一種產(chǎn)木聚糖酶微生物甄別培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體地涉及一種產(chǎn)木聚糖酶微生物甄別培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]傳統(tǒng)篩選木聚糖酶產(chǎn)酶活性菌株的方法是，先從自然界分離培養(yǎng)微生物，再采用隨機獲取的純培養(yǎng)微生物作為出發(fā)菌株，在含有木聚糖底物的瓊脂平板上接種，并配加一定濃度的色素指示物，通過色素，產(chǎn)酶的活性菌株則會產(chǎn)生相應的透明圈，從而將產(chǎn)酶活性菌株甄別、篩選出來，此法一般稱為透明圈法。
[0003]此弊病主要有二種。第一，不利于野外作業(yè)。野外采集、收集的土壤或其它樣品必須帶回實驗室進行分離培養(yǎng)，獲得單菌落純培養(yǎng)物后，再通過透明圈法篩選木聚糖酶活性菌株。在采集與分離這個時間段內(nèi)，樣品的微生物群落已經(jīng)發(fā)生了極大的變化，絕大多數(shù)生長勢較弱的稀有微生物已經(jīng)被優(yōu)勢微生物群體“埋沒”。第二，篩選方法過于精細，使整個篩選過程實驗工作量過大，導致勞動負荷較大，最終導致效率較低。一般篩選木聚糖酶產(chǎn)酶活性菌株的過程分為初篩、第一次復篩、第二次復篩……第η次復篩，等等。采用透明圈法應用于初篩、第一次復篩尤其顯得過于精細，導致整個過程工作量過大。另外，在木聚糖酶相關(guān)利用工廠內(nèi)，菌株的保藏一般采用常規(guī)的菌株保藏的方法，這樣，非常容易導致菌株的酶活性退化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種微生物甄別培養(yǎng)基以及使用所述微生物甄別培養(yǎng)基來簡易快速地培養(yǎng)微生物，本發(fā)明更進一步的目的是提供一種篩選木聚糖酶活性目標菌株的方法。該新型的微生物甄別培養(yǎng)基能夠在野外很方便地臨時制備，保持培養(yǎng)基的新鮮度從而適用于采集樣本后立刻進行菌株分離培養(yǎng)，并且能夠高效率篩選目標活性菌株。
[0005]在本發(fā)明的一個方面，提供了一種微生物甄別培養(yǎng)基，包括胡蘿卜、西紅柿汁以及底物。
[0006]優(yōu)選的，所述胡蘿卜切成片并刻劃連續(xù)凹槽；
[0007]優(yōu)選的，所述凹槽為“Ζ”字型、“S”型、“螺旋”型。
[0008]優(yōu)選的，所述的凹槽的形狀如圖1所示，凹槽的長度D2小于胡蘿卜片的直徑D1，胡蘿卜片的直徑Dl為50-70mm，胡蘿卜片的厚度D3為6-10mmo
[0009]優(yōu)選的，所述底物為用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液分別配制的燕麥木聚糖、樺木木聚糖、阿拉伯木聚糖、木寡糖xylo-oligo 95P等比混合溶液。
[0010]本發(fā)明的所述微生物甄別培養(yǎng)基按照如下的方法來制備:
[0011](I)將市售胡蘿卜切成片；
[0012](2)在所述的胡蘿卜片上刻劃連續(xù)凹槽，
[0013](3)在所述的胡蘿卜片凹槽中傾倒經(jīng)過無菌過濾器除菌的營養(yǎng)液；
[0014]優(yōu)選的，所述的凹槽不超過胡蘿卜片的邊緣，優(yōu)選的，凹槽的深度為I?5mm，寬度為 0.5 ?5mm ；
[0015]進一步優(yōu)選地，所述的凹槽的深度為3mm，寬度為Imm ;優(yōu)選的營養(yǎng)液的深度為I?2mm ο
[0016]其中，所述營養(yǎng)液為所述西紅柿汁和所述底物混合而成，所述西紅柿汁和所述底物的體積比為300:1。
[0017]其中，將西紅柿經(jīng)勻漿器研磨至無顆粒狀碎片，過濾取濾液，所述濾液滅菌后即得所述西紅柿汁。
[0018]優(yōu)選的，在過濾時，選用20目篩過濾；且篩孔上覆蓋I?2層衛(wèi)生紙；
[0019]優(yōu)選的，所述滅菌方法為巴氏滅菌法；
[0020]優(yōu)選的，所述底物中檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液的pH為5.8 ;
[0021]優(yōu)選的，所述燕麥木聚糖、樺木木聚糖、阿拉伯木聚糖、木寡糖xylo-oligo95P的濃度均為0.6mg/ml ；
[0022]在本發(fā)明的一個方面，營養(yǎng)液經(jīng)過實驗室泡制后可以以密封容器罐裝從而方便攜帶，只在分離微生物時再進行分裝，從而有利于野外現(xiàn)場作業(yè)。
[0023]在本發(fā)明的另一個方面，提供了一種培養(yǎng)微生物的方法，所述的方法包括步驟:
[0024](I)取市售胡蘿卜切成片，在所述胡蘿卜片上刻劃連續(xù)凹槽；
[0025](2)取樣品液與西紅柿汁以及底物混合，滴于上述胡蘿卜片的凹槽中，使其均勻分布于所述微生物甄別培養(yǎng)基的凹槽中；
[0026](3)在室溫下靜置培養(yǎng)2-4天；
[0027](4)取得在胡蘿卜片上的微生物。
[0028]優(yōu)選的，步驟(I)中的胡蘿卜預先放置在培養(yǎng)皿中；
[0029]優(yōu)選的，所述培養(yǎng)皿中預先鋪有無菌濾紙或無菌紗布，所述無菌濾紙或無菌紗布含有無菌水。
[0030]優(yōu)選的，步驟(2)所述樣品液為:樣品(土壤等固體物質(zhì)需要先研磨，再用等體積無菌水萃取)適量，添加適量無菌玻璃珠，手動振蕩5分鐘后靜置澄清I分鐘，取上清液成為樣品液。
[0031]優(yōu)選的，步驟⑵中混合的過程包含:取西紅柿汁、樣品液、底物，三者的體積比為300:100:1。其中，將西紅柿經(jīng)勻漿器研磨至無顆粒狀碎片，過濾取濾液，所述濾液經(jīng)滅菌后即得所述西紅柿汁；所述底物為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液分別配制的燕麥木聚糖、樺木木聚糖、阿拉伯木聚糖、木寡糖xylo-oligo 95P的等比混合溶液。
[0032]優(yōu)選地，所述樣品為土壤時，選取腐殖質(zhì)含量較低的土壤；優(yōu)選地，土壤經(jīng)研磨至無顆粒狀碎粒。
[0033]本發(fā)明還提供一種篩選木聚糖酶活性目標菌株的方法，包括以下步驟:
[0034]I)將胡蘿卜切成片；
[0035]2)在胡蘿卜片上刻劃連續(xù)凹槽；
[0036]3)在所述的胡蘿卜片凹槽中傾倒西紅柿汁、樣品液、底物混合液，三者的體積比為300:100:1，使上述混合液均勾分布于凹槽內(nèi)；
[0037]4)在室溫下靜置培養(yǎng)2-4天；
[0038]5)取得在所述微生物甄別培養(yǎng)基的表面形成創(chuàng)傷的微生物；
[0039]6)將步驟5)得到的微生物進行透明圈法復篩。
[0040]上述混合液的制作方法為:將西紅柿經(jīng)勻漿器研磨至無顆粒狀碎片，過濾取濾液，所述濾液滅菌后即得所述西紅柿汁；所述底物為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液分別配制的燕麥木聚糖、樺木木聚糖、阿拉伯木聚糖、木寡糖xylo-oligo 95P的等比混合溶液。
[0041]優(yōu)選的，步驟(I)中的胡蘿卜預先放置在培養(yǎng)皿中；
[0042]優(yōu)選的，所述培養(yǎng)皿中預先鋪有無菌濾紙或無菌紗布，所述無菌濾紙或無菌紗布含有無菌水。
[0043]優(yōu)選的，步驟(3)所述樣品液為:樣品(土壤等固體物質(zhì)需要先研磨，再用等體積無菌水萃取)適量，添加適量無菌玻璃珠，手動振蕩5分鐘后靜置澄清I分鐘，取上清液成為樣品液。
[0044]優(yōu)選的，步驟(3)中混合的過程包含:取西紅柿汁、樣品液、底物，三者的體積比為300:100:1。其中，將西紅柿經(jīng)勻漿器研磨至無顆粒狀碎片，過濾取濾液，所述濾液滅菌后即得所述西紅柿汁；所述底物為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液分別配制的燕麥木聚糖、樺木木聚糖、阿拉伯木聚糖、木寡糖xylo-oligo 95P的等比混合溶液。
[0045]優(yōu)選地，所述待培養(yǎng)樣品為土壤時，選取腐殖質(zhì)含量較低的土壤；優(yōu)選地，土壤經(jīng)研磨至無顆粒狀碎粒。
[0046]優(yōu)選的，所述檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液的pH為5.8 ;
[0047]優(yōu)選的，所述燕麥木聚糖、樺木木聚糖、阿拉伯木聚糖、木寡糖xylo-oligo95P的濃度均為0.6mg/ml ；
[0048]優(yōu)選的，所述方法還包括步驟(6)，其中將步驟(5)得到的微生物進行透明圈法復篩。
[0049]優(yōu)選的，所述方法還包括步驟(7)，其中將步驟(6)得到的微生物進行木聚糖酶活性定量復篩。
[0050]在本發(fā)明的一個優(yōu)選的方面，所述的復篩除可用于篩選木聚糖酶產(chǎn)酶菌株外，還可用于甘露聚糖酶、果膠酶產(chǎn)酶菌株以及上述復合產(chǎn)酶菌株。
[0051]在本發(fā)明的另一個方面，提供了前文所述微生物甄別培養(yǎng)基在酶活性菌株的初篩中的用途；
[0052]優(yōu)選的，所述的初篩是篩選木聚糖酶、甘露聚糖酶、果膠酶產(chǎn)酶菌株。
[0053]本發(fā)明的技術(shù)方案有以下的意想不到的益處:采用本方法，適合在野外作業(yè)，當天采集的樣品，晚上回到酒店即可處理完畢，不需要將野外樣品帶回實驗室，從而避免因溫度、濕度等條件變化后，原始采集地的微生物發(fā)生了群體變化，以致一些稀有微生物資源得到忽視。
【附圖說明】
[0054]圖1是胡蘿卜片表面凹槽刻畫方案的示意圖。
【具體實施方式】
[0055]實施例1
[0056]微生物甄別培養(yǎng)基的制備:
[0057]市售胡蘿卜切成圓片，胡蘿卜片的厚度D3為6-10mm，直徑Dl = 50_70mm。在前述已經(jīng)切好的胡蘿卜片上，采用專用的機具刻劃“Z”字型凹槽。凹槽大小與胡蘿卜片外形相似，直徑D2〈D1即可；如圖1所述，胡蘿卜片的厚度D3為6-10mm;凹槽深度:3臟，寬度:1mm。
[0058]在所述胡蘿卜片凹槽中傾倒經(jīng)過巴氏滅菌的營養(yǎng)