一種高f值金槍魚寡肽制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于寡肽制備技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)計(jì)一種成本低、工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)品風(fēng)味好、F值高，水解度高的高F值金槍魚寡肽制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金槍魚(Tunas)又叫鮪魚、吞拿魚，屬鱸形目鯖科，作為一種深海魚類，金槍魚不僅肉味鮮美，而且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值非常高，富含蛋白質(zhì)，不飽和脂肪酸和維生素，以純天然，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高而享譽(yù)國(guó)際市場(chǎng)。金槍魚的主要加工種類有藍(lán)鰭金槍魚，長(zhǎng)鰭金槍魚，黃鰭金槍魚和大眼金槍魚。浙江省是我國(guó)金槍魚加工中心，擁有全國(guó)最大的金槍魚加工基地，金槍魚除了鮮銷夕卜，其加工產(chǎn)品的附加值非常高，一般經(jīng)過冷凍處理用于制作壽司及罐裝食品。金槍魚在加工過程中產(chǎn)生大量碎肉，這些碎肉同金槍魚的魚肉主體一樣營(yíng)養(yǎng)豐富，而目前尚無有效的工業(yè)化深加工方法。
[0003]高F值寡肽是由3?7個(gè)氨基酸殘基所組成的混合小肽混合物，F(xiàn)值是指混合物中支鏈氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸，簡(jiǎn)稱BCAA)和芳香族氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸，簡(jiǎn)稱AAA)的摩爾比值。小肽分子與游離氨基酸相比具有滲透壓低、抗原性低等優(yōu)點(diǎn)，所以更容易被吸收。研究表明高F值寡肽能夠改進(jìn)肝臟疾病(肝硬化、肝性腦病)，常被用于輔助治療肝性腦病以及改善手術(shù)后和臥床病人的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)狀況。另外，高F值寡肽還具有抗疲勞和醒酒等多種生物活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于為了解決現(xiàn)有金槍魚加工過程中碎肉多余浪費(fèi)的缺陷而提供一種成本低、工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)品風(fēng)味好、F值高，水解度高的高F值金槍魚寡肽制備方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
一種高F值金槍魚寡肽制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
a)取解凍后的金槍魚碎肉，于浸泡液中浸泡12_16h，撈出后以去離子水洗凈后勻漿，加入蒸餾水與果糖并在50°C下保溫，得到金槍魚漿料；
b)向步驟a)的金槍魚漿料中加入復(fù)合酶A，酶解條件為酶解溫度55°C，保持pH值
2.3-3.3，酶解時(shí)間4.5h，然后滅酶活，冷卻12000-15000r/min離心2_4min，收集上清液；調(diào)節(jié)上清液pH至6.5-7.2，加入復(fù)合酶B，反應(yīng)溫度保持在45-55°C，保持pH值6.5-7.2，酶解時(shí)間2-3h，滅酶活，12000-15000r/min離心2_4min，收集上清液，得到酶解液；
c)將步驟b)得到的酶解液經(jīng)6500Da微濾膜微濾，壓力為45_65psi，溫度40_50°C，得到微濾液；
d)在玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為1:2:1.5的活性炭、石墨粉與納米銀，將步驟c)得到微濾液以50-85mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)10-20次，然后以12000_15000r/min離心2-4min，收集上清液即為高F值金槍魚寡肽溶液。在本技術(shù)方案中，由于現(xiàn)有活性炭吸附法都采用活性炭靜態(tài)吸附，這種方法洗脫效果有限，而本發(fā)明采用循環(huán)層析，可使酶解液與活性炭、石墨粉與納米銀之間充分接觸，同時(shí)使得酶解液中殘留的活性炭、石墨粉與納米銀減少；
而在預(yù)處理中使用浸泡液浸泡，使的金槍魚碎肉更易于酶解，同時(shí)提高其口感。
[0006]作為優(yōu)選，浸泡液由以下重量份的原料蒸煮而成:仙草45-50份、甘草20-25份、蜂巢14-26份、野菊花1-5份、黃秋葵30-40份與水200-255份，金槍魚碎肉與浸泡液的質(zhì)量比為1:10。在本技術(shù)方案中，蜂蠟中主要含有酯類、游離酸類、游離醇類和烴類，還含有微量的揮發(fā)油及色素，具有消炎抑菌、局部麻醉、降血脂和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的功效。
[0007]作為優(yōu)選，步驟a)中金槍魚與蒸餾水、果糖的質(zhì)量比為1:8:3。
[0008]作為優(yōu)選，步驟b)中復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:2.2，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:1.7，復(fù)合酶A的加入量為金槍魚漿料重量的0.2-0.7%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的0.5-0.9%。
[0009]作為優(yōu)選，活性炭的粒度為400目、比表面積1450 m2，石墨粉的粒徑為15-25 μ m。
[0010]作為優(yōu)選，步驟d)中循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為0.2-1.8T。
[0011]作為優(yōu)選，步驟b)中酶解時(shí)在外部施加超聲波振動(dòng)，超聲波功率為55_65kw。
[0012]本發(fā)明的有益效果是:
1)本發(fā)明產(chǎn)品制備方法簡(jiǎn)單，便于工業(yè)化生產(chǎn)；
2)本發(fā)明不僅具有抗疲勞作用，不污染環(huán)境，特別適合疲勞人群食用，且符合綠色保護(hù)要求；
3)制備過程簡(jiǎn)單，簡(jiǎn)化工藝，同時(shí)提高產(chǎn)品得率，產(chǎn)品得率75-88%，易于工業(yè)生產(chǎn)，F(xiàn)值高，在25-35之間。
【具體實(shí)施方式】
[0013]以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋:
若未特指，其工藝為現(xiàn)有工藝；本發(fā)明所用原料均可從市場(chǎng)購(gòu)得。
[0014]胰蛋白酶，胃蛋白酶購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；風(fēng)味蛋白酶、菠蘿蛋白酶購(gòu)自廣西南寧龐博生物工程有限公司。
[0015]實(shí)施例1
一種高F值金槍魚寡肽制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
a)取解凍后的金槍魚碎肉，于浸泡液中浸泡12h，撈出后以去離子水洗凈后勻漿，加入蒸餾水與果糖并在50°C下保溫，得到金槍魚漿料；浸泡液由以下重量份的原料蒸煮而成:仙草45份、甘草20份、蜂巢14份、野菊花I份、黃秋葵30份與水200份，金槍魚碎肉與浸泡液的質(zhì)量比為1:10 ;金槍魚與蒸餾水、果糖的質(zhì)量比為1:8:3 ;
b)向步驟a)的金槍魚漿料中加入復(fù)合酶A，酶解條件為酶解溫度55°C，保持pH值2.3，酶解時(shí)間4.5h，然后滅酶活，冷卻12000r/min離心2min，收集上清液；調(diào)節(jié)上清液pH至
6.5，加入復(fù)合酶B，反應(yīng)溫度保持在45°C，保持pH值6.5，酶解時(shí)間2h，滅酶活，12000r/min離心2min，收集上清液，得到酶解液；復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:2.2，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:1.7，復(fù)合酶A的加入量為金槍魚漿料重量的0.2%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的0.5% ;酶解時(shí)在外部施加超聲波振動(dòng)，超聲波功率為55kw ; c)將步驟b)得到的酶解液經(jīng)6500Da微濾膜微濾，壓力為45psi，溫度40°C，得到微濾液；
d)在玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為1:2:1.5的活性炭、石墨粉與納米銀，將步驟c)得到微濾液以50mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)10次，然后以12000r/min離心2_4min，收集上清液即為高F值金槍魚寡肽溶液；活性炭的粒度為400目、比表面積1450 m2，石墨粉的粒徑為15 μ m ;循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為0.2T。
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