A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮化合物，制法與抗炎活性的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮結(jié)構(gòu)的化合物、 制備方法，及含它們的藥物組合物及其在抗炎中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 血管內(nèi)皮損傷是指血管內(nèi)皮細(xì)胞因受物理、化學(xué)、射線、細(xì)胞因子及細(xì)菌等因素破 壞而出現(xiàn)直接或間接的損傷。血管內(nèi)皮受損后，損傷局部不僅失去了內(nèi)皮屏障的作用，同時(shí) 還會(huì)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，強(qiáng)烈刺激和誘導(dǎo)產(chǎn)生大量誘生型一氧化氮合成酶（iNOS)，iNOS迅 速表達(dá)，并催化生成1000倍正常生理量的N0,大量生成的NO與氧分子或過(guò)氧化物結(jié)合，分 別形成具有強(qiáng)氧化性功能的氧自由基ROS (00N0)或RNS (N02, N2O3)進(jìn)行發(fā)揮細(xì)胞毒作用。 一方面，這些自由基使巰基蛋白和脂質(zhì)過(guò)氧化，加重內(nèi)皮損傷和脂質(zhì)沉積；另一方面，這些 氧自由基可通過(guò)同氨基作用、DNA環(huán)的斷裂、耗竭谷胱甘肽的儲(chǔ)備來(lái)誘導(dǎo)DNA的損傷，從而 又促進(jìn)加重炎癥發(fā)生發(fā)展和細(xì)胞損傷。同時(shí)，iNOS活性可以維持?jǐn)?shù)小時(shí)到數(shù)天，故可造成 長(zhǎng)時(shí)間損傷作用，導(dǎo)致血管舒縮障礙、凝血異常、血流動(dòng)力學(xué)改變，重者可出現(xiàn)受損血管器 質(zhì)性改變，并由此引發(fā)一系列心腦血管相關(guān)疾病，如冠心病、繼發(fā)性血栓形成、動(dòng)脈硬化等。 這些疾病往往具有不可逆性，一旦發(fā)生，就很難根治，給臨床治療帶來(lái)很大困難，療效亦受 到很大影響。因此抑制iNOS活性，可減輕炎癥的原發(fā)和繼發(fā)，降低血管內(nèi)皮損傷相關(guān)性疾 病的發(fā)病率，保護(hù)心腦血管。
[0003] 醌式查爾酮類化合物屬于黃酮類化合物，此類化合物在天然資源中數(shù)量較少，是 傳統(tǒng)中藥紅花水溶性成分紅花黃色素的主要成分，其代表化合物為羥基紅花黃色素A。羥 基紅花黃色素A被認(rèn)為是紅花的主要有效成分，研究表明羥基紅花黃色素A能通過(guò)抑制炎 癥，降低低氧狀態(tài)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，減輕缺血神經(jīng)元變性壞死和膠質(zhì)增生，預(yù)防和治 療血管和神經(jīng)炎癥疾病及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)疾病。但是羥基紅花黃色素A物理、化學(xué)性質(zhì) 不穩(wěn)定，在光、熱、酸堿條件下，易被破壞，不易保存，限制了其進(jìn)一步開發(fā)利用。
[0004] 目前關(guān)于醌式查爾酮相關(guān)的合成及藥理研究還尚不深入，為有效闡釋傳統(tǒng)中藥的 作用機(jī)制，并為尋找活性更好的抗炎藥物提供理論依據(jù)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，我們合成了一類A環(huán) 具有異戊烯基的醌式查爾酮，并對(duì)其抗炎活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供該類化合物的制備的方法。
[0007] 本發(fā)明的再一目的在于提供一種藥物組合物，其包括有效劑量的一類A環(huán)具有異 戊烯基的醌式查爾酮類化合物及藥用載體和/或賦形劑。
[0008] 本發(fā)明的又一目的在于提供一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物在制 備用于治療和/或預(yù)防炎癥的藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0010] 本發(fā)明第一方面提供一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮，其特征在于，具有通 式（I )所示的結(jié)構(gòu)：
[0020] 其中R選自：氫，羥基，巰基，甲氧基，氨基，硝基，鹵素，氰基，甲磺酸基，甲酸基。
[0021] 所述化合物中，R優(yōu)選自：氫，羥基，甲氧基，氯，溴。
[0022] 所述化合物，優(yōu)選自如下化合物：
[0023]
[0027] (I) 3, 5-二羥基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮的合成
[0028] 取2, 4, 6-三羥基苯乙酮加到堿水溶液中，冰水浴攪拌溶解，取2倍2, 4, 6-三羥基 苯乙酮摩爾量的溴代異戊烯烷，加到水溶液中；60分鐘后，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH到3,然后用乙 酸乙酯萃取，將其有機(jī)相洗滌、干燥，最后用石油醚/乙酸乙酯混合溶劑體積比10 :1，硅膠 柱層析得到黃色油狀物3, 5-二羥基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮。
[0029] (2) 3-羥基-5-甲氧甲氧基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮的合 成
[0030] 取3, 5-二羥基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮加入到無(wú)水丙酮 中，攪拌溶解后，取7. 4倍3, 5-二羥基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮摩 爾量的碳酸鉀，攪拌15分鐘后，再取2. 5倍3, 5-二羥基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán) 己-2, 4-二烯酮摩爾量的氯甲基甲醚滴加入丙酮溶液中，攪拌5小時(shí)后，過(guò)濾，將其濾液 干燥，最后用石油醚/乙酸乙酯混合溶劑體積比20:1，硅膠柱層析得到黃色油狀物3-羥 基-5-甲氧甲氧基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮。
[0031] (3)甲氧甲氧基保護(hù)的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物的合成
[0032] 取3-羥基-5-甲氧甲氧基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮與取 代苯甲醛以摩爾比I :1. 5混合，加入乙醇水溶液溶解，再加入2. 5倍3-羥基-5-甲氧甲氧 基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮摩爾量的氫氧化鉀，常溫反應(yīng)3天后，用 稀鹽酸調(diào)節(jié)PH到3,然后用乙酸乙酯萃取，將其有機(jī)相洗滌、干燥，最后用甲醇/水混合溶劑 體積比7 :3, YMC Rp-C18柱層析得到甲氧甲氧基保護(hù)的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮 類化合物。
[0033] (4) -類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物的合成
[0034] 取甲氧甲氧基保護(hù)的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物加入四氫呋 喃溶解后，加入稀鹽酸，加熱反應(yīng)10小時(shí)，待反應(yīng)物冷卻至室溫后，將其倒入水中，然后用 乙酸乙酯萃取，將其有機(jī)相洗滌、干燥，最后用甲醇/水混合溶劑體積比6 :4, YMC Rp-C18柱 層析得到一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物。
[0035] 其中，制備方法中所指的R和上述限定相同，優(yōu)選的選自羥基，巰基，甲氧基，氨 基，硝基，鹵素，氰基，甲磺酸基，甲酸基；更優(yōu)選自羥基，甲氧基，氯，溴。
[0036] 本發(fā)明第三方面涉及一種含有藥物有效劑量的如通式（I )各情況所述的化合物 和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
[0037] 本發(fā)明還涉及含有作為活性成份的本發(fā)明化合物和常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥 物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有〇. 1~95%重量的本發(fā)明化合物。在單元?jiǎng)┬椭斜?發(fā)明化合物一般含量為〇. 1~l〇〇mg，優(yōu)選的單元?jiǎng)┬秃?~50mg。
[0038] 本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果 需要，可將本發(fā)明化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作 為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br>[0039] 本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道 或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。本發(fā)明化合物或含有 它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi) 注射和穴位注射等。
[0040] 給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒 劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混 懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
[0041] 本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種 微粒給藥系統(tǒng)。
[0042] 例如為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于 載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡 萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤(rùn)劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二 醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素 鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂 粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、 甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等； 吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤(rùn)滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬 脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄 膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
[0043] 例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體 的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷 酮、單硬脂酸甘油脂、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液 糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、 乙基纖維素等。
[0044] 例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分本發(fā)明化合物與上述的各種載體混 合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物 制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。
[0045] 例如，將本發(fā)明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針 劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、 粘合劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3_丙 二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂、肪酸酯等。另外，為了 制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添 加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、PH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的。
[0046] 此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或 其它材料。
[0047] 為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給 藥方法給藥。
[0048] 本發(fā)明化合物藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病 的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的性別、年齡、體重、性格及個(gè)體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)、 治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來(lái)講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使 用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明化合物組合物中最后的制劑中所含有的 實(shí)際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防或治療目 的。本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍：本發(fā)明的化合物的用量為〇. 001~IOOmgAg體 重，優(yōu)選為〇? 1~60mg/Kg體重，更優(yōu)選為1~30mg/Kg體重，最優(yōu)選為2~15mg/Kg體重。 成人患者服用的本發(fā)明化合物每日為10~500mg，優(yōu)選為20~IOOmg,可一次服用或分2~ 3次服用；兒童服用的劑量按照每kg體重5~30mg，優(yōu)選為10~20mg/kg體重。上述劑量 可以單一劑量形式或分成幾個(gè)，例如二、三或四個(gè)劑量形式給藥，這受限于給藥醫(yī)生的臨床 經(jīng)驗(yàn)以及治療手段的給藥方案。本發(fā)明的化合物或組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物 或?qū)ΠY藥物合并使用。
[0049] 本發(fā)明第四方面涉及一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物在預(yù)防和/或 治療炎癥藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0050] 實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物在評(píng)價(jià)抗炎藥 物療效的模型，LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO抑制活性模型上顯示出明顯的抗炎活 性，且巨噬細(xì)胞增值率實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物 細(xì)胞毒性較低。
[0051] 本發(fā)明的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物可明顯的通過(guò)抑制誘導(dǎo) 性一氧化氮合酶（iNOS)，減少NO的生成，從而減輕血管內(nèi)皮和神經(jīng)細(xì)胞的炎癥損傷，臨床 上可用于治療哺乳動(dòng)物和人類的血管和神經(jīng)炎癥性疾病及并發(fā)病，如脈管炎、骨關(guān)節(jié)炎、神 經(jīng)炎癥、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化。
[0052] 本發(fā)明的化合物以及含有本發(fā)明化合物的藥物組合物的適應(yīng)癥，主要包括血管和 神經(jīng)炎癥性疾病和免疫性炎癥疾病,如脈管炎、骨關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊 椎炎、肩周炎、滑囊炎、肌腱炎。此外本發(fā)明化合物藥物組合物還可治療因血小板聚集引起 的血管栓塞，如心絞痛、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞和腦血管梗塞等。
[0053] 有效技術(shù)效果
[0054] 1.本發(fā)明的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物結(jié)構(gòu)新穎，均未見文獻(xiàn) 報(bào)道，具有進(jìn)一步開發(fā)成抗炎方面新藥的潛力。
[0055] 2.本發(fā)明的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物制備方法路線新穎，分 離簡(jiǎn)便。
[0056] 3.本發(fā)明的一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物具有較好的抗炎活 性，在濃度為1X10 5mol/L時(shí)，所述化合物有明顯的抗炎作用，NO生成抑制率為89. 4~ 99. 3%，該類化合物的抗炎活性目前沒見相關(guān)報(bào)道。
【具體實(shí)施方式】
[0057] 下面的實(shí)施例及藥理活性實(shí)驗(yàn)用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但這并不意味著對(duì)本發(fā)明 的任何限制。
[0058] 1、一類A環(huán)具有異戊烯基的醌式查爾酮類化合物1~9的制備方法
[0059] 實(shí)施例1
[0060] 化合物1的合成方法,包括以下步驟：
[0061] (1) 3, 5-二羥基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮的合成
[0062] 取lg2, 4, 6-三羥基苯乙酮和0. 68g氫氧化鉀加到IOml水中，冰水浴攪拌溶解， 取I. 37ml溴代異戊烯，加到水溶液中；60分鐘后，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH到3,然后用乙酸乙酯萃 取，將其有機(jī)相洗滌、干燥，最后用石油醚/乙酸乙酯混合溶劑體積比10 :1，硅膠柱層析得 到〇. 8g黃色油狀物3, 5-二羥基-2-乙?；?6, 6-二異戊烯基環(huán)己-2, 4-二烯酮，產(chǎn)率為 44% ;該過(guò)程發(fā)生如下反應(yīng)：
[0064]產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)為=1H NMR(DMS0-d6, 300MHz) S I. 641 (12H, s, 4XCH3)，2 ? 566 (5H，m，-CH2CH = ,-CH3CO) ,2.660 (2H，m，-CH2CH = ),4.894 (2H，t，J = 7. 5Hz,= CHCH2)，5. 661 (1H, s, H-4) ? ESI-MS :m/z303. I [M-