煤制油廢水cod降解用菌種馴化試劑盒及馴化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于一種菌種馴化試劑盒及馴化方法，特別涉及一種用于降解煤制油廢水 C0D用菌種的馴化試劑盒及馴化方法。
【背景技術(shù)】：
[0002] 煤制油是以煤炭為原料，通過(guò)化學(xué)加工過(guò)程生產(chǎn)油品和石油化工產(chǎn)品的一項(xiàng)技 術(shù)，包含煤直接液化和煤間接液化兩種技術(shù)路線。我國(guó)煤貯量占世界總貯量的36%，占我國(guó) 能源總量的70%以上，因此在我國(guó)，煤制油是燃料化工的主導(dǎo)。
[0003] 煤制油生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的含油廢水的特點(diǎn)是：多環(huán)芳烴和苯系物及其衍生物、酚、 硫等有毒物質(zhì)濃度高，可生化性差，是一種比較難處理的廢水。綜合廢水中C0D根據(jù)污水處 理工藝不同一般在1000-5000mg/L左右。含油廢水的危害主要表現(xiàn)在：油類物質(zhì)形成的薄 膜漂浮在水面上，空氣中的氧就不能溶解于水中，水中的溶解氧就會(huì)減少，致使水體中浮游 生物等因缺氧而死亡，水生植物的光合作用也受到限制，從而水體的自凈作用將會(huì)受到影 響，水質(zhì)也會(huì)變臭，水資源的利用價(jià)值也會(huì)遭到破壞，而且油中一些低沸點(diǎn)芳香烴化合物的 存在會(huì)導(dǎo)致人類癌癥的發(fā)生，從而影響人體健康。
[0004] 目前國(guó)內(nèi)處理煤制油廢水的主要工藝路線基本遵行"預(yù)處理+生化處理+深度處 理"，其中生化處理是污水處理工藝的重要階段。通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)多個(gè)煤制油企業(yè)的實(shí)地走訪， 目前對(duì)于預(yù)處理后的煤制油廢水，一般采用缺氧、好氧生物法處理（A/0工藝）。微生物是廢 水生物處理過(guò)程的核心，制約著污水處理的效果。在污水廠啟動(dòng)初期或運(yùn)行受到?jīng)_擊需要 重新恢復(fù)運(yùn)行時(shí)，國(guó)內(nèi)普遍采用的方法是向污水處理設(shè)施中投加污泥和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，或者投 加市場(chǎng)上現(xiàn)有的專用微生物菌劑，達(dá)到污水處理設(shè)施正常運(yùn)行的目的。對(duì)于煤制油廢水的 處理，投加污泥和菌劑的效果受到以下幾方面問(wèn)題的制約：一、煤制油廢水中含有多種對(duì)微 生物有毒害作用的物質(zhì)，投加到污水中的污泥或菌種中的部分微生物容易被廢水中的毒性 物質(zhì)所抑制，為解決此問(wèn)題往往需要對(duì)污泥或菌種在投加前進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的馴化；二、煤制油 廢水中有大量油類等難降解有機(jī)物，這些物質(zhì)很難被微生物利用并降解，解決這個(gè)問(wèn)題通 常需要工藝的合理設(shè)計(jì)與污泥或菌劑的馴化共同解決；三、與普通污水相比，煤制油廢水處 理設(shè)施的啟動(dòng)時(shí)間更長(zhǎng)，需要更長(zhǎng)時(shí)間的馴化。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于解決以上問(wèn)題，提供一種菌種馴化試劑盒及馴化方法，經(jīng)本試 劑盒馴化后的菌種投放到煤制油廢水中，可以大大縮短污水處理啟動(dòng)時(shí)間，提高C0D降解 效率。該馴化培養(yǎng)基具有較廣的適用性，通過(guò)其馴化后的菌種投入到多個(gè)煤制油污水樣品 后，其C0D降解能力均有所提高。該試劑盒可以模擬缺氧、好氧生物法工藝，可以應(yīng)用于煤 制油污水處理菌劑的產(chǎn)品優(yōu)化，以及污水廠在運(yùn)行前對(duì)污泥進(jìn)行快速馴化。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種煤制油廢水C0D降解用菌種馴化 試劑盒，其特征在于：它是由富集管、馴化預(yù)制管A、馴化預(yù)制管B組成；其中：
[0007]( -）、富集管：
[0008] 富集管的制備：
[0009] (1)、取牛肉膏0? 7-1. 0g，蛋白胨0? 7-1. 0g，磷酸二氫鉀1. 2-2. 0g，磷酸氫二鈉 1. 5-2. 5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的碳酸鈉和5 %HC1調(diào)pH至7. 00-7. 50， 分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基20ml;分裝完畢后，將螺口管蓋擰松，115°C滅菌 25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)富集管制備 完成；
[0010](2)、取苯酚 10-13mg，萘酚 2-4mg，喹啉l-2mg，甲醇 0? 08-0. 12ml，丁醇 0. 08-0. 12ml，用100ml無(wú)菌水溶解，溶解后在無(wú)菌條件下用0. 22ym無(wú)菌濾膜過(guò)濾除菌；過(guò) 濾除菌完成后，取2ml經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌的溶液，0. 2-0. 3y1煤制柴油，在無(wú)菌條件下加入到步 驟（1)中的基礎(chǔ)富集管中，在高速漩渦震蕩器上震蕩5-10min，至此富集管制備完成；
[0011] (二）、馴化預(yù)制管A:
[0012] 馴化預(yù)制管A的制備：
[0013](1)、取牛肉膏0. 4-0. 7g，蛋白胨0. 4-0. 7g，丙三醇0. 4-0.6ml，磷酸二氫鉀 1. 2-2. 0g，磷酸氫二鈉1. 5-2. 5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5 %的碳酸鈉和5 %HC1 調(diào)pH至7. 50-8. 00，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基30ml;分裝完畢后，將螺口管 蓋擰松，115°C滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至 此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A制備完成；
[0014](2)、取苯酸 18_22mg，萘酸 8_12mg，喹啉 4_6mg，苯胺 4_6mg，P比啶 0? 4-0. 6mg，辛基 十二燒醇0.卜〇. 2mg，用100ml無(wú)菌水溶解，溶解后在無(wú)菌條件下用0. 22ym無(wú)菌濾膜過(guò)濾 除菌，過(guò)濾除菌后的溶液為水添加物A;
[0015] (3)、取萘130_170mg，甲苯3_7mg，鄰苯二甲酸二丁酯2_3mg，苯并咪唑2_3mg，甲醇 0. 08-0. 12ml，丁醇0. 08-0. 12ml，用100ml75 %乙醇溶解，此溶液為醇添加物A;
[0016] (4)、分別取水添加物A3ml，醇添加物A0.012ml，煤制柴油1.0-1.2yl，在無(wú)菌 條件下裝到步驟（1)中的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A中，在高速漩渦震蕩器上震蕩5-10min，至此馴 化預(yù)制管A制備完成；
[0017](三）、馴化預(yù)制管B:
[0018] 馴化預(yù)制管B的制備：
[0019](1)、取牛肉膏0. 2-0. 4g，蛋白胨0. 2-0. 4g，丙三醇0. 6-0. 8ml，磷酸二氫鉀 1. 2-2. 0g，磷酸氫二鈉1. 5-2. 5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5 %的碳酸鈉和5 %HC1 調(diào)pH至7. 50-8. 00，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基30ml;分裝完畢后，將螺口管 蓋擰松，115°C滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至 此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B制備完成；
[0020](2)、取苯酚 150-170mg，萘酚 18-22mg，喹啉 9-12mg，苯胺 10-12mg，吡啶 0. 9-1. 2mg，辛基十二燒醇0. 4-0. 6mg，用100ml無(wú)菌水溶解，溶解后在無(wú)菌條件下用 0. 22ym無(wú)菌濾膜過(guò)濾除菌，過(guò)濾除菌后的溶液為水添加物B;
[0021] (3)、取萘 540_560mg，甲苯 18_22mg，鄰苯二甲酸二丁酯 8_12mg，苯并咪唑 8_12mg， 甲醇1. 8-2. 2ml，丁醇1. 8-2. 2ml，用100ml75%乙醇溶解，此溶液為醇添加物B;
[0022] (4)、分別取水添加物B3ml，醇添加物B0.012ml，煤制柴油3. 0-4.0yl，在無(wú)菌 條件下裝到步驟（1)中的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B中，在高速漩渦震蕩器上震蕩5-10min，至此馴 化預(yù)制管B制備完成。
[0023] -種采用煤制油廢水C0D降解用菌種馴化試劑盒馴化方法，其特征在于：包括以 下步驟：
[0024](一）、缺氧階段馴化：
[0025] 步驟1、將待馴化樣品取l_3ml接種到第1富集管中，將第1富集管的管蓋擰緊，平 放入搖床28-35°C、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí)；
[0026] 步驟2、取經(jīng)第1富集管培養(yǎng)的樣品5ml，接種到第1馴化預(yù)制管A中，將第1富集 管連同管內(nèi)剩余樣品放入4°C冷藏；
[0027] 步驟3、將第1馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25_30°C、100_150rpm震蕩 培養(yǎng)24-48小時(shí)；培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A1 30ml放入100ml經(jīng)過(guò)滅菌的第1 三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第2馴化預(yù)制管A中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0028] 步驟4、將第2馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25_30°C、100_150rpm震蕩 培養(yǎng)24-48小時(shí)；培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A2 30ml放入100ml經(jīng)過(guò)滅菌的第2 三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第3馴化預(yù)制管A中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0029] 步驟5、將第3馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25_30°C、100_150rpm震蕩 培養(yǎng)24-48小時(shí)；培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A3 30ml放入100ml經(jīng)過(guò)滅菌的第3 三角瓶中，然后放入4°C留存；當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)步驟4的第3馴化預(yù)制管A培養(yǎng)后，取沉淀5ml， 接種到第1馴化預(yù)制管B中；
[0030] 步驟6、將步驟5的第1馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28 °C、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B1 30ml放入100ml經(jīng) 過(guò)滅菌的第4三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第2馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培 養(yǎng)；
[0031] 步驟7、將步驟6的第2馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28 °C、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B2 30ml放入100ml經(jīng) 過(guò)滅菌的第5三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第3馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培 養(yǎng)；
[0032]步驟8、將步驟7的第3馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28°C、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B3 30ml放入100ml 經(jīng)過(guò)滅菌的第6三角瓶中，然后放入4°C留存；當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)步驟7的第3馴化預(yù)制管B培 養(yǎng)后，取沉淀lml，接種到第2富集管中，將第2富集管的管蓋擰緊，平放入搖床28-35°C、 150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí)；培養(yǎng)后將第2富集管冷藏或冷凍保存，此馴化后菌種為 缺氧馴化菌種；
[0033](二）、好氧階段馴化：
[0034] 步驟9、當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)步驟5的第3馴化預(yù)制管A培養(yǎng)完成后，將冷藏的第1富集管 取出并恢復(fù)室溫；待恢復(fù)室溫6-1Oh后，取5ml接種到上清液A3中；
[0035] 步驟10、將步驟9接種后的上清液A3放入搖床25-28°C、150-200rpm震蕩培養(yǎng) 24-48小時(shí)；培養(yǎng)