為Lactobacillus ingluviei〇
[0033] Lactobacillus ingluviei SCGZ-9菌株的16SrRNA序列如下：1498bp
[0034] AGTCTCTTGTTCGACTTCACCCCAGTCATCTGCCCTGCCTTAGGCGGCTGGCTCCAAAAGGTTACCCCA CCGACTTTGGGCATTGCAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCAT GCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCGTGCAGTCGAGTTGCAGACTGCAGTCCGAACTGAGAACGGTTTTA AGAGATTAGCTTGCCCTCGCGAGTTCGCGACTCGTTGTACCGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGG GGCATGATGATCTGACGTCGTCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACTAGAGTGCCCAACTGAATGC TGGCAACTAGTAACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACGACCATG CACCACCTGTCATTGCGTCCCCGAAGGGAACGCCCTATCTCTAGGGTTGGCGCAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTT CTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTT GCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTCCGGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACCTAGCA CTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTA CAGACCAGGCAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAGTTCCACT GCCCTCTTCTGCACTCAAGTCATCCAGTTTCCGATGCACTTCTTCGGTTAAGCCGAAAGGCTT