一種微陣列芯片上固定探針的回收方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術領域，是一種微陣列芯片上固定探針的回收方法，更具體的是涉及一種微陣列芯片上固定的核酸或者蛋白等探針的回收方法。
【背景技術】
[0002]生物芯片的概念源自于計算機芯片，一般指高密度固定在互相支持介質(zhì)上的生物信息分子如基因片段、多肽、蛋白質(zhì)的微陣列。這些微陣列以點陣的形式有序地固定在固相載體上。在一定的條件下進行生化反應，反應結(jié)果用化學熒光法、酶標法、同位素法顯示，再用掃描儀等光學儀器進行數(shù)據(jù)采集，最后通過軟件進行數(shù)據(jù)分析。該技術最初的構(gòu)想來自于Affymetrix公司，并且該公司首次用光刻技術與光化學合成技術制作了檢測多肽和寡聚核苷酸的微陣列。1996年又制造出世界上第一塊商業(yè)化的生物芯片(Matocq MD，Molecular Ecology,2009，18(11):2310-2)。
[0003]與傳統(tǒng)的生物學檢測方法比較，生物芯片技術具有高通量、微型化、成本低、防污染等特點，使其在基因組學、蛋白質(zhì)組學、藥物篩選、個體化醫(yī)療、測序等領域得到了廣泛的應用(范金坪，中國醫(yī)學物理學雜志，2009，02-1115-03)。
[0004]生物芯片根據(jù)作用方式可以分為主動式生物芯片和被動式生物芯片兩類。主動式芯片是指把生物實驗中的樣本處理純化、反應標記及檢測等多個實驗步驟集成，通過一步反應就可主動完成。其特點是快速、操作簡單，因此有人又將它稱為功能生物芯片。主要包括微流體芯片和縮微芯片實驗室。被動式芯片即各種微陣列芯片，是指把生物實驗中的多個實驗集成，但操作步驟不變。其特點是高度的并行性，目前的大部分芯片屬于此類。由于這類芯片主要是獲得大量的生物大分子信息，最終通過生物信息學進行數(shù)據(jù)挖掘分析，因此這類芯片又稱為信息生物芯片。包括基因芯片、蛋白芯片、細胞芯片和組織芯片。
[0005]被動式芯片上固定的探針是已知的，但是同探針相互作用的是什么，以及如何對其分離作進一步的研究目前還沒有好的辦法。因此本領域迫切需要一種能夠?qū)⑽㈥嚵行酒咸囟ㄌ结樆厥盏姆椒ā?br>
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有技術中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種微陣列芯片上固定探針的回收方法，它是一種基于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)完成的。所述回收方法以一種適用于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的基片為載體，該基片經(jīng)過化學修飾后能夠固定核酸、蛋白質(zhì)等探針。應用激光捕獲顯微切割系統(tǒng)對微陣列上固定的特定或者所有探針進行精確定位、回收。本發(fā)明的優(yōu)點是以成本較低的適用于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的基片作為微陣列的載體。通過化學修飾共價的將核酸或蛋白質(zhì)等探針固定在基片表面。應用激光捕獲顯微切割系統(tǒng)對微陣列上的每個特定或所有探針進行精確定位、回收。
[0007]本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的:
[0008]本發(fā)明提供一種微陣列芯片上固定探針的回收方法，所述回收方法包括微陣列芯片反應前點樣點的定位、保存的步驟和對微陣列芯片反應后點樣點定位、激光切割、彈射的步驟。
[0009]優(yōu)選地，所述回收方法具體包括如下步驟:
[0010]點樣點定位，對完成點樣的微陣列芯片上的點樣點進行定位，并保存定位信息；
[0011]點樣點反應，對點樣點定位后的微陣列芯片進行封存、雜交反應；
[0012]反應后定位，將所述定位信息與反應后的微陣列芯片進行對照，確定反應后點樣點位置；
[0013]探針回收:采用激光對所述反應后點樣點進行切割、彈射，即完成探針回收。
[0014]優(yōu)選地，所述回收方法是基于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)實現(xiàn)的。
[0015]優(yōu)選地，點樣點定位的步驟中，所述定位是通過將完成點樣的微陣列芯片固定于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)平臺實現(xiàn)的；所述固定以所述微陣列芯片的右下角緊靠芯片夾為準。進一步優(yōu)選地，所述定位時，物鏡的倍數(shù)為10X，此時可以看見微陣列芯片上點樣點液滴，據(jù)此對每個點樣點進行定位，并保存定位文件。
[0016]優(yōu)選地，點樣點定位的步驟中，所述微陣列芯片采用的基片是適用于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的基片，如PEN (聚萘二甲酸乙二醇酯)、PET (聚對苯二甲酸乙二醇酯)等。
[0017]優(yōu)選地，所述適用于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的基片是經(jīng)過化學基團修飾的基片。
[0018]進一步優(yōu)選地，所述化學基團修飾包括在所述適用于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的基片的表面引入氣基基團、丙稀酸酯基團、環(huán)氧基團。
[0019]更進一步優(yōu)選地，所述引入氨基基團、丙烯酸酯基團、環(huán)氧基團的具體操作為:
[0020]引入氨基基團:將基片放入異丙醇中，浸泡，清洗后再放入己二胺溶液中浸泡，即可引入氨基基團；
[0021]引入丙烯酸酯基團:清洗引入氨基基團的基片，放入甲基丙烯酸縮水甘油酯溶液中，即可引入丙烯酸酯基團；
[0022]引入環(huán)氧基團:清洗引入丙烯酸酯基團的基片，放入甲基丙烯酸縮水甘油酯溶液中，紫外條件下發(fā)生交聯(lián)，即可進入環(huán)氧基團。
[0023]優(yōu)選地，所述點樣點反應結(jié)束后，還需對微陣列芯片進行清洗、氮氣吹干。
[0024]優(yōu)選地，探針回收的步驟中，所述切割用激光強度為75?95%，所述彈射用激光強度為65?75%。
[0025]更優(yōu)選地，探針回收的步驟中，所述切割用激光強度為75%，所述彈射用激光強度為 65%。
[0026]優(yōu)選地，所述探針回收的步驟還包括將所述反應后點樣點彈射至PCR蓋板、然后將所述PCR蓋板扣在PCR板、最后進行尚心的步驟。
[0027]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果是:
[0028]1、本發(fā)明采用激光捕獲顯微切割系統(tǒng)對微陣列芯片上探針點的回收方法具有操作簡單、定位準確等特點；
[0029]2、采用對探針點液滴定位的方法具有可視效果好，免去了對探針進行再次標記的步驟；
[0030]3、采用該方法能夠?qū)ξ㈥嚵行酒系奶结樳M行精確地定位，可以實現(xiàn)高通量的對芯片上每個探針的獨立回收；
[0031]4、本發(fā)明的優(yōu)點是以成本較低的適用于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的基片作為微陣列的載體，通過化學修飾共價的將核酸或蛋白質(zhì)等探針固定在基片表面。應用激光捕獲顯微切割系統(tǒng)對微陣列上的每個特定或所有探針進行精確定位、回收。
【附圖說明】
[0032]通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點將會變得更明顯:
[0033]圖1是微陣列芯片在激光捕獲顯微切割系統(tǒng)下的模式圖；
[0034]圖2是微陣列片在激光捕獲顯微切割系統(tǒng)下對探針點定位的模式圖；
[0035]圖3是微陣列芯片經(jīng)過封閉、雜交等反應后，重新放入激光捕獲顯微切割系統(tǒng)下，顯示的定位信息模式圖；
[0036]圖4是微陣列芯片經(jīng)過封閉、雜交等反應后，重新放入激光捕獲顯微切割系統(tǒng)下，經(jīng)過激光切割、彈射，回收模式圖；
[0037]圖5是修飾后的基片固定蛋白效果圖；
[0038]圖6是經(jīng)過修飾的基片固定蛋白后經(jīng)LCM切割、回收后掃描圖。
【具體實施方式】
[0039]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應當指出的是，對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0040]本發(fā)明利用微陣列芯片技術在一種適用于激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的基片上固定多種探針，形成微陣列。用激光捕獲顯微切割系統(tǒng)對基片表面固定的探針進行定位、切割、彈射、回收。具體步驟如下:
[0041](I)微陣列芯片點制及探針固定
[0042]用點樣儀器在基片上點樣，設置4個點樣區(qū)域，每個區(qū)域均點3