消融免疫治療的制作方法
【技術領域】
[0001] 本公開一般涉及免疫治療，并且更具體地，涉及用于治療腫瘤和病原體感染組織 的治療方法和組合物。
【背景技術】
[0002] 利用免疫系統(tǒng)的力量來治療慢性感染性疾病或癌癥是免疫治療的主要目標。主動 免疫治療是旨在激活免疫系統(tǒng)以特異性識別并破壞腫瘤或病原體感染細胞的方法。二百多 年來，主動免疫治療的方法已被用來防止大量感染性疾病，包括天花、狂犬病、傷寒、霍亂、 鼠疫、麻疹、水痘、流行性腮腺炎、脊髓灰質(zhì)炎、乙型肝炎和破傷風以及白喉毒素。
[0003]主動免疫治療的概念現(xiàn)被用于開發(fā)以治療現(xiàn)有腫瘤或預防腫瘤復發(fā)以及用于治 療和預防慢性病毒感染為目的的治療性癌癥疫苗。這些技術中很多已被證明成功地開發(fā)了 循環(huán)系統(tǒng)中具有特異性殺死腫瘤或病原體感染細胞能力的提高頻率的免疫細胞。然而，盡 管存在產(chǎn)生抗腫瘤抗原活性的免疫細胞的能力，腫瘤逃逸機制仍能夠壓倒這種免疫應答， 而導致最終的腫瘤進展。
[0004] 經(jīng)顯示，癌癥的主動免疫治療在大量嚙齒動物模型中是非常有效的。然而，人體內(nèi) 多種類型的免疫治療臨床試驗幾十年來令人失望的結(jié)果已經(jīng)表明人體內(nèi)免疫系統(tǒng)無法感 知人類癌癥細胞的威脅/危險，以及同一疾病的嚙齒動物模型的免疫系統(tǒng)。
[0005] 慢性病毒感染也相同。先天性免疫應答能夠減緩病毒復制并能夠激活可觸發(fā)抗病 毒蛋白合成的細胞因子。繼發(fā)性免疫系統(tǒng)中和病毒顆粒并且破壞被感染細胞。但是，病毒 已發(fā)展出一些應對策略以避免免疫攻擊并保持所述免疫系統(tǒng)的活動靶標。
[0006] 有必要提供一種能夠克服腫瘤和病毒免疫逃避機制并且訓練人體免疫系統(tǒng)來感 知導致免疫應答的人體癌癥細胞和病毒感染細胞的威脅/危險的主動免疫治療，所述免疫 應答可根除體內(nèi)中可能位于任何位置的腫瘤或病原體感染細胞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本公開涉用于誘導針對腫瘤或病原體的全身性、繼發(fā)性免疫應答的方法和組合 物。所述方法采用同種異體細胞治療與用于使腫瘤或病原體感染組織進行細胞窘迫的方法 相結(jié)合，從而導致了腫瘤特異性抗原或病原體特異性抗原的釋放。
[0008]-方面，本公開為一種用于誘導針對受試者體內(nèi)腫瘤或病原體的繼發(fā)性免疫應答 的方法。該方法包含以下步驟：（1)將同種異體細胞的等分試樣給藥至患有癌癥或感染性 疾病的受試者，該同種異體細胞被設計為以誘導抗同種異體Thl免疫的方式被受試者免疫 系統(tǒng)所排斥；(2)允許約7-14天的時間形成抗同種異體Thl免疫記憶后，以引起受試者體 內(nèi)至少一部分所述腫瘤或感染組織死亡（優(yōu)選通過壞死）的消融方法（例如，通過諸如但 不限于如電穿孔、冷凍消融、化學治療、放射治療、超聲治療、乙醇化學消融、微波熱消融、射 頻能量或其組合的方法）對同一受試者體內(nèi)可及的腫瘤病灶或病原體感染組織進行原位 消融；然后，（3)在病灶內(nèi)注射同一同種異體細胞的第二等分試樣（如用于預致敏的相同細 胞）（優(yōu)選地在消融步驟之后2-24小時），建立作為攝取抗原和響應于壞死或細胞凋亡組織 的宿主抗原呈遞細胞（即，樹突細胞）的繼發(fā)成熟的佐劑的免疫應答。然后來自病灶的成 熟抗原呈遞細胞迀移至淋巴結(jié)，并刺激全身性抗腫瘤或抗病原體免疫。另一方面，可以省略 所述預致敏步驟。對來自腫瘤或病原體感染的組織進行原位消融，然后在所述消融后，將所 述同種異體細胞的等分試樣進行注射以建立所期望的免疫應答。
[0009] 另一方面，本公開包含一種用于患者的針對抗腫瘤或病原體的疫苗。所述疫苗包 含抗原性組合物，所述抗原性組合物包含來自所述腫瘤或病原體的抗原性物質(zhì)和同種異體 細胞的等分試樣，其中向患者給藥抗原性組合物建立了排斥反應并刺激了對于抗原的遲發(fā) 型過敏性反應，從而在所述患者體內(nèi)作為刺激全身性抗腫瘤或抗病原體免疫的佐劑。所述 疫苗還可包含預致敏組合物，其中所述預致敏組合物包含同種異體細胞的等分試樣。
[0010] 另一方面，本公開包含一種給患者接種疫苗的方法。所述方法包含以下步驟：（1) 向患有癌癥或感染性疾病的受試者給藥預致敏組合物，所述預致敏組合物包含被設計為以 誘導抗同種異體Thl免疫的方式被所述受試者免疫系統(tǒng)所排斥的同種異體細胞的等分試 樣；（2)允許約7-14天的時間在所述受試者體內(nèi)發(fā)展抗同種異體Thl免疫記憶后，注射（優(yōu) 選以皮內(nèi)方式）含有腫瘤抗原或病原體抗原（例如減毒病毒、腫瘤溶菌產(chǎn)物、熱休克蛋白） 來源的抗原性組合物，優(yōu)選地含有來自同一個體的感染或癌性組織的自體溶菌產(chǎn)物，所述 溶菌產(chǎn)物優(yōu)選含有伴侶蛋白，并且所述溶菌產(chǎn)物由同種異體細胞的等分試樣（用于對患者 進行預致敏的相同細胞）配制，從而建立排斥反應并刺激對作為刺激全身性抗腫瘤或抗病 原體免疫的佐劑的同種抗原的遲發(fā)型過敏反應。另一方面，所述方法可在沒有預致敏步驟 的情況下實施。
[0011] 另一個方面，本公開包含用于治療患者體內(nèi)腫瘤或病原體的治療性組合物，其包 含原位生成的腫瘤抗原或病原體抗原以及同種異體細胞，其中所述同種異體細胞和原位生 成的抗原引發(fā)免疫應答，由此所述患者的抗原呈遞細胞的繼發(fā)成熟全身性刺激抗腫瘤或抗 病原體免疫。所述腫瘤抗原或病原體抗原是從所腫瘤或病原體感染組織的壞死處原位生成 的。所述治療性組合物還可包含含有同種異體細胞的預致敏組合物。所述預致敏組合物和 所述抗原性組合物中可包含約IXIO8到約1X10 個細胞的所述同種異體細胞。
[0012] 另一方面，本說明書包含用于治療患體內(nèi)的腫瘤或病原體的疫苗組合物，其包含 原位生成的抗原和同種異體細胞，所述原位生成的抗原包含腫瘤抗原或病原體抗原，其中 在原位生成抗原的存在下向患者注射同種異體細胞來建立免疫應答，由此所述患者的抗原 呈遞細胞的繼發(fā)成熟全身性刺激抗腫瘤或抗病原體免疫。所述組合物中的所述腫瘤抗原來 源于腫瘤的原位壞死。所述組合物中的所述病原體抗原來源于所述病原體感染組織的原位 壞死。所述組合物還可以包含含有同種異體細胞的預致敏組合物。所述預致敏組合物和所 述疫苗組合物中可包含約IXIO8和約IX10 個細胞的所述同種異體細胞。
[0013] 另一方面，本公開包含給患者接種疫苗的方法。所述方法包含以下步驟：（1)向 患有癌癥或感染性疾病的受試者給藥預致敏組合物，所述預致敏組合物包含被設計為以誘 導抗同種異體Thl免疫的方式被所述受試者免疫系統(tǒng)所排斥的同種異體細胞的等分試樣； (2)允許約7-14天的時間在所述受試者體內(nèi)發(fā)展抗同種異體Thl免疫記憶后，對所述腫瘤 或病原體感染組織進行原位消融以釋放腫瘤抗原或病原體抗原；（3)給藥同種異體細胞的 組合物（用于對所述患者進行預致敏的相同細胞），從而建立排斥反應和刺激對作為刺激 全身性抗腫瘤或抗病原體免疫的佐劑的同種抗原的遲發(fā)型過敏反應。另一方面，所述方法 可在沒有預致敏步驟的情況下實施。
【具體實施方式】
[0014] 本公開包含一種用于刺激患者體內(nèi)抗腫瘤或抗病原體免疫的方法。所述方法包含 首先對患者進行"預致敏"以通過輸注同種異體細胞的等分試樣而發(fā)展Thl抗同種異體抗 原免疫記憶。理想的是，同種異體細胞的輸注刺激患者的免疫系統(tǒng)對所述同種異體細胞發(fā) 生反應。在患者的免疫系統(tǒng)得以形成抗同種異體記憶之前可允許經(jīng)過一定時間。在一些實 施方案中，患者可能需要同種異體細胞的加強針（booster)以發(fā)展出適當?shù)腡hl免疫記憶。
[0015] 本文所采用的患者不僅包含小鼠，也包含人類。本文所采用的Thl應答是指產(chǎn)生 可激活T細胞和巨噬細胞的細胞因子譜（cytokineprofile)。Thl應答與Th2應答不同， Th2應答主要激活依賴于抗體的免疫應答并且與Thl應答是相對立的。
[0016] 在患者發(fā)展了足夠的抗同種異體Thl免疫記憶之后，下一步驟包含在腫瘤床或病 原體感染組織內(nèi)的細胞損傷和/或死亡。組織損傷或死亡釋放細胞組分并募集清除細胞至 損傷部位。在組織損傷或組織死亡過程中由壞死引起的細胞組分的釋放對原位生成腫瘤或 病原體抗原是關鍵的?，F(xiàn)有技術知曉在瘤床或病原體感染組織內(nèi)引起組織損傷或死亡的多 種方法。優(yōu)選由可以引起將清除細胞募集至損傷部位的壞死而導致的死亡。在一些優(yōu)選的 實施方案中，組織死亡或損傷通過冷凍消融或通過不可逆電穿孔?？蛇x地，對組織進行離體 消融，并將釋放的組分注射到患者體內(nèi)。
[0017] 清除細胞，包含未成熟樹突狀細胞，可以拾?。╬ickup)從受損或死亡組織中釋放 的抗原。為了引起用于抗原Thl免疫的預致敏的樹突狀細胞（DC)的成熟，將同種異體細胞 的第二等分試樣以病灶內(nèi)方式進行注射。病灶內(nèi)方式是指通過注射或其他方式直接將本發(fā) 明的組合物給藥至癌性區(qū)域或腫瘤或病原體感染組織內(nèi)。在優(yōu)選的實施方案中，所有給藥 至患者的同種異體細胞來自相同來源。優(yōu)選地，在組織消融后約2至約24小時之間給藥同 種異體細胞。該方法尤其適用于實體或轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療，具體地在患有位于前列腺、乳 腺、骨、肝、肺或腎的腫瘤病灶的患者。
[0018] 對于患者理想的是，基于引入同種異體細胞的第二等分試樣而導致由于患者已經(jīng) 通過引入第一等分試樣而預致敏了