一種從梔子中制備番紅花酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域的提取方法，具體說是一種從梔子中制備番紅花酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]桅子是茜草科(Rubiaceae)植物桅子(Gardeniajasminoides Ellis)的果實(shí)，長(zhǎng)橢圓形或橢圓形，呈深紅色或黃紅色，桅子屬衛(wèi)生部頒布的首批藥食兩用資源，是傳統(tǒng)中藥。桅子具有瀉火除煩，清熱利濕，涼血解毒，利膽保肝，降壓，滅菌消炎，外用消腫止痛的功效。中醫(yī)臨床上主要用于治療熱病，黃疽型肝炎，扭挫傷，高血壓，糖尿病等。桅子中的化學(xué)成分很多，其中主要有藏花素，藏花酸(Ichietal)和京尼平式(Geniposide)等環(huán)稀醚蔽類化合物，其中京尼平甙是其主要有效成分。
[0003]番紅花酸是番紅花素水解后的產(chǎn)物，是番紅花的有效成分之一，具有保護(hù)肝臟，抑制腫瘤，抗氧化等多種藥理功能。但藏紅花只是柱頭入藥，產(chǎn)量極低，又因?yàn)槠滟Y源極其有限，在中國(guó)很難大面積栽培，致使其價(jià)格昂貴被譽(yù)為“植物黃金”，具有極高的醫(yī)療價(jià)值。桅子中大量存在桅子黃色素為一系列類胡蘿卜素衍生物，在結(jié)構(gòu)上與番紅花酸及其相似，因此人們嘗試采用桅子為原料制備番紅花酸來彌補(bǔ)市場(chǎng)的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種從梔子中制備番紅花酸的方法，具有工藝簡(jiǎn)單，適合生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。
[0005]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)，具體包括如下步驟:
[0006]I)預(yù)濕堆放:將梔子在陰涼處建堆，噴水，待水從堆底部流出后，自然堆放；
[0007]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎或破碎，加入相當(dāng)于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至50-60°C維持5-10分鐘，得到膏狀漿液；
[0008]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調(diào)pH為4-5，加入膏狀漿液0.05-0.1 %重量份的果膠-纖維素復(fù)合酶和0.001重量份的甘露醇進(jìn)行酶解40-60分鐘，得到第一次酶解液；
[0009]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2-3倍重量的純凈水，加熱至60-70°C浸提60-120分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0010]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調(diào)pH為4.5，加入相當(dāng)于混合物0.1-0.2%重量份的纖維素酶進(jìn)行酶解40-60分鐘，得到第二次酶解液，重復(fù)兩次；
[0011]6)番紅花酸的制備:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，加入堿液，調(diào)整pH至9-11，進(jìn)行堿解，反應(yīng)時(shí)間30-60分鐘，過濾并收集濾渣，濾渣中加入酸液，調(diào)整至3-4，直至不再產(chǎn)生沉淀，過濾，收集沉淀；
[0012]7)重結(jié)晶、干燥:將步驟6)得到的沉淀用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，干燥后得到番紅花酸。
[0013]本發(fā)明步驟I)所述的預(yù)濕的堆放，優(yōu)選1-2天。
[0014]步驟3)所述的果膠-纖維素復(fù)合酶，優(yōu)選活性是1-3萬活性單位/克(毫升)的固態(tài)或液態(tài)果膠-纖維復(fù)合酶。
[0015]步驟6)所述的堿液優(yōu)選NaOH、KOH或Na2CO3,所述的酸液優(yōu)選HCl或H2S04。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
[0017]1、梔子的植物細(xì)胞內(nèi)含有大量的油脂，主要由成分為甘油三酯的化合物組成的混合物，這些油脂以油粒和油體原生質(zhì)體形式、呈不連續(xù)顆粒狀、與顆粒蛋白體一起無規(guī)則地分散在細(xì)胞內(nèi)等存在形式存在?，F(xiàn)有的提取方法，都是直接對(duì)梔子等原料打碎或粉碎后通過水提/醇提、酶解、或者微波提取等方式直接提取，在提取的時(shí)候，細(xì)胞中的油脂會(huì)同時(shí)分離出，含有油脂的基團(tuán)和京尼平甙、京尼平甙酸、色素等成分混在一起，從而影響后續(xù)有效成分的分離，增加了工序的處理難度。本發(fā)明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分對(duì)油和水的親和力差異及油水比重不同而將油和非油成分分離，增加了產(chǎn)品收率和提高了提取率。
[0018]2、本發(fā)明采用梔子預(yù)濕堆放，加適量水，建堆發(fā)酵，隨著發(fā)酵過程溫度的上升，梔子逐漸軟化，水分自然進(jìn)入到內(nèi)部，利于植物油脂的分離，利于后續(xù)酶解、去油。
[0019]3、本發(fā)明先采用果膠-纖維素復(fù)合酶去除細(xì)胞壁，釋放植物細(xì)胞中的油脂，加入甘露醇，可以保持滲透壓，利于油脂的釋放。
[0020]4、通過本發(fā)明的方法，得到的番紅花酸，含量在98.5%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0022]實(shí)施例1:
[0023]—種從梔子中制備番紅花酸的方法，具體包括如下步驟:
[0024]I)預(yù)濕堆放:將梔子在陰涼處建堆，噴水，待水從堆底部流出后，自然堆放I天；
[0025]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎，加入相當(dāng)于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至50°C維持5分鐘，得到膏狀漿液；
[0026]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調(diào)pH為4，加入膏狀漿液0.05%重量份活性是I萬活性單位/克的果膠-纖維素復(fù)合酶和0.001重量份的甘露醇進(jìn)行酶解40分鐘，得到第一次酶解液；
[0027]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2倍重量的純凈水，加熱至60°C浸提120分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0028]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調(diào)pH為4.5，加入相當(dāng)于混合物0.1 %重量份的纖維素酶進(jìn)行酶解60分鐘，得到第二次酶解液，重復(fù)兩次；
[0029]6)番紅花酸的制備:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，加入0.1M的NaOH，調(diào)整pH至9，進(jìn)行堿解，反應(yīng)時(shí)間60分鐘，過濾并收集濾渣，濾渣中加入HC1，調(diào)整至3，直至不再產(chǎn)生沉淀，過濾，收集沉淀；
[0030]7)重結(jié)晶、干燥:將步驟6)得到的沉淀用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，干燥后得到番紅花酸，含量98.6%。
[0031]實(shí)施例2:
[0032]—種從梔子中制備番紅花酸的方法，具體包括如下步驟:
[0033]I)預(yù)濕堆放:將梔子在陰涼處建堆，噴水，待水從堆底部流出后，自然堆放I天；
[0034]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子破碎，加入相當(dāng)于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至60°C維持8分鐘，得到膏狀漿液；
[0035]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調(diào)pH為4.5，加入膏狀漿液0.1%重量份活性是2萬活性單位/毫升的果膠-纖維素復(fù)合酶和0.001重量份的甘露醇進(jìn)行酶解50分鐘，得到第一次酶解液；
[0036]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入3倍重量的純凈水，加熱至70°C浸提60分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0037]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調(diào)pH為4.5，加入相當(dāng)于混合物0.15%重量份的纖維素酶進(jìn)行酶解50分鐘，得到第二次酶解液，重復(fù)兩次；
[0038]6)番紅花酸的制備:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，加入0.1M的Κ0Η，調(diào)整pH至10，進(jìn)行堿解，反應(yīng)時(shí)間40分鐘，過濾并收集濾渣，濾渣中加入HCl，調(diào)整至4，直至不再產(chǎn)生沉淀，過濾，收集沉淀；
[0039]7)重結(jié)晶、干燥:將步驟6)得到的沉淀用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，干燥后得到番紅花酸，含量98.7%。
[0040]實(shí)施例3:
[0041]I)預(yù)濕堆放:將梔子在陰涼處建堆，噴水，待水從堆底部流出后，自然堆放2天；
[0042]2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎，加入相當(dāng)于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至55°C維持10分鐘，得到膏狀漿液；
[0043]3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調(diào)pH為5，加入膏狀漿液0.08%重量份活性是3萬活性單位/克的果膠-纖維素復(fù)合酶和0.001重量份的甘露醇進(jìn)行酶解60分鐘，得到第一次酶解液；
[0044]4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2倍重量的純凈水，加熱至65°C浸提100分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離；
[0045]5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調(diào)pH為4.5，加入相當(dāng)于混合物0.2%重量份的纖維素酶進(jìn)行酶解40分鐘，得到第二次酶解液，重復(fù)兩次；
[0046]6)番紅花酸的制備:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，加入Na2CO3溶液，調(diào)整pH至11，進(jìn)行堿解，反應(yīng)時(shí)間30分鐘，過濾并收集濾渣，濾渣中加入H2SO4,調(diào)整至3，直至不再產(chǎn)生沉淀，過濾，收集沉淀；
[0047]7)重結(jié)晶、干燥:將步驟6)得到的沉淀用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，干燥后得到番紅花酸，含量99.2%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從梔子中制備番紅花酸的方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)預(yù)濕堆放:將梔子在陰涼處建堆，噴水，待水從堆底部流出后，自然堆放； 2)原料處理:將步驟I)得到的梔子粉碎或破碎，加入相當(dāng)于原料2-3倍重量的純凈水，加熱至50-60°C維持5-10分鐘，得到膏狀漿液； 3)第一次酶解:將步驟2)得到的膏狀漿液，調(diào)pH為4-5，加入膏狀漿液0.05-0.1%重量份的果膠-纖維素復(fù)合酶和0.001重量份的甘露醇進(jìn)行酶解40-60分鐘，得到第一次酶解液； 4)去油:將步驟3)得到的第一次酶解液，加入2-3倍重量的純凈水，加熱至60-70°C浸提60-120分鐘，得上層浮油液與下層液、渣混合物，分離； 5)第二次酶解:將步驟4)得到的下層液、渣混合物，調(diào)pH為4.5，加入相當(dāng)于混合物0.1-0.2%重量份的纖維素酶進(jìn)行酶解40-60分鐘，得到第二次酶解液，重復(fù)兩次； 6)番紅花酸的制備:合并第二次酶解液，過濾，濃縮，加入堿液，調(diào)整pH至9-11，進(jìn)行堿解，反應(yīng)時(shí)間30-60分鐘，過濾并收集濾渣，濾渣中加入酸液，調(diào)整至3-4，直至不再產(chǎn)生沉淀，過濾，收集沉淀； 7)重結(jié)晶、干燥:將步驟6)得到的沉淀用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，干燥后得到番紅花酸。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從梔子中制備番紅花酸的方法，其特征在于:步驟I)所述的預(yù)濕的堆放，為1-2天。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從梔子中制備番紅花酸的方法，其特征在于:步驟3)所述的果膠-纖維素復(fù)合酶，為活性是1-3萬活性單位/克的固態(tài)或1-3萬活性單位/毫升的液態(tài)果膠-纖維復(fù)合酶。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從梔子中制備番紅花酸的方法，其特征在于:步驟6)所述的堿液為NaOH、KOH或Na2CO3,所述的酸液為HCl或H2S04。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從梔子中制備番紅花酸的方法，包括下述步驟:預(yù)濕堆放、原料處理、第一次酶解、去油、第二次酶解、番紅花酸的制備、重結(jié)晶、干燥。本發(fā)明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分對(duì)油和水的親和力差異及油水比重不同而將油和非油成分分離，增加了產(chǎn)品收率和提高了色價(jià)。
【IPC分類】C12P7/44
【公開號(hào)】CN105063107
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510542613
【發(fā)明人】文繼承
【申請(qǐng)人】桂林茗興生物科技有限公司
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年8月31日