一種從蛇床子中提取、分離純化歐前胡素和蛇床子素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從蛇床子中提取、分離純化歐前胡素和蛇 床子素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛇床子為傘形科蛇床屬植物蛇床a/o/Mieri(L. )Cuss.的干燥成熟果 實，具有溫腎壯陽、散寒祛風(fēng)、燥濕殺蟲等功效。蛇床子中的化學(xué)成分以香豆素、揮發(fā)油為 主，已報道的香豆素有蛇床子素、歐前胡素等，其中蛇床子素是主要活性成分，含量占總香 豆素的60%左右，是蛇床子及相關(guān)制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)。藥理研究表明蛇床子有抗炎、 抗誘變、抗菌、抗腫瘤、抗心律失常、抗骨質(zhì)疏松、抗艾滋病、降壓等作用。據(jù)文獻(xiàn)報道，分離 純化蛇床子香豆素的方法主要有反復(fù)硅膠柱層析法及高速逆流色譜法，硅膠柱層析法的操 作過程繁瑣，回收率較低，經(jīng)常使用氯仿、苯等毒性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑；在高速逆流色譜法中 溶劑系統(tǒng)的選擇比較困難，缺乏理論指導(dǎo)。因此，建立一種高效快速的提取、分離純化蛇床 子香豆素的方法對于深化蛇床子的藥理作用研究及完善質(zhì)量控制體系均具有重要的意義。 本發(fā)明提供了一種高效、快速、簡便的從蛇床子中提取、分離純化歐前胡素和蛇床子素的方 法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種高效、快速、簡便的從蛇床子中提取、分離純化歐前胡 素和蛇床子素的方法。
[0004]本發(fā)明的方案如下： 從蛇床子中提取、分離純化歐前胡素和蛇床子素的方法，其步驟為： (1)蛇床子香豆素的提取：將蛇床子藥材粉碎，用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，過濾，提取液經(jīng)減 壓濃縮得粗提物。
[0005](2)蛇床子香豆素的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對粗提物的組成進(jìn)行分 離分析，色譜柱為C1S柱（250mmX4.6mmI.D.，5ym)，流動相為甲醇-水（67:33，V/V); 流速為1. 〇mL/min，檢測波長為254nm，柱溫為室溫。
[0006](3)蛇床子香豆素的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對粗提物中的成分進(jìn) 行分離純化，色譜柱為(：18柱（250 11111^25.4 1111111.0.，10 11111)，流動相為甲醇-水（70:30， V/V)，檢測波長為254nm，柱溫為室溫。根據(jù)色譜圖手動收集目標(biāo)組分餾分，減壓濃縮除去 溶劑。
[0007](4)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶 解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，色譜條件見步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的 純度都達(dá)到了 98%以上。經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是歐前胡素和蛇床子素。
[0008]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取方法為冷浸、超聲和加熱回流(優(yōu)選 加熱回流)。
[0009] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取溶劑為甲醇、乙醇、石油醚和乙酸乙 酯(優(yōu)選乙醇)。
[0010] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取用乙醇-水溶液的濃度為30-95% (優(yōu)選85%)。
[0011] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取時溶劑的用量為6-12倍量(優(yōu)選8 倍量)。
[0012] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取次數(shù)為2-5次(優(yōu)選4次)。
[0013] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1)提取時間為1-3小時(優(yōu)選2小時)。
[0014] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（2)高效液相色譜分離分析所用甲醇的濃度 為 65%-70% (優(yōu)選 67%)。
[0015] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（3)半制備型高效液相色譜分離純化所用甲 醇的濃度分別為65%-75% (優(yōu)選70%)。
[0016] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（3)分離純化用甲醇-水溶液進(jìn)行洗脫，洗 脫液的流速為20-30mL/min(優(yōu)選25mL/min)。
[0017] 本發(fā)明涉及一種從蛇床子中提取、分離純化歐前胡素和蛇床子素的方法，步驟為： (1)蛇床子香豆素的提取：將蛇床子藥材粉碎，用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，過濾，提取液經(jīng)減壓濃 縮得粗提物。（2)蛇床子香豆素的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對粗提物的組成進(jìn)行 分離分析，色譜柱為C1S柱（250謹(jǐn)X4.6謹(jǐn)I.D.，5ym)，流動相為甲醇-水（67:33，V/ V);流速為1.0mL/min，檢測波長為254nm，柱溫為室溫。（3)蛇床子香豆素的分離純化：用 半制備型高效液相色譜儀對粗提物中的成分進(jìn)行分離純化，色譜柱為C1S柱（250mmX25. 4 mml.D.，10ym)，流動相為甲醇-水（70:30，V/V)，檢測波長為254nm，柱溫為室溫。根 據(jù)色譜圖手動收集目標(biāo)組分餾分，減壓濃縮除去溶劑。（4)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定： 將每一個目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，色譜 條件見步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的純度都達(dá)到了 98%以上。經(jīng)核磁共振波譜分析 2種化合物分別是歐前胡素和蛇床子素。該工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴(yán)重危害，綜合成 本低。
[0018] 本發(fā)明從蛇床子中提取、分離純化歐前胡素和蛇床子素，首先85%乙醇加熱回流 提取使香豆素類成分溶出，可以使強(qiáng)極性成分不被溶出；接下來用分析型高效液相色譜儀 對提取物的組成進(jìn)行分離分析；然后，用半制備型高效液相色譜儀對提取物中的成分進(jìn)行 分離純化就可以得到2種化合物；最后，用高效液相色譜法對化合物的純度進(jìn)行測定，根據(jù) 核磁共振波譜分析對化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。該方法所得目標(biāo)化合物純度高，雜質(zhì)含量極 低，這一點可從圖3至圖4中看出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢： (1)用85%乙醇加熱回流提取蛇床子中的香豆素類成分是利用了"相似相溶"的原理， 蛇床子香豆素的極性較弱，因此在85%乙醇中的溶解度最大，溫度升高，溶解度增大。同時 水溶性雜質(zhì)（如糖類成分等）溶出較少，不僅提高了提取效率，而且可以使粗提物盡可能純 凈，最大程度降低了制備型C1S柱被污染的程度。
[0019] (2)用高效液相色譜法對蛇床子粗提物的組成進(jìn)行分離分析，用甲醇-水作流動 相等度洗脫可以在短時間內(nèi)對2種目標(biāo)化合物實現(xiàn)基線分離。
[0020] (3)用半制備型高效液相色譜法對化合物進(jìn)行分離純化，可以得到2種高純度單 體化合物，方法操作簡單，效率高，工藝周期短，節(jié)省試劑，降低了生產(chǎn)成本。
[0021] (4)用高效液相色譜法對制備所得化合物的純度進(jìn)行測定，該方法準(zhǔn)確、快速。
[0022] (5)提取、分離、純化過程中僅用到乙醇、甲醇和水，不使用對環(huán)境和人體危害大的 氯仿、苯等有機(jī)溶劑，乙醇提取液、甲醇_水洗脫液經(jīng)減壓蒸餾回收后可以重復(fù)使用多次， 綠色環(huán)保。
[0023] (6)優(yōu)化了層析方法的條件(洗脫液的組成和流速)，使化合物的純度和純化效率 都大為提尚。
【附圖說明】
[0024]圖1是蛇床子粗提物的分析型高效液相色譜圖。
[0025]圖2是蛇床子粗提物的半制備型高效液相色譜圖。
[0026]圖3是歐前胡素的高效液相色譜圖及紫外光譜圖。
[0027]圖4是蛇床子素的高效液相色譜圖及紫外光譜圖。
[0028] 在圖1-4中，I:歐前胡素；II:蛇床子素。
【具體實施方式】
[0029] 下面結(jié)合實施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實 施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用試劑均購自濟(jì)南試劑總廠，所用水為去離子 水。
[0030] 實施例：從蛇床子中提取、分離純化歐前胡素和蛇床子素的方法，其步驟為： (1)蛇床子香豆素的提?。簩⑸叽沧铀幉姆鬯椋?倍量85%乙醇加熱回流提取4次， 每次2小時，過濾，將乙醇提取液合并，減壓濃縮得粗提物。
[0031] (2)蛇床子香豆素的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對粗提物的組成進(jìn)行分 離分析，色譜柱為C1S柱（250mmX4.6m